30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂的高效液相色谱分析

王妍雨，张 燕

(1.山东省博兴县农业农村综合服务中心，山东 博兴 256500；2.天津市汉邦植物保护剂有限责任公司，天津 301600)

30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂是由20%丙硫菌唑和10%啶氧菌酯混配而成，丙硫菌唑的化学名称：2-(2-(1-氯环丙基)-3-(2-氯苯基)-2-羟丙基-1-2-二氢-3-1，2，4-三唑-3-硫代。是三唑硫酮类杀菌剂，为甾醇脱甲基化(麦角甾醇生物合成)抑制剂；可提供很好的内吸作用，优异的保护、治疗和铲除活性，持效期长，对作物安全。丙硫菌唑主要用于谷物、大豆、油菜、水稻、花生、甜菜和蔬菜等，杀菌谱很广，几乎对谷物上所有真菌病害都有优异防效，既可叶面喷雾，也可作种子处理。

啶氧菌酯的化学名称：E)-3-甲氧基-2-{2-[6-(三氟甲基)-2-吡啶氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯(E)-3-甲氧-2-[2-[6-(三氟甲基)-2-吡啶氧甲基]苯基}丙烯酸甲酯(E)-α-甲氧基亚甲基-2-(3-三氟甲基-2-吡啶氧甲基)乙酸苯甲酯。啶氧菌酯属于内吸广谱杀菌剂，可以通过阻止细胞色素b和c1的Qo中心的电子转移来抑制线粒体呼吸，有铲除、保护、渗透和内吸作用。防治对14-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧酰胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂 日本岛津公司LC-10A型高效液相色谱仪、具紫外可变波长检测器、N2000工作站、过滤器、超声波清洗器。

乙腈(色谱纯)，重蒸二次蒸馏水，丙硫菌唑标样(纯度≥98.0%)、啶氧菌酯标样(纯度≥98.0%)，30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂。

1.2 色谱分析条件 色谱柱：6.5 mm×250 mm(i.d.)，5 um，ZapchromTmC18不锈钢色谱柱；柱温：室温；流动相：乙腈：水(体积比70∶30)；流速1.0 mL/min；检测波长254 nm；进样体积10 μL.保留时间：丙硫菌唑6.532 min，啶氧菌酯7.998 min。在上述色谱条件下，30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂的液相色谱图(图1、2)。

图2 样品液相色谱图

1.3 溶液的配制

1.3.1 标样溶液的配制 称取丙硫菌唑标样0.04 g(准确至0.2 mg)，啶氧菌酯标样0.02 g(准确至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

1.3.2 试样溶液的配制 称取30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂试样0.20 g(准确至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超声溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

1.3.3 测定 采用上述色谱条件，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针的响应值变化<1.5%后，再按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液顺序进样分析。标样溶液和试样溶液的色谱图分别(图1、2)。

1.3.4 计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的峰面积分别进行平均。试样中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的质量分数X(%)按下式计算：

式中：

A1为标样溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)峰面积的平均值；

A2为试样溶液中丙硫菌唑(啶氧菌酯)峰面积的平均值；

m1为标样的质量，g；

m2为试样的质量，g；

p为标样中丙硫菌唑(啶氧菌酯)的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相的选择 用不同比例的甲醇、水作为流动相对试样进行分离检测，丙硫菌唑和啶氧菌酯峰形不好，分离不好；选择不同比例的甲醇、乙腈、水作为流动相对试样进行多次分离检测，结果发现：用流动相溶样品，乙腈、水作为流动相分离效果好，出峰时间短，而且色谱峰尖锐。综合以上因素，最终选定乙腈、水(体积比为70∶30)作为流动相效果最佳。

2.1.2 检测波长的选择 对丙硫菌唑和啶氧菌酯标样溶液分别进行紫外扫描，得到相应的吸收波长与响应值的紫外吸收光谱图。丙硫菌唑和啶氧菌酯的最大吸收波长分别在269、207 nm左右。当选用269 nm波长时啶氧菌酯吸收较小，选用254 nm波长时，丙硫菌唑和啶氧菌酯均有较强吸收峰，同时杂质响应值小，流动相无吸收。因此，综合考虑多种因素，最终选定254 nm作为检测波长。

2.2 非分析物的干扰测定 溶剂空白：流动相。制剂空白溶液配制：称取制剂空白 0.201 2 g ，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超声溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

丙硫菌唑标样溶液配制：称取丙硫菌唑标样0.040 2 g(准确至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

啶氧菌酯标样溶液配制：称取啶氧菌酯标样0.020 5 g(准确至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

丙硫菌唑原药溶液配制：称取丙硫菌唑标样0.040 9 g(准确至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

啶氧菌酯原药溶液配制：称取啶氧菌酯标样0.020 7 g(准确至0.2 mg)、置于100 mL容量瓶中，加入乙腈30 mL，在超声波清洗器上脱气10 min，使标样全部溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

