血清miR-21、缺氧诱导因子-1α水平在带状疱疹患者治疗前后变化及评估后遗神经痛的分析

袁峰 张书力 李少军 李敏 胡焓 童胜雄 田佳玉 冯丹

武汉市第一医院疼痛科（武汉430022）

带状疱疹以身体单侧成簇样水泡、疼痛为主要表现，超过1/3 的人一生中可患上带状疱疹［1-2］。10%～20%的患者经积极治疗后仍存在带状疱疹后遗神经痛，且持续时间较长［3］。有研究显示，早期应用多模式镇痛综合治疗对预防带状疱疹后遗神经痛具有重要作用［4］。而如何早期个体化评估带状疱疹患者后遗神经痛风险，实现精准治疗是临床急需解决问题之一。有研究提出，疱疹病毒可通过影响宿主细胞MicroRNA（miR）产生而逃脱机体免疫监视并攻击机体细胞［5］。miR-21 是目前在周围神经损伤及修复中报道较多且具有关键作用的miRs 家族成员之一［6］。低氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）是一种核转录因子，近年HIF-1α 对神经元保护及修复的作用也已引起广大学者重视［7］。本研究旨在探讨血清miR-21、HIF-1α水平在带状疱疹患者治疗前后变化及对后遗神经痛的评估价值，旨在为临床完善诊疗机制提供参考，报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2019年6月至2022年4月武汉市第一医院带状疱疹患者183 例，随机选取122 例作为训练组创建模型，另61 例作为验证组评判模型，同时选取健康体检者61 例作为对照组。训练组男68 例，女54 例，年龄26～74 岁，平均（52.36 ± 9.68）岁。验证组男33 例，女28 例，年龄24～75岁，平均（52.73±10.08）岁。对照组男34例，女27 例，年龄25～74 岁，平均（51.85 ±10.31）岁。三组一般资料差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。

纳入标准：（1）符合带状疱疹诊断标准［8］；（2）首次发病且入组前未经相关治疗；（3）对照组体健；（4）知情研究内容，签署同意书。

排除标准：（1）其他感染性疾病；（2）肿瘤；（3）入组前3 个月内有免疫抑制药物、生物制剂、激素应用史。

1.2 方法

1.2.1 miR-21、HIF-1α 检测训练组、验证组治疗前及治疗1 周时、对照组入组时均采用非抗凝真空管采集晨空腹肘静脉血4 mL，离心取上层血清。实时荧光定量PCR 法测miR-21 水平，酶联免疫法测HIF-1α 水平，试剂盒均购自北京华安麦科生物技术有限公司。

1.2.2 训练组、验证组治疗方法根据患者病情指导服用泛昔洛韦、甲钴胺片；晚睡前服加巴喷丁，此后根据患者疼痛情况适宜增量，但最大剂量不超过1.8 g/d。疱液未破时可外用炉甘石洗剂，若疱疹破溃可酌情用硼酸洗液湿敷，或外用0.5%新霉素软膏或2%莫匹罗星软膏等。

1.3 观察指标（1）对比训练组治疗前及治疗1周、对照组血清miR-21、HIF-1α 水平。（2）训练组随访1 个月参考《带状疱疹后神经痛诊疗中国专家共识》［9］中标准判定后遗神经痛发生情况，并根据视觉模拟量表（visual analogue scale，VAS）评估疼痛程度0～10 分，≤3 分为轻度疼痛，4～6 分为中度疼痛，≥7 分为重度疼痛，分析影响后遗神经痛的单因素。（3）分析带状疱疹患者发生后遗神经痛的多因素。（4）建立后遗神经痛的Logistic 回归模型，并进行评价。（5）分析血清miR-21、HIF-1α 水平对后遗神经痛的评估价值。

1.4 统计学方法使用SPSS（25.0 for Windows）统计软件。计量资料以（）描述，若具备方差齐性，独立样本t检验两组间差异，不具备方差齐性的采用t′检验，配对t检验训练组治疗前及治疗1 周差异；计数资料以例数（%）描述，采用χ2检验。对单因素分析中P＜0.05 的因素采用向后似然法行多因素logistic 回归分析，建立预测模型，Hosmer-Lemeshow 检验风险模型拟合度。采用MedCalc 11.4 绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析血清miR-21、HIF-1α水平对后遗神经痛的评估价值。以α=0.05 为检验水准。

2 结果

2.1 血清miR-21、HIF-1α 水平训练组治疗前、治疗1 周血清miR-21、HIF-1α 水平高于对照组，训练组治疗1 周血清miR-21、HIF-1α 水平低于同组治疗前（P＜0.05）。见表1。

表1 血清miR-21、HIF-1α 水平Tab.1 Comparison of serum miR-21 and HIF 1 in three groups α Horizontal±s

表1 血清miR-21、HIF-1α 水平Tab.1 Comparison of serum miR-21 and HIF 1 in three groups α Horizontal±s

组别训练组治疗前治疗1 周对照组t（t′）/P（训练组治疗前vs.治疗1 周）t（t′）/P（训练组治疗前vs.对照组）t/P（训练组治疗1 周vs.对照组）例数122 61 miR-21 1.79 ± 0.28 1.43 ± 0.20 1.03 ± 0.16 11.562/＜0.001 23.318/＜0.001 13.591/＜0.001 HIF-1α（ng/L）531.29 ± 63.29 489.65 ± 60.29 426.89 ± 58.97 5.224/＜0.001 10.757/＜0.001 6.687/＜0.001

