次氯酸对凡纳滨对虾苗种培育中弧菌半致死浓度的探究

李春岭 张志伟 宋清祥 何雁鸿 马雪彬 高文雅 徐胜利 孙绍永

摘 要：用次氯酸作为消毒剂，在与凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）苗种培育环境接近的条件下，探究其对弧菌（Vibrio）20 h半致死浓度，设定6个次氯酸浓度梯度，分别为0.5、2、5、10、15、25 mg/L，探究其在20 h消毒过程中对弧菌的杀灭效果，以及接近20 h半致死浓度的次氯酸浓度。结果表明，在加入次氯酸第20 h时，5 mg/L试验组致死率达到54.5%，最接近弧菌50%死亡率，其中25 mg/L试验组在第4 h便可达到50%致死率，在第20 h时25 mg/L试验组弧菌致死率达81.6%。

关键词：次氯酸；弧菌（Vibrio）；半致死浓度

次氯酸（HClO）是含氯酸，只在溶液中存在，高浓度溶液为黄色，稀浓度无色，性质极不稳定，有漂白、消毒作用^[1-3]。

弧菌为革兰氏阴性菌，是一种致病菌^[4]，尤其是对凡纳滨仔虾培育、工厂化养殖而言^[5-7]。目前只能依靠使用微生态制剂、抗生素及消毒剂进行防治，但存在微生态制剂效果不尽人意，抗生素易产生耐药性，消毒剂副作用大的缺点，造成苗种病害频发、出成率低。

关于次氯酸在凡纳滨对虾（Penaeus vannamei）苗种培育中使用未见报道，本试验用次氯酸作为消毒剂初次探究其对弧菌（Vibrio）20 h半致死浓度，可为凡纳滨对虾苗种培育过程中对弧菌的防治提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验在黄骅市利泰水产养殖有限公司凡纳滨对虾工厂化育苗车间进行，试验环境接近育苗车间环境，也是为了更好的接近实际生产。试验用水取自正在进行凡纳滨对虾苗种培育的培育池，试验用虾苗与试验用水取自同一培育池。次氯酸由渤海巨翔衡水新材料科技有限公司提供，弧菌琼脂检测平板购买于青岛中仁动物药品有限公司。

1.2 试验设计

试验在1 m³水桶内进行，设置6个试验组（设置次氯酸0.5、2、5、10、15、25 mg/L等6个阶梯浓度）及1个对照组，以此为基础设置3个平行，共计21个水桶。每个桶内均在同一个养殖池内取水，每个桶内投放5 000尾虾苗；内置4个气石充氧，同时有搅水作用，使弧菌均匀分布；投喂时间及投喂量与育苗车间一致，每隔2个小时在桶内取0.2 mL养殖水涂布在弧菌培养皿内进行培养。

1.3 数据处理

培养完成后，记录每个弧菌培养皿上的菌落数量，通过数量对比来反应次氯酸对弧菌的抑制效果，使用Excel对数据进行处理分析。在记录三个平行试验数据时，发现每组平行试验数据相近，遂对每组平行试验数据求平均值后进行分析。

2 结果与分析

试验水直接在培养皿中进行涂布，培养后能清晰查数出菌落个数，故没有对试验水进行稀释涂布。各试验组在定时观察中弧菌数量均有不定程度的减少；对照组弧菌数量有上升趋势。

2.1 各试验组第20 h弧菌死亡数量

将各组试验数据进行分析，弧菌数量逐渐减少，减少量随次氯酸浓度的升高呈上升趋势。投放次氯酸后每隔2小时取样测试一次，在投放次氯酸第2小时采样测试数据中，次氯酸浓度在5 mg/L以上（包含5 mg/L）弧菌数量有减少趋势，0.5 mg/L和2 mg/L浓度组在投放次氯酸后第2小时弧菌变化不明显；在试验进行到第4 h时所有试验组弧菌数量均呈降低趋势明显，在此浓度梯度内，弧菌死亡数量与次氯酸浓度呈正比。第20 h各试验组弧菌死亡数量如图1所示，对照组第20 h弧菌数量增长了26个。

2.2 第20 h各试验组弧菌死亡率

弧菌死亡率随次氯酸浓度的升高而增加，20 h半致死率最接近的浓度为5 mg/L，死亡率为54.5%；10 mg/L试验组死亡率为61.7%；15 mg/L试验组死亡率为70.1%；25 mg/L浓度死亡率为81.6%，此浓度在第4 h致死率就达到50%；除0.5 mg/L和2 mg/L试验组外，其它浓度均在第14 h之后达到50%致死率。弧菌具体死亡率如图2所示。

2.3 不同时间段每组弧菌死亡数量

根据次氯酸浓度不同，每个时间段对弧菌致死量也存在一定差距。在实际生产当中，对消毒速率及持久性有一定的需求，试验最初每隔2 h进行一次采样，在此数据中截取第4 h、第10 h、第16 h和第20 h弧菌致死数据，一是看短期内次氯酸药效发挥，二是看次氯酸持久性的差距，试验表现出在同一时间段内次氯酸浓度越高，弧菌死亡率越高，呈正相关趋势（如图3）。

