液相色谱-串联质谱法对云南省白扁豆中多种农残的质量检测分析*

邓淙友，王闽予，罗文安，谢文凯，官永河，吴辉强，曲丽媛

（广东一方制药有限公司/广东省中药配方颗粒企业重点实验室，广东佛山 528244）

豆科植物白扁豆（Dolichos lablab L.,DLL），在中国和印度等亚非洲地区广泛种植。在传统医学中，白扁豆是经典的药食两用的农作物，其具有一定的健脾理气，化湿消暑的作用，被用来治疗胃肠道疾病。在现代医学中，白扁豆提取物被验证具有抗高胆固醇血症、中毒、胃肠道痉挛、霍乱、呕吐、腹泻的作用，也具有其抗糖尿病、抗炎、镇痛、抗氧化[1-3]、降血脂、杀虫和抗石活性。市面上销售的白扁豆以颗粒饱满、均一，果实干燥，果皮颜色为白色者为佳，而结荚率与产量等息息相关；同时在种植过程中，白扁豆常会产生锈病、叶斑病、蚜虫等病虫害[4]。为保证产量和经济效益，农户常常施以大量的农药或者肥料以保证白扁豆的产量，而这种农药过度使用的现象会导致大量的农药残留。农药残留是影响食品安全的最重要问题之一，随着我国大量农药的禁止，农药残留的风险逐渐降低。然而，仍然可以检测到一些剧毒的农药。目前，应用于农残检测的主要方法有：气相色谱法、高效液相色谱法、电位滴定法、化学法、免疫分析法、毛细管电泳法等，但上述方法灵敏度较低很难达到痕量物质监测。随着GC-MS/MS和UPLC-MS/MS方法的广泛应用，高分辨率质谱筛选方法的高灵敏度和可进行特异性监控的优势使得其成为未来农药监测的发展趋势。基于上，本论文采用固态萃取-UPLC-MS/MS联用技术，通过离子对监测方法对药典规定的33种习用农药建立了监测体系，并对来自云南产地的15批白扁豆进行多农药残留检测。结果表明，氧甲拌磷、氨氟灵和鼠立死为主要检出农药均处于较低的风险水平。

1 材料与方法

1.1 样品采集信息 共采集源于云南省的15批白扁豆样品，并经中国中医科学院中药研究所进行DNA鉴定为为豆科植物扁豆Dolichos lablab L.的干燥成熟种子。

由图5可知，不同pH发酵条件下得到的小麦酱油滋味有明显差异。相比于自然pH发酵的酱油，pH 6.5条件下发酵的酱油鲜味更强，这与其含有更多的谷氨酸有关。二者在咸味上无明显差异，但pH 6.5小麦酱油的苦味更强，自然发酵酱油则在甜味、酸味上更强。pH 6.5小麦酱油的苦味更加强烈，原因不明。

表1 15批次白扁豆样品采集信息

1.2 主要仪器 岛津LC40-8045三重四极杆液质联用仪（日本岛津有限公司）；ME204E型万分之一分析天平、XP26型百万分之一分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；DC12H防腐型12位氮吹仪（ANPEL公司）；MTV-100多管漩涡混合仪（杭州奥盛仪器有限公司）；LXJ-ⅡC型低速台式大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）；Milli-Q超纯水装置（美国默克公司）

1.3 试剂PRiMEHLB固相萃取柱（美国Waters公司）；提取试剂包（迪马科技有限公司，6g无水硫酸镁、1.5g醋酸钠）、乙腈（色谱纯：赛默飞公司）、丙酮（分析纯：广州化学试剂厂）、正己烷（色谱纯：天津市科密欧化学试剂有限公司）、乙酸乙酯（分析纯：西陇科学股份有限公司）、日本岛津526种农药混标套装，货号：380-03586-A（526种农药混标套装）。乙酸（分析纯：西陇科学股份有限公司）；其余试剂均为分析纯；水为超纯水。

1.4 溶剂配制 对照品贮备溶液的制备精密称取适量的农药对照品，分别用乙腈配制成浓度为1g/L的对照品的溶液，于-20℃保存备用。

2.2 方法学验证 精密量取上述各对照品贮备液适量，配制成混合标准品溶液，测定标准曲线。各标准曲线线性关系良好，线性系数（r）均在99%以上，检出限范围在0.0002～0.03（mg/kg）之间，可满足标准定量范围0.005～0.1（mg/kg）的测定。以白扁豆药材作为空白基质，进行基质加标回收率实验，分别取6份样品进行测定，加样回收率均在70.3%～127.4%之间，RSD均在24.6%之内，基本满足白扁豆中中农药残留分析的要求，具体结果见表4。

综上所述,本研究发现排除明显的眼底疾病对视网膜厚度的影响,术前CV较大,CAT较厚的白内障患者在术后获得更好的视力,而CST因其变异程度较高,误差较大,本研究未发现其与白内障术后最佳矫正视力的相关性。所有因素包括年龄都会影响黄斑视网膜神经纤维的厚度,即黄斑视网膜厚度。这会进一步影响黄斑部视网膜功能,最终影响中心矫正视力。这些细微的变化往往不会被肉眼或其他检查发现。因此SD-OCT术前对黄斑部视网膜厚度的测量,包括CV和CST的测量可以在术前对白内障术后的最佳矫正视力有一定的预估作用,从而为选择人工晶状体提供可靠有力的依据。[4]OCT可以作为在黄斑区视网膜功能和术后视力的准确评估的重要方法。

1.6 LC-MS/MS检测条件

生态建设涉及多行业多部门,强化地方生态建设部门的组织体系,加强多部门的协调统一,形成合力,在统一规划的基础上，使各部门的生态建设投资按照“渠道不乱，用途不变，各投其资，各记其功”的原则，各司其职，各尽其责，集中投入，对水土流失进行规模化综合治理。建议成立京津冀生态建设协调管理机构。