2.2 分析影响训练组后遗神经痛的单因素训练组122 例患者随访1 个月无脱落病例，训练组出现后遗神经痛21 例。年龄、皮损面积、前驱痛、急性期VAS 评分、初始治疗时间、接受抗病毒治疗、接受抗病理神经痛治疗、治疗前及治疗1 周血清miR-21、HIF-1α 水平与后遗神经痛的发生有关（P＜0.05）。见表2。

表2 分析影响训练组后遗神经痛的单因素Tab.2 Analysis of single factors affecting the residual neuralgia in the training group 例（%）

2.3 后遗神经痛的多因素logistic 回归分析校正年龄、皮损面积、前驱痛、急性期VAS 评分、初始治疗时间、接受抗病毒治疗、接受抗病理神经痛治疗后，血清miR-21、HIF-1α 水平仍为带状疱疹患者发生后遗神经痛的独立影响因素（P＜0.05）。见表3。

表3 后遗神经痛的多因素Logistic 回归分析Tab.3 Multivariate Logistic Regression Analysis of Sequential Neuralgia

2.4 后遗神经痛的logistic 回归模型的建立及评价（1）建立logistic 回归模型：logit（P）=-11.025+1.258×miR-21+1.407×HIF-1α。（2）logistic 回归模型总有效性：似然卡方比=189.64，DF=7，P＜0.001。Wald 检验结果显示Wald χ2= 302.13，DF = 8，P＜0.001。（3）logistic 回归方程的拟合优度检验：经Hosmer-Lemeshow 拟合优度检验显示，χ2= 4.721，DF = 5，P= 0.476。

2.5 血清miR-21、HIF-1α 水平对后遗神经痛的评估价值logistic 回归模型在训练组的AUC 为0.876；验证组中AUC 为0.869。见图1。

图1 血清miR-21、HIF-1α 水平对后遗神经痛的评估价值Fig.1 Serum miR-21，HIF-1α the evaluation value of fMRI in sequela neuralgia

3 讨论

带状疱疹是由水痘-带状疱疹病毒感染所致，随病情进展，此病毒侵犯周围神经造成神经节发炎、坏死［10］。部分带状疱疹患者疱疹消退1 个月后仍存在神经疼痛，即后遗神经痛，且目前尚无针对后遗神经痛的特效药物及手段，而早期预防是医学工作者不断探索的课题。

本研究发现，带状疱疹患者血清miR-21 水平普遍升高。近年越来越多研究显示，mRNAs 还参与神经干细胞分化调控、神经再生及神经系统损伤修复等过程［11-12］。miR-21 是近年研究较多的mRNAs 家族成员之一，在多种实体瘤中高表达，通过抑制肿瘤细胞凋亡而发挥癌基因活性［13］。但外泌体中miR-21 能作为神经性疼痛的治疗靶点，通过促miR-21 生成可减轻创伤时自噬介导的神经损伤［14］。本研究发现，miR-21 水平变化可能与带状疱疹发生有关。miR-21是凋亡因子PDCD4的靶基因，能通过激活染色体10 上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/蛋白激酶B 信号通路下调下游凋亡相关蛋白表达，继而减少神经元凋亡［15］。因此，当带状疱疹发病造成神经损伤时机体可反馈上调miR-21生成以对抗神经损伤。

本研究还发现，带状疱疹患者血清HIF-1α 水平显著升高，治疗后降低。HIF-1α 参与机体缺氧反应且受细胞氧浓度调控，当氧浓度降低时，HIF-1α 表达显著升高以提升细胞缺氧耐受性。有研究证实，联合高压氧治疗带状疱疹后遗神经痛可将总有效率提升至93.3%［16］。本研究发现HIF-1α可能参与带状疱疹发生发展的整个过程。进一步分析发现，年龄、皮损面积、前驱痛、急性期VAS 评分、初始治疗时间、接受抗病毒治疗、接受抗病理神经痛治疗等因素均会影响后遗神经痛的发生，与孟丹等［17］研究结果一致。但本研究采用多因素logistic 回归模型分析发现，校正混杂因素后仅血清miR-21、HIF-1α 水平进入方程。在带状疱疹病毒侵袭神经细胞过程中HIF-1α 可通过转录调控一系列代偿性反应；另外，miR-21 是体内强有力的抗凋亡因子，HIF-1α 的结合位点分布在miR-21 转录起始点上游约2 kb 处，HIF-1α 能通过调节miR-21 转录以调控细胞凋亡活性，体外实验［18］也显示，通过siRNA 沉默HIF-1α 后，细胞缺氧不能使miR-21、HIF-1α 水平升高，进一步验证，病毒感染所致细胞缺氧时miR-21 水平升高主由HIF-1α 介导，而反过来细胞抗凋亡能力得到显著强化时又可反馈下调HIF-1α 表达。

综上所述，带状疱疹患者血清miR-21、HIF-1α异常升高，经治疗后明显下降，且二者水平升高均会增加后遗神经痛发生风险，基于二者水平构建的风险模型具有较高的评估效能。

【Author contributions】YUAN Feng：Conceptualization，Methodology，Writing-Original Draft；ZHANG Shuli，LI Shaojun，LI Min：Investigation，Validation；HU Han，TONG Shengxiong，TIAN Jiayu：Investigation，Formal Analysis；FENG Dan：Supervision，Writing，Review&Editing.All authors read and aplproved the final manuscript.