试样溶液配制：称取30%丙硫菌唑·啶氧菌酯悬浮剂试样0.206 8 g(准确至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，用乙腈超声溶解，冷却至室温，再用流动相定容，摇匀，用0.22 μm的滤膜过滤器备用。

在1.2的色谱条件下，用岛津 LC-10A型高效液相色谱仪进行非分析物的干扰测定。(图3～9)，溶剂空白、制剂空白、丙硫菌唑原药在啶氧菌酯的出峰位置(Rt约8.0 min)无干扰峰，且啶氧菌酯标样、啶氧菌酯原药、 试样中啶氧菌酯的最小峰纯度相似度均为 1.000 000，未检测到不纯物，表明目标峰没有其他非分析物的干扰；溶剂空白、制剂空白、啶氧菌酯原药在丙硫菌唑的出峰位置(Rt 约 6.5 min)无干扰峰，且丙硫菌唑标样、丙硫菌唑原药、试样中丙硫菌唑的最小峰纯度相似度均为 1.000 000，未检测到不纯物，表明目标峰没有其他非分析物的干扰。

﹤色谱图﹥

图3 溶剂空白液相色谱图

﹤色谱图﹥

图4 制剂空白液相色谱图

﹤色谱图﹥

图5 丙硫菌唑标样液相色谱图

﹤色谱图﹥

图6 丙硫菌唑原药液相色谱图

﹤色谱图﹥

图7 啶氧菌酯标样液相色谱图

﹤色谱图﹥

图8 啶氧菌酯原药液相色谱图

﹤色谱图﹥

图9 试样液相色谱图

2.3 特异性测定 溶剂空白：同 2.2；制剂空白溶液配制：同2.2；丙硫菌唑标样溶液配制：同 2.2；丙硫菌唑原药溶液配制：同 2.2；啶氧菌酯标样溶液配制：同 2.2；啶氧菌酯原药溶液配制：同 2.2；试样溶液配制：同 2.2。

在1.2的色谱条件下，用岛津 LC-10A型高效液相色谱仪进行系统特异性测定。(图 3～9)，溶剂空白、制剂空白、丙硫菌唑原药在啶氧菌酯的出峰位置(Rt约8.0 min)无干扰峰，且啶氧菌酯标样、啶氧菌酯原药、试样中啶氧菌酯的最小峰纯度相似度均为 1.000 000，未检测到不纯物，表明该方法特异性良好；溶剂空白、制剂空白、啶氧菌酯原药在丙硫菌唑的出峰位置(Rt 约 6.5 min)无干扰峰，且丙硫菌唑标样、丙硫菌唑原药、试样中丙硫菌唑的最小峰纯度相似度均为 1.000 000，未检测到不纯物，表明该方法特异性良好。

2.4 线性关系曲线的测定(表1、2) 分别配制5个不同质量的丙硫菌唑、啶氧菌酯标样溶液，在上述色谱条件下进样测定。以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，丙硫菌唑在100～410 mg/L、啶氧菌酯在170～330 mg/L范围内浓度与对应的峰面积呈良好的线性关系，计算得到：

表1 丙硫菌唑线性范围试验

丙硫菌唑的线性回归方程为Y=7.103X-0.000 5，r=0.999 91；

啶氧菌酯的线性回归方程为Y=5.589X-0.000 6，r=0.999 7。

由(表1)可知，当丙硫菌唑浓度在0.11 mg/mL～0.40 mg/mL范围内时，丙硫菌唑浓度与对应的峰面积呈良好的线性关系。回归方程为Y=7.103X-0.000 5，r=0.999 914。

由(表2)可知,当啶氧菌酯浓度在0.10 mg/mL～0.50 mg/mL范围内时，啶氧菌酯浓度与对应的峰面积呈良好的线性关系。回归方程为Y=3.563X-0.000 1，r=0.999 7。

2.5 精密度测定(表3) 在上述色谱条件下，对同一丙硫菌唑·啶氧菌酯样品平行测定6次，丙硫菌唑和啶氧菌酯的标准偏差分别为0.08、0.10，变异系数分别为0.39%、0.95%，结果表明方法的精密度好。

表3 分析方法精密度试验

2.6 准确度测定 在已知含量的样品中分别加入适量的丙硫菌唑和啶氧菌酯标准品，测其回收率，其平均回收率分别为99.4%和99.2%(表4)，此方法回收率较高，可以准确分析制剂中丙硫菌唑和啶氧菌酯的质量分数。

表4 添加回收率测定结果

2 结论

实验结果表明：在同一条件下测定两种有效成分的目标峰没有其他非分析物的干扰，特异性良好，准确度和精密度较高，线性关系良好，具有简单、快速、准确及分离效果好的优点，是一种理想的分析方法。