3 结论

本次试验发现次氯酸对弧菌有较好的杀灭作用并且安全使用范围大，从各个角度分析来看，试验浓度区间呈现出浓度正相关趋势。试验中，每个浓度梯度内的凡纳滨对虾苗种均无死亡现象，从吃食和活动情况来看并未表现出状态异常，试验结束与取苗池中的苗种对比，规格大小无差异，说明并未影响苗种正常生长。0.5 mg/L和2 mg/L浓度次氯酸试验组始终未达到50%致死率，25 mg/L浓度次氯酸试验组在短时间内以及持效性方面均表现良好，每个浓度试验组均表现出不同的弧菌致死效果，最终都能对弧菌有很好的杀灭作用。高浓度次氯酸在短时间内以及长效性均好于低浓度次氯酸，對弧菌杀灭作用表现出浓度依赖性。此次试验初步粗略探究次氯酸的实际消毒效果，后期将继续对其消毒浓度以及对苗种致死浓度进行深度探究，对试验结果再次验证及拓展。

次氯酸具有其它消毒剂比较有四大特点，一是它是人体自身嗜中性白血球吞噬病原菌释放的物质，是抵御外界细菌的成分之一，具有瞬间杀菌能力，不伤害人体，是人类健康天然的安全屏障；二是与微生物接触后，能迅速破坏微生物细胞膜，并摧毁吸附于细胞膜表面上的病毒蛋白质长钉，能使其脱落，无法再传染病菌；三是次氯酸分子在进入细菌内部后会释放出原子状态的氧，原子氧具有极强的氧化性，使微生物活性蛋白变性，丧失生命活力，从而杀灭细菌，任何微生物无法对其产生对抗性和耐药性；四是次氯酸能渗入到细菌及其它微生物内部，分解、破坏微生物的氨基酸、酶系统，进而控制微生物蛋白质的合成，终止微生物的代谢机能，且与微生物及有机物作用后能立即还原为水。

基于以上特點，次氯酸作为一种绿色环保、高效广谱的杀菌剂，既没有生物上的污染，也没有化学上的残留，随着人们对环境及食品安全等级的更高要求，次氯酸将会有更广阔的应用前景。

参考文献：

[1]

张忠亮.次氯酸水在消毒领域的应用及注意事项[J].中国洗涤用品工业，2022（6）：36-40.

[2] 庄建军，林松泉，张声虔，等.次氯酸水在杀菌及果蔬保鲜上的应用[J].现代农业科技，2022（7）：186-190+194.

[3] 闫雷雷，杨涛.次氯酸消毒剂的研究进展及应用[J].中国洗涤用品工业，2022（3）：43-47.

[4] 孟媛媛，刘海泉，潘迎捷，等.副溶血性弧菌免疫逃逸机制研究进展[C]//.中国食品科学技术学会第十八届年会摘要集.2022：314-315.

[5] 李君怡，吴秋平，周疆，等.凡纳滨对虾弧菌病及其防治方法研究进展[J].水产科技情报，2022，49（2）：106-111.

[6] 黄雪敏.凡纳滨对虾育苗系统细菌资源挖掘及溶藻弧菌基因组初步分析[D].湛江：广东海洋大学，2020.

[7] 闫茂仓，王瑶华，胡利华，等.副溶血弧菌特异性卵黄抗体（AHPND-VpIgY）对凡纳滨对虾幼体被动免疫和育苗成活率的影响[J].海洋与湖沼，2019，50（2）：443-448.

The half-lethal concentration of Vibrio in the cultivation of Litopenaeus vannamei seedlings by hypochloric acid

LI Chunling¹， ZHANG Zhiwei¹， SONG Qingxiang²， HE Yanhong³， MA Xuebin¹， GAO Wenya¹， XU Shengli⁴， SUN Shaoyong⁵

（1. Cangzhou Academy of Agricultural and Forestry Sciences， Cangzhou 061000，China; 2. Huanghua Litai Aquaculture Co.， Ltd.，Huanghua  061100，China; 3. Cangzhou Aquatic Technology Promotion Station， Cangzhou 061000，China; 4. Bohai Juxiang Hengshui New Material Technology Co.， Ltd.， Hengshui 053000， China; 5. Fisheries Technology Extention Center of Hebei Province， Shijiazhuang 050035，China）

Abstract：Using hypochlorous acid as a disinfectant， under conditions similar to the cultivation environment of Penaeus vannamei seedlings， the effect of hypochlorous acid on Vibrio was investigated. Six hypochlorous acid concentration gradients were set at 0.5， 2， 5， 10， 15， and 25 mg/L， respectively， to investigate its efficacy in killing Vibrio during the 20 hour disinfection process， as well as the hypochlorous acid concentration close to the 20 hour half lethal concentration. The results showed that at the 20th hour of adding hypochlorite， the mortality rate of the 5 mg/L experimental group reached 54.5%， which was closest to the 50% mortality rate of Vibrio. Among them， the 25 mg/L experimental group reached 50% mortality rate at the 4th hour， and the 25 mg/L experimental group had 81.6% mortality rate of Vibrio at the 20th hour.

Key words：hypochlorous acid;Vibrio; half lethal concentration

（收稿日期：2023-02-10）