尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断价值分析

王鑫 杨柳 王潇翊

（1.商丘市第一人民医院分子生物实验室，河南 商丘 476000；2.商丘市第一人民医院输血科，河南商丘 476000）

巨细胞病毒感染由人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus，HCMV）感染引起，我国为HCMV感染高发地区，多于儿童时期获得。早期多数感染者无明显症状，但先天感染和免疫抑制个体可引起严重疾病，婴幼儿期感染常累及肝脏，故及时诊断对患儿治疗具有重要意义[1]。由于HCMV感染无典型的临床症状，仅靠临床表现无法完全明确诊断，需结合其他方法进行诊断。随着实验室检验技术发展，用于HCMV检测方法也在与时俱进，主要包括血液学检查、尿液检查、脑脊液检查。但由于国内大部分医院并未完全普及病毒分离培养法诊断HCMV感染；同时婴幼儿儿童产生免疫球蛋白（IgM）抗体能力薄弱，使用酶联免疫吸附法检测HCMV-IgM准确率低，而IgM阴性不代表患儿无HCMV感染的可能性[2]。这些因素给HCMV感染的诊断带来了一定难度。

国外有学者认为由于病毒DNA的出现通常早于病毒感染的临床症状或血清学反应，因此，荧光定量PCR技术目前已成为一种能早期、敏感地发现HCMV感染的诊断方法[3]。基于此，本文旨在分析尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2019年7月-2022年8月收治HCMV感染患儿112例为研究对象。112例感染患儿中，男55例，女57例，年龄3d-12 m，平均年龄99.17±10.59d。根据主诉、体格检查及第一临床诊断可将HCMV感染患儿进一步分为肺炎组（n=68）、肝炎组（n=26）及其他组（n=18，主诉主要为发热、腹泻等）。其中肝炎组男36例，女32例，年龄3d-89 d，平均年龄76.53±8.16 d；肺炎组男11例，女15例，年龄30d-210 d，平均年龄（112.43±9.04）d；其他组男8例，女10例，年龄53d-360 d，平均年龄112.43±9.04 d。纳入标准：经临床确诊为HCMV感染；临床相关资料完整；排除标准：合并遗传性疾病者；合并其他器官并发症者；近期使用过抗HCMV药物者。本研究经本院伦理委员会批准，且患者及家属同意本研究。

1.2 方法

1.2.1 尿液HCMV-DNA

早上收集研究对象3-5ml的尿液，放入无菌离心管中，离心（12000 rpm，10 min），弃上清，加入50 μL核酸释放剂，与沉淀震荡混匀，备用。取备用样本10 μL，加入40μLPCR反应混合物中，扩增条件：93℃，2 min，预变性；93℃45 s-55℃，15 min，10个循环；93℃30 s—55℃45 s，30个循环。HCMV阳性参考2012年中华医学会儿科分会制订的《HCMV感染诊断和防治指南》，反应在上海宏石SLAN-96P全自动荧光定量PCR仪上进行，根据标准曲线分析并计算HCMV—DNA拷贝数[4]。

1.2.2 血清HCMV-IgM

研究对象于晨起抽取空腹静脉血2 mL，行离心（15000 rpm，10 min），取上清液，放置-20℃保存，采用化学发光法检测血清HCMV-IgM，试剂盒来自德国Roche公司提供，操作严格按照说明书进行。

1.3 观察指标

（1）HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM的检测结果；（2）不同性别HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果（3）不同疾病组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果；（4）不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果。

1.4 统计学方法

本研究数据均采用SPSS21.0统计学软件进行分析，计量资料用（±SD）表示，比较采用t检验，计数资料以率（%）表示，比较采用卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HCMV感染患儿的尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果

尿液HCMV-DNA阳性率为30.35%，血清HCMV-IgM阳性率为33.03%，两者联合检测阳性率为87.50%；联合检测水平高于单一检测。表1。

表1 尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测阳性率比较

2.2 不同性别HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果

观察组不同性别之间HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检测结果均无统计学差异（χ2=0.082，0.004，0.413；P＞0.05）。