1.4.3 基质混合对照品溶液的制备 分别精密称取6份空白基质，每份3.0g，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4mL，临用前用已经配制成浓度分别为5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L与400μg/L的系列基质混合对照品溶液。

1.6.2 质谱条件 以三重四极杆串联质谱仪检测；离子源为电喷雾离子源，依据表3选择正离子或负离子扫描模式。监测模式为多反应监测，各化合物保留时间、监测离子对的参考值见表3。为提高检测灵敏度，可根据保留时间分段监测各农药。

1.4.2 混合对照品溶液的制备 精密移取上述各对照品贮备液适量，用含0.05%醋酸的乙腈分别制成浓度为l00μg/L和1000μg/L的混合对照品溶液，于-20℃保存备用。

表2 梯度洗脱表

1.6.1 色谱条件[5]以十八烷基硅烷键合核壳硅胶为填充剂（柱长15cm，内径为3mm，粒径为2.7μm）；以0.05%甲酸溶液（含10mmol/L甲酸铵）为流动相A，以0.05%甲酸的甲醇溶液（含10mmol/L甲酸铵）为流动相B，按下表2进行梯度洗脱；柱温为35℃，流速为0.4ml/min。

2 实验结果与讨论

2.1 农药质谱条件的摸索 采用多反应监测模式，对522种农药进行质谱方法开发，通过检测定量和定性离子对进行快速分析策略进行样品测定。定性离子对具有该农药的结构特征性片段；定量离子对的响应值和稳定性均符合相应要求。并同时根据该农药的最佳锥孔电压和离子对的碰撞能，具体筛选出来离子对见表3，几个代表性农药质谱图见图1。

1.5 供试品制备 取适量供试品，粉碎成粉末（过三号筛）后，精密称取约3.0g供试品与15mL的1%冰醋酸溶液混合均匀后，放置30min后，精密加入乙腈15mL与内标溶液100μL，快速涡旋振荡5min，加入7.5g的无水硫酸镁与无水乙酸钠混合粉末（4:1），快速涡旋振荡3min，冰水浴10min，离心（4000r/min）5min，弃去沉淀物。取上清液9mL，置已预先装有净化材料的分散固相萃取净化管（无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg，石墨化炭黑90mg）中，快速涡旋振荡5min，离心（4000r/min）5min，精密吸取上清液5ml，氮吹至约0.4mL，加乙腈定容至lmL，涡旋混匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得。

表3 522种农药质谱信息（节选）

图1 代表性农药质谱图

1.4.1 内标贮备溶液的制备 精密称取适量的氘代倍硫磷对照品，用乙腈配制成浓度为1000mg/L的内标贮备溶液，于-20℃保存备用。

在高速公路桥梁施工项目中，伸缩缝的焊接过程非常关键，要从U形钢筋加固开始，有效减少预埋筋和异型钢筋梁加固的不匹配问题，确保锚杆和梁端预埋件焊接拉力和伸缩型钢筋管理焊接整体压力的一致性，从而维护管理项目的基本水平。需要注意的是，技术部门为了有效对后期牢固性和焊缝的饱满性进行约束，就要整合电焊固定效果，确保在一定程度上维护技术结构。

体育课程内容分为课内和课外两部分，对于课内的内容体育教师可以自行把控，但是对于课外的体育锻炼就是处于爱莫能助的状态。在运动手环的帮助下，课外锻炼也变得可控。通过运动手环的GPS定位功能，能够对学生的课外锻炼进行全面情况了解，活动时间、活动范围、活动距离、心率情况等一概能够掌握。

表4 农药含量测定方法学结果

续表

2.3 云南不同产地的白扁豆农药残留样品测定 分别将15批白扁豆的样品进行农药残留分析，具体结果如表所示。在白扁豆中，药典规定的522农药中有18种被检测出残留，分别涵盖了杀虫剂、除草剂、杀菌剂、有机杀螨剂、植物生长调节剂和杀鼠剂[6]，其中：氧甲拌磷（杀虫剂）在各批次中均有检出，氨氟灵（除草剂）在13批次的白扁豆中均有检出，鼠立死（杀鼠剂）在其中9批次的白扁豆中均有检出，检出的农药残留情况如表5所示。

表5 15批次白扁豆中农药残留分布情况

2.4 膳食风险评估 农药残留主要影响食品药品的安全性，《中华人民共和国食品药品安全法》规定食品的生物性、化学性和物理危害性进行评估以作为其膳食安全性指标。在我国，白扁豆种植广泛，年产量和销量逐步上升，2020年白扁豆年产达17.4万吨，云南省为白扁豆的中国主产地之一，也是主要出口产地之一，为准确评估云南省白扁豆的膳食风险。对市面上采集到的来自于云南的15批白扁豆样品进行测定，被主要检测出的氨氟灵对人和牲畜低毒，甲拌磷属于高毒农药。GB2763-2016中指出甲拌磷的每日允许摄入量（ADI值）为0.0007mg/kg b.w，按照最大残留限值0.01mg/kg计算，一个体重60kg的健康成年人，每日摄取大于4.2Kg的白扁豆才可能存在安全风险。

3 结论

本研究通过UPLC-MS/MS联用技术，检测农药特征离子对建立了药典规定的522种习用农药的检测方法，该方法灵敏度高检测迅速，可以满足白扁豆中农药残留的快速检测需求。同时应用该方法检测了来自来自云南省的15批白扁豆样品的农药残留，并针对检测结果进行了膳食暴露风险评估，为白扁豆的食品药品监督管理体系的建立奠定了理论依据。