CTD-ILD患者外周血清IL-6、TNF-α和IFN-γ的研究*

张丹丹 王君丽 曾华东

间质性肺疾病（interstitial lung disease，ILD）是由不同致病因素引起的免疫病理过程中不同的非肿瘤、非感染性肺弥漫性疾病组[1]。到目前为止，在临床上发现大约1 000 个ILD 类型[2]。结缔组织病（connective tissue disease，CTD）属于由自身免疫系统异常引起的机体损伤性疾病，其中ILD 是常见的CTD 并发症之一[3-4]，易导致肺功能衰竭甚至死亡[5]。CTD-ILD 的发病过程表现为逐渐加重，临床症状不典型，所以诊断很困难。肺活检是诊断ILD 的常用方法，但活检创伤大，材料有限[6]。高分辨率CT（high resolution CT，HRCT），即HRCT影像学特征早期表现不典型，易误诊[2]。因此，寻找特异性血清标志物对CTD-ILD 的诊断和治疗具有重要的临床意义。本研究通过探讨CTD-ILD 患者血清肺表面活性物质白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）及γ 干扰素（interfereron-γ，IFN-γ）水平与正常人的差异，预测ILD 病情，为临床诊断和治疗提供试验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2019 年1 月-2021 年12 月在南方医科大学深圳医院风湿免疫门诊就诊的30 例CTD 患者（CTD 组）和呼吸科、ICU 的30 例CTDILD 患者（CTD-ILD 组）的临床资料，纳入标准：所有患者均在入院第二天行胸部HRCT 检查；CTD组均符合CTD 的诊断标准；CTD-ILD 组均符合ILD的诊断标准。排除标准：妊娠；合并肺部急性感染；合并肺结核；肺部病灶可能是由环境、物理因素、药物因素、吸烟等因素引起；伴有其他血液系统、消化系统恶性肿瘤；情感障碍；血液学指标异常。收集同时间段在本院门诊就诊的30 例健康体检者为正常对照组。纳入标准：既往无ILD 及CTD 病史的健康体检者。排除标准：妊娠；合并肺部急性感染；合并肺结核；伴有其他血液系统、消化系统恶性肿瘤；情感障碍；血液学指标异常。本研究已经医院伦理委员会批准，研究对象及其家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法（1）肺功能检查：使用耶格MasterSreen全自动肺功能测试仪检测肺间质病变患者的肺功能，包括通气功能和弥散功能。收集CTD-ILD 组患者的FEV1占预计值的百分比（FEV1%pred）及DLCO 占与预计值的百分比（DLCO%pred）。（2）影像学检 查：使GE Discovery CT750 HD 螺 旋CT 做CT 扫描。扫描方向：头足扫描。扫描范围：肺尖到肺底。扫描方式：螺旋扫描。CT 扫描参数为120 kV，200 mA。扫描层厚为1 mm，层间距为5 mm，准直宽度40 mm。（3）细胞因子检测：收集所有患者及正常对照组外周静脉血5 mL 在EDTA 抗凝管。检测细胞因子IL-6、TNF-α 及IFN-γ，由本院检验科协助完成，采用人Th1/Th2 亚群检测试剂盒（流式荧光法，江西诺德医疗器械有限公司）进行检测，具体操作参照产品说明书。

1.3 统计学处理 本研究采用SPSS 21.0 统计软件进行。计量资料用（）表示，两组计量数据比较采用t 检验，多组数据之间采用单向方差分析；细胞因子与肺功能指标之间采用相关性分析；计数资料以率（%）表示，比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组临床资料比较 CTD 组年龄30～58 岁，病 程6 个 月～15 年，其 中7 例类风湿关节 炎（rheumatoid arthritis，RA），11 例系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE），7 例多发性肌炎/皮肌炎（polymyositis/dermatomyositis，PM/DM），5 例燥综合征（Sjogren’s syndrome，SS）。CTDILD 组年龄27～76 岁，病程1～23 年，其中7 例类风湿关节炎相关间质性肺病（rheumatoid arthritis associated interstitial lung disease，RA-ILD），8 例系统性红斑狼疮相关性间质性肺病（systemic lupus erythematosus associated interstitial lung disease，SLEILD），10 例多发性肌炎/皮肌炎相关性间质性肺病（polymyositis/dermatomyositis associated interstitial lung disease，PM/DM-ILD），5 例干燥综合征相关性间质性肺病（Sjogren’s syndrome associated interstitial lung disease，SS-ILD）。三组的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。

表1 三组性别、年龄比较

2.2 三组血清IL-6、TNF-α 及IFN-γ 水平比较 CTD-ILD 组 和CTD 组的 血清IL-6、TNF-α 及IFN-γ 水平均高于正常对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；CTD-ILD 组的血 清IL-6 和TNF-α水平均高于CTD 组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；CTD-ILD 组和CTD 组的IFN-γ 水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 三组血清IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比较[pg/mL，（）]

表2 三组血清IL-6、TNF-α及IFN-γ水平比较[pg/mL，（）]

