ALDH2在丙酸睾酮诱导的前列腺组织中的表达

王 皓，冯岳龙，杨 玲，张 强，高 裕，李培军

随着我国老龄人口的比重增加，据不完全统计，我国60岁以上人口已达到2.54亿，预计30年后将超过4亿，目前其已占据人口总数的17%，越来越突出的人口老龄化必将成为我国特别关注的公共卫生问题。在老龄人口中，前列腺增生症越来越普遍，前列腺增生虽然是良性疾病，但依然给我们的老年患者造成了很大的医疗负担。在临床工作中，尤其是泌尿外科中老年门诊患者中，绝大多数正遭受着前列腺增生疾病所带来的难以忍受的痛苦，目前对于前列腺增生疾病的研究受到了越来越多的重视[1]。对于前列腺疾病的治疗，目前的诊疗手段有限，主要集中在药物和手术的治疗。虽然对于前列腺增生手术的方式不断革新[2]，但是前列腺增生疾病的绝对有效治疗仍令科研工作者及临床工作者举步维艰。所以，对于前列腺增生疾病的机制研究已迫在眉睫。研究发现，前列腺增生的病理特点是其间质和上皮细胞的非肿瘤性增生所致[3]。研究表明，间质和上皮细胞的这种持续性的增殖状态在基础研究中是因为这些细胞的无序增殖和凋亡，乙醛脱氢酶2(ALDH2)在细胞的增殖和凋亡中起到了很重要的作用[4-5]。然而，对于ALDH2蛋白在前列腺增生疾病的机制研究中鲜见报道。因此，本课题组拟采用丙酸睾酮诱导建立前列腺增生SD鼠模型，探讨ALDH2在丙酸睾酮诱导的前列腺组织中的作用，并对其机制进行探索，为ALDH2在以后前列腺增生的临床治疗中提供新思路。

1 材料和方法

1.1 动物来源及分组:SD雄性大鼠(6周龄)12只，按照随机原则，分为模型组(n=6)和对照组(n=6)，大鼠(SPF级)均由宁夏医科大学动物实验中心提供。

1.2 试剂和仪器:丙酸睾酮购自上海通用药业，ALDH2抗体、二抗等购自博士德公司，免疫组化试剂盒等购自北京中杉金桥公司。

1.3 细胞模型的构建及制备:模型组大鼠连续4周皮下注射丙酸睾酮2.5 mg/(kg·d)[6]，对照组大鼠连续4周给予同等剂量的生理盐水。4周后，在无菌条件下解剖大鼠前列腺组织。前列腺组织一分为二，右侧置于-80 ℃保存。

1.4 免疫组织化学染色方法:常规烤片4 h，分别经过二甲苯和无水乙醇的梯度脱蜡和脱水，枸橼酸钠抗原修复，依次添加ALDH2一抗、二抗，DAB显色。苏木精复染、脱水、封片。

1.5 蛋白印迹检测方法:提取蛋白后-80℃保存。将蛋白进行电泳分离以及转膜，添加ALDH2抗体、β-actin室温摇床孵育，添加二抗(山羊抗兔)室温摇床孵育，添加化学发光底物曝光。

2 结果

2.1 免疫组织化学染色:ALDH2蛋白在前列腺上皮细胞中的表达，见图1(封二)。

2.2 蛋白印迹检测:模型组ALDH2蛋白表达量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见图2(封二)。

3 讨论

良性前列腺增生(BPH)是发生在老年男性患者中一种常见疾病，在组织结构方面，前列腺的基质细胞以上皮细胞增生为主，临床症状以尿频、尿急、尿等待、尿不尽为主。近年来，其发病率有升高趋势。约70%以上的老年患者遭遇此疾病的困扰，严重影响着中老年男性的身体健康及生活质量，目前在临床上对于前列腺增生疾病的治疗主要以手术为主，然而手术治疗后复发概率较高[7]。因此，前列腺增生疾病的基础机理和发病机制对于预防和治疗前列腺增生疾病显得尤为重要。目前研究发现，前列腺增生发病的机理是细胞增殖与凋亡的紊乱，同时还有其他因素，如激素的异常分泌、多肽生长因子、氧化应激状态以及炎性信号通路等，但是其具体的发病机制尚不明确[8]。

ALDH是一组NAD(P)+依赖性酶，目前已发现19种，其中ALDH2是所有目前发现同工酶中生物活性最高的，其对于体内醛类物质的代谢起到了主要的作用。ALDH2是存在于细胞的能量工厂线粒体中的，位于染色体12q24.2，可以编码为517个氨基酸残基组成的蛋白质。研究发现，ALDH2在心肌细胞中具有抑制活性氧的集聚以及抗凋亡的功能[9]。此外，ALDH2在乙醛诱导的心肌细胞中呈高表达，可以明显抑制其凋亡，同时在缺氧再灌注的心肌细胞中也呈高表达，抑制心肌细胞的凋亡。还有研究发现，ALDH2的表达升高，可以明显提高酶的生物活性[10]。本实验中免疫组织化学染色法发现模型组前列腺上皮细胞ALDH2呈高表达，蛋白印迹实验发现在模型组ALDH2的蛋白表达量明显高于对照组。

根据文献报道，ALDH2酶是急性酒精中毒的保护因子，其在因酒精导致细胞损伤的治疗中具有很大的应用前景，主要是因为ALDH2抑制了心肌细胞的凋亡[11]。与此同时，ALDH2在糖尿病大鼠的心肌细胞损害时其通过抑制心肌细胞的凋亡起到保护作用[4]。有研究报道称，ALDH2具有抗氧化应激的作用，能使外周血的单核细胞减少损伤和延迟凋亡[12]。本实验研究结果表明，模型组前列腺上皮细胞增生，ALDH2过表达，从而可间接推测前列腺上皮细胞的增生可能与ALDH2的高表达关系密切，ALDH2的高表达对于前列腺增生的发生起到了一定的促进作用。