肺炎支原体肺炎患儿血清miR-126联合miR-138 水平对预后的预测价值

葛雯雯 徐 婷 宋 磊

江苏省南通市第一人民医院儿科，江苏南通 226014

肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）是由肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）感染引起的肺部疾病，临床表现为发热、咳嗽等症状，若病情严重甚至会出现肺坏死、肺不张等并发症[1-2]。因此，为预防MPP 病情的发展，儿科医生可对患儿预后进行预测，为临床治疗方案的调整提供合理依据，改善预后[3-4]。微RNA（microRNA，miRNA）属于非编码小RNA，长度为18～24 个核苷酸，参与调节细胞增殖、凋亡等多种生理过程[5-6]。研究显示，mRNA在MPP 中具有重要调节作用，如miR-126[7]、miR-138[8]均可参与MPP 的发生发展，可作为诊断或预测MPP的重要生物标志物。但目前miR-126 联合miR-138应用于MPP 患儿预后的预测研究较少。基于此，本研究旨在探讨二者联合对MPP 患儿预后的预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年7 月至2022 年10 月江苏省南通市第一人民医院儿科MPP 患儿114 例，其中男50 例，女64 例；年龄1～10 岁，平均（5.50±2.11）岁；发热时间2～8 d，平均（5.51±1.26）d；病情严重程度[9]：轻症78例，重症36 例。本研究经江苏省南通市第一人民医院医学伦理委员会批准（2022KT264）。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：①符合《中国儿童肺炎支原体感染实验室诊断规范和临床实践专家共识（2019 年）》[10]中MPP 诊断标准；②入院时表现为咳嗽、发热、肺听诊异常；③单次MP-IgM 抗体滴度≥1∶160。排除标准：①合并其他呼吸系统疾病，如肺结核、哮喘等；②合并支气管发育不良；③合并先天性心脏病、心肌炎等心脏功能障碍；④服用免疫调节或糖皮质激素类药物；⑤合并凝血功能障碍、自身免疫系统疾病；⑥合并精神或意识障碍无法配合治疗检查；⑦合并恶性肿瘤或肝肾功能障碍；⑧临床资料不完整。

1.3 治疗及分组方法

参考《儿童肺炎支原体肺炎诊治专家共识（2015年版）》[9]给予标准治疗方案，治疗1 个疗程后评估预后，其中症状体征消失或改善，X 线片结果正常或肺部阴影缩小＞50%则定义为预后良好，否则为预后不良。

1.4 观察指标

1.4.1 血清miR-126、miR-138 水平检测 入院次日采集患者空腹静脉血5 ml，室温下置于EDTA 抗凝管中静置，3 500 r/min 离心10 min（离心半径为8 cm），取血清置于-80℃下保存备用。采用qRT-PCR 测定血清总RNA 后反转录合成cDNA，反应总体系为20 μl（正反向引物各1.0 μl，cDNA 0.8 μl，RNaseH2O 10.2 μl，SYBR Premix Ex TaqTM7 μl）。反应条件为95℃75 s，95℃45 s，60℃30 s，70℃15 s，共40 个循环，每个样品3 个复孔，以U6 为内参，采用2-△△ct法分析血清miR-126、miR-138 水平。引物由上海吉玛公司设计合成，见表1。

表1 引物序列

1.4.2 一般资料及临床资料 入院次日统计患者信息，包括性别、年龄、发热时间、病情严重程度、血常规指标[白细胞计数（white blood cell count，WBC）、血小板计数（platelet count，PLT）、红细胞沉降率（erythrocyte se di-mentation rate，ESR）]、炎症因子指标[白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、C 反应蛋白（C-reactive protein，CRP）]。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析。计量资料用均数±标准差（±s）表示，比较采用t 检验；计数资料用例数或百分率表示，比较采用χ2检验；MPP患儿预后的影响因素采用分析logistic 回归分析；绘制受试者操作特征（receiver operating characteristic curve，ROC）曲线分析miR-126 联合miR-138 对预后的预测价值。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MPP 患儿预后不良的单因素分析