*与CTD-ILD 组比较，P＜0.05；#与CTD 组比较，P＜0.05。

2.3 不同原发疾病类型CTD-ILD 患者血清IL-6、TNF-α、IFN-γ 水平和肺功能比较 不同原发疾病类型CTD-ILD 患者血清IL-6、TNF-α、IFN-γ水平和FEV1%pred、DLCO%pred 水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 不同原发疾病类型CTD-ILD患者血清IL-6、TNF-α及IFN-γ水平和肺功能比较（）

表3 不同原发疾病类型CTD-ILD患者血清IL-6、TNF-α及IFN-γ水平和肺功能比较（）

2.4 CTD-ILD 患者的血清IL-6、TNF-α 及IFN-γ 水平与FEV1%pred、DLCO%pred 的相关 性 CTD-ILD 患者外周血清IL-6、TNF-α 水平与FEV1%pred、DLCO%pred 均呈负相关（P＜0.05）；IFN-γ 水平与FEV1%pred、DLCO%pred 均无相关性（P＞0.05）。见表4。

表4 CTD-ILD患者的血清IL-6、TNF-α及IFN-γ水平与FEV1%pred、DLCO%pred的相关性

3 讨论

ILD 是各种CTD 的严重肺部并发症，包括RA和系统性硬化（SSc）等，是引起CTD 患者死亡的主要原因。CTD-ILD 的主要表现是肺部炎症和纤维化，其发病机制尚不清楚。由于CTD-ILD 的原发疾病不同，患者的病理表现多种多样，RA、SLE 和PM/DM 较为常见[7]。近年来，随着HRCT 和肺功能检查的广泛应用，CTD-ILD 的诊断率显著提高[3]，但仍存在一定的漏诊。因此，探索CTD-ILD 患者的血清标志物对诊断和预测病情具有重要作用。

IL-6 由活化的T 淋巴细胞分泌，是一种典型的多效性细胞因子，在宿主防御中起重要作用。当感染或组织损伤发生时，单核细胞和巨噬细胞会迅速产生IL-6，并通过激活免疫、血液学和急性期反应，帮助清除感染因子和修复受损组织。一旦压力从宿主身上消除，IL-6 的合成就会结束，但不受控制的过度或持续的IL-6 生成在各种炎症性疾病和癌症的发展中起着病理作用，这表明IL-6 对宿主来说是一把双刃剑[8]。有研究表明，IL-6 与肺间质纤维化及CTD 密切相关[9-12]，本研究中，CTD-ILD 组和CTD 组的血清IL-6 水平均明显高于正常对照组（P＜0.05），CTD-ILD 组的血清IL-6 水平高于CTD组（P＜0.05）。此外，CTD-ILD 组外周血清IL-6 水平与FEV1%pred、DLCO%pred 均呈负相关（P＜0.05），这表明IL-6 可能参与了CTD 患者ILD 的发生及疾病进展，检测IL-6 水平有助于了解CTD-ILD 患者的肺泡炎症的严重程度。

TNF-α 是单核吞噬细胞分泌的一种炎性细胞因子，与IL-6 结合可促进吞噬细胞的炎症反应[13]，TNF-α 和IL-6 的参与是RA 发病的核心[14-15]，从1999 年抗TNF-α 嵌合单克隆抗体英夫利昔单抗开始，抗TNF 药物是第一批用于RA 治疗的生物制剂[16-18]。在本研究中，CTD-ILD 组和CTD 组的血清TNF-α 水平均高于正常对照组，CTD-ILD组的血清TNF-α 水平高于CTD 组（P＜0.05）。表明TNF-α 对判断CTD 患者是否合并ILD 也有作用。此外，CTD-ILD 患者外周血清TNF-α 水平与FEV1%pred、DLCO%pred 均呈负相关（P＜0.05），这表明与IL-6 相似，TNF-α 也可能参与了CTD 患者ILD 的发生及疾病进展，检测其水平有助于了解CTD-ILD 患者的肺泡炎症严重程度。

IFN-γ 是经典的Thl 型细胞因子，是诱导Th1活化的关键因子，主要由活化的T 细胞和NK 细胞产生，可以抑制Th0 细胞向Th2 转化，并抑制Th2型细胞因子的合成和分泌。IFN-γ 可增强单核-巨噬细胞的杀伤力，提高抗原呈递能力，并且可增强NK 细胞的活性，在炎症反应中起到了重要作用，同时有证据表明，IFN-γ 作为重要的Th1 型细胞因子，参与了CTD 的发病[19-20]。本研究中发现，在CTD 和CTD-ILD 患者血清IFN-γ 水平均高于正常对照组，但在CTD 和CTD-ILD 患者之间无明显差异，与肺功能之间也无明显相关性。这说明，IFN-γ 可能参与了CTD 的发病过程，但对于CTDILD 的疾病进展无提示作用。

综上所述，检测IL-6 和TNF-α 水平有助于了解CTD-ILD 患者的肺泡炎症的严重程度，且IL-6和TNF-α 与肺功能密切相关，对判断和预测CTDILD 病情具有重要的临床指导意义。