2.3 不同疾病组HCMV感染患儿尿液HCMVDNA、血清HCMV-IgM检测结果

肝炎组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于肺炎组和其他组；且其他组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率低于肺炎组（χ2=24.243，24.727，27.645；P＜0.05）。见表3。

表3 不同疾病组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果[n(%)]

2.4 不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果

＞180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于＜90 d和90 d-180 d；且90 d-180 d尿液HCMV-DNA、血清HCMVIgM及两者联合检出阳性率均高于＜90d（χ2=14.133，6.114，8.189；P＜0.05）。见表3。

表4 不同年龄HCMV感染患儿尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM检测结果[n(%)]

3 讨论

HCMV感染十分普遍，除少数原发性感染发生原发性单核细胞增多症外，极大多数为隐性感染；HCMV感染可导致多个器官出现损伤，如肝脏发生炎症、泌尿生殖系统感染、引发肺、中枢神经系统和血液循环发生病变[5]。然而HCMV感染临床表现缺乏特异性，仅靠其并不能完全提供诊断依据，需依靠实验室检查进行辅助诊断。

在出生最初3 w的新生儿尿液、呼吸道分泌物或者其他体液分离出HCMV是先天性感染最敏感和特异的确诊依据[6]。PCR在用于监测免疫抑制病人的HCMV感染时，其敏感性高于病毒分离和抗原血清检测，而尿液所含的病毒量较高，因此为首选的标本[7]。本次研究应用PCR技术对HCMV感染患儿检查尿液HCMV-DNA，发现观察组尿液HCMV-DNA阳性率为30.35%（34/112），说明HCMV感染普遍存在。有研究表明HCMVDNA阳性可早期预测HCMV感染存在，但仅此无法完全区别潜伏感染和活动性感染，其原因在于HCMV-DNA拷贝数重叠范围广，尚未明确DNA拷贝界限[7,8]。目前临床常检测血清HCMV IgM作为HCMV近期感染的重要依据。已有充分临床证据证实抗HCMV IgM抗体检测阳性表明机体近期存在活动性感染，如果同时抗HCMVIgG抗体阴性，则表明是HCMV原发性感染[7,8]。HCMV-IgG抗体阳性表明有既往感染，血清IgG抗体阳性转化表明是原发感染，而连续监测IgG滴度急剧升高表明存在HCMV活动性感染[7,8]。本次研究显示观察组血清HCMV-IgM阳性率为33.03%（37/112），说明其可准确判断HCMV感染状态，为治疗提供一定依据；但其抗体本身代谢规律及检测方法具有一定局限性。而本次结果显示尿液两者联合检测阳性率为87.50%，说明两者结合检测阳性率高于单一检测，且可全面评估患儿HCMV感染状态。HCMV的感染可通过改变宿主细胞的凋亡、增殖和免疫反应等方式来破坏内稳态平衡，进而参与多种疾病的发生。婴儿免疫系统薄弱，抑制HCMV入侵能力低下，极易受到感染，且感染后大部分患儿易出现不同程度的肝胆受损和间质性肺炎[9]。本次研究显示肝炎组尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于肺炎组和其他组；说明肝脏极大可能是患儿易受到巨细胞病毒感染的器官。

有研究表明年龄越低的婴幼儿免疫系统不成熟，其产生IgM的能力也越低，故其假阴性多[7-9]。鉴于此，本文猜想通过尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测巨细胞病毒感染，发现＞180d尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM及两者联合检出阳性率均高于＜90 d和90 d-180 d，且其中两者检测阳性率高于单一检测，提示尿液HCMV-DNA、血清HCMV-IgM与年龄具有一定联系，且再次间接证实两者联合检测阳性率更高，原因可能是随着孩子年龄的增长，肾脏较强的浓缩能力与接触病原菌的概率增加相关[9,10]。

综上所述，尿液HCMV-DNA联合血清HCMV-IgM检测在患儿HCMV感染中的诊断效能高，结合临床表现可全面判断患儿HCMV感染状态。