114 例MPP 患儿治疗1 个疗程后预后不良19例。预后不良组重症者占比及WBC、PLT、IL-6、TNF-α、CRP、miR-126、miR-138 水平高于预后良好组（P＜0.05）；两组性别、年龄、发热时间、ESR 比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 MPP 患儿预后不良的单因素分析

2.2 MPP 患儿预后不良的多因素分析

以病情严重程度（轻症=0，重症=1）、WBC（原值带入）、PLT（原值带入）、IL-6（原值带入）、TNF-α（原值带入）、CRP（原值带入）、miR-126（原值带入）、miR-138为自变量（原值带入），以预后为因变量赋值（预后良好=0，预后不良=1）进行logistic 回归分析。结果显示，病情严重程度及WBC、TNF-α、CRP、miR-126、miR-138水平为MPP 患儿预后不良的影响因素（OR＞1，P＜0.05）。见表3。

表3 MPP 患儿预后不良的多因素分析

2.3 miR-126 联合miR-138 水平对MPP 患儿预后的预测价值

miR-126 联合miR-138 水平预测MPP 患儿预后的曲线下面积高于各指标单独检测。见图1、表4。

图1 miR-126 联合miR-138 检测对MPP 患儿预后预测的ROC 曲线

表4 miR-126 联合miR-138 检测对MPP 患儿预后的预测价值

3 讨论

MPP 是儿科常见疾病之一，临床主要表现为咳嗽、胸闷等，且可能表现出不同程度惊厥和发热，严重影响患儿身心健康及生长发育，预后不佳[11-15]。临床通过筛选预测因子对预后进行评估有助于治疗方案的调整及结局的改变。

miRNA 抑制mRNA 翻译转录或降解可以影响蛋白合成，参与免疫应答、调控造血、炎症反应[16-17]。有研究证实，miRNA 在多种呼吸系统疾病中有广泛应用，如miRNA 在感染性肺炎、慢性阻塞性肺疾病、创伤性肺炎等疾病的发生发展、诊断治疗、预后评估中发挥着不同作用，且在特定炎症信号传导通路研究中存在不可或缺的作用[18]。miR-126、miR-138 水平作为常见miRNA，也具有调节激活转录因子和炎症因子的作用，但目前二者联合评估MPP 患儿预后的研究较少。基于此，本研究对MPP 患儿血清miR-126、miR-138水平进行检测分析。结果显示，预后不良组miR-126、miR-138 水平高于预后良好组，miR-126、miR-138 水平为MPP 患儿预后不良的影响因素。miR-126 是由内皮细胞生成，位于人类9 号染色体的表皮生长因子基因区域内，可抑制阻碍代偿性新生血管生成，如血管内皮生长因子、血管细胞黏附因子-1 等，从而减少血管炎症反应，有助于肺部炎症疾病的恢复[19-21]。miR-138 为竞争性结合炎症因子的miRNA，促进巨噬细胞及肺上皮细胞中炎症因子的分泌与释放，增强MP 感染所致的肺部炎症反应，促进肺炎疾病的发展[22-24]；且miR-138 还会通过激活NF-κB 通路促进炎症反应及氧化应激，进一步加重MPP[25-26]。但是细胞生物学具有易变性、多态性、复杂性的特点，因此单一miRNA 标志物应用于MPP 患儿预后的预测中存在一定局限性。因此，本研究采用miR-126、miR-138 联合检测预测MPP 患儿预后，结果显示，miR-126 联合miR-138 水平预测MPP 患者预后的曲线下面积高于各指标单独检测。因此，临床治疗MPP 患儿，可监测miR-126、miR-138 水平，并及时根据病情变化对治疗方案进行调整，对于预后的改善具有重要临床意义[27-28]。

综上所述，血清miR-126 联合miR-138 水平对MPP 患儿预后的预测价值较高，有望成为MPP 诊断治疗和预后评估的新型生物标志物。但由于目前所能查询到的相关文献有限，未能与前人研究进行比较，因此仍需进一步开展前瞻性、多中心研究加以证实。