男科门诊患者人乳头瘤病毒感染基因型分析

刘艳，沈倩云，程文国

扬州大学医学院附属医院 扬州市妇幼保健院检验科，江苏扬州 225001

人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）是隶属于乳多空病毒科乳头瘤病毒属的一组无包膜环状双链DNA病毒，有极强的嗜上皮细胞属性，可引起人类皮肤及黏膜组织的病变，目前已鉴定出 200多种亚型，40余种与生殖道感染有关。HPV感染不但可引起生殖器疣，还可能引起女性宫颈癌和外阴癌、男性阴茎癌及男女性肛门癌和口咽癌等[1-5]。近年来，随着女性HPV感染情况的研究和宫颈癌防治工作的深入，男性HPV感染情况也逐渐引起研究者的重视[5-7]。男性HPV感染大多数为隐性感染或亚临床感染，容易被忽略，且男性感染HPV后可通过性接触传染给性伴侣，从而增加性伴侣被感染的风险[6-9]，因此对男性进行HPV筛查显得尤为重要。本研究回顾性分析258例男科门诊患者37种HPV基因分型检测结果，为男性HPV感染的干预和治疗提供科学依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2018年7月至2022年12月就诊于扬州市妇幼保健院男科门诊的258例男性患者的外生殖器脱落细胞样本，年龄20～67岁，平均（33.99±9.26）岁。收集同期就诊的1436例女性体检者及931例宫颈疑似HPV感染的妇科患者宫颈脱落细胞样本作为对照组，年龄19～87岁，平均（42.96±11.86）岁。纳入标准：①患者于扬州市妇幼保健院初次采样检测；②未行相关治疗措施；③无性病史。患者及家属均知晓本研究并签署知情同意书。本研究经扬州市妇幼保健院伦理委员会审批通过。

1.2 样本采集

样本采集前24h内患者无性行为。男性样本用一次性采样拭子稍用力对龟头、冠状沟、系带、包皮和尿道口反复进行3～6次旋转摩擦，取得脱落上皮细胞，然后将拭子放入装有专用细胞保存液的试管中，拧紧管盖，作好标识。女性样本由医生以窥阴器暴露宫颈，将一次性宫颈采样刷于宫颈口轻轻地顺时针旋转5圈，取出宫颈刷放入装有专用细胞保存液的试管中，拧紧管盖，作好标识。样本立即送检或置于4℃冰箱保存，2周内检测。

1.3 仪器与试剂

采用潮州凯普生物化学有限公司提供的HPV分型检测试剂盒，包括DNA提取试剂盒、聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）试剂盒、杂交试剂盒以及杭州博日科技有限公司的TC-96/G/H（b）C型基因扩增仪和凯普HHM-3型医用核酸分子快速杂交仪进行HPV基因分型检测。

1.4 检测方法

采用PCR体外扩增和导流杂交的方法检测37种HPV基因亚型，其中包括18种高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、73、82；19种低危型：HPV6、11、42、43、44、81（CP8304）、34、40、54、55、57、61、67、69、70、71、72、83、84。

1.4.1 HPVDNA 分离提取样本振荡均匀，取0.5ml样本至离心管中，14 000转/min离心1min，弃上清液，加入细胞裂解液提取DNA，严格按照DNA提取试剂盒说明书进行操作，取1μl提取好的DNA样本作为模板。

1.4.2 PCR扩增 按PCR扩增试剂说明书进行操作，反应体系为25μl，包括PCR混合液23.25μl、Taq酶0.75μl、提取的DNA模板1μl，混匀。PCR扩增程序：95℃预变性9min，95℃变性20s，55℃退火30s，72℃延长30s，共40个循环；72℃延长5min；4℃保持。

1.4.3 杂交过程扩增产物 95℃变性5min，冰水浴2min，加入杂交孔内进行导流杂交10min，杂交液冲洗、加封阻液、加酶标液和显色液等操作步骤按照杂交试剂盒说明书进行。

1.4.4 结果判定 根据膜条HPV亚型分布位置判断结果，阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点，多个圆点即为多重感染。

1.5 统计学方法

采用SPSS21.0统计学软件对数据进行处理分析，计数资料以例数（百分率）[n（%）]表示，比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 男科门诊患者HPV感染情况与女性组结果的比较

258例男科门诊患者（男性患者组）中HPV阳性者103例，感染率39.92%。1436例女性体检者（女性体检组）中HPV阳性者195例，感染率13.58%。931例宫颈疑似HPV感染的妇科患者（女性患者组）HPV阳性者348例，感染率37.38%。男性患者组感染率与女性体检组比较，差异有统计学意义（P<0.001）；男性患者组与女性患者组比较，差异无统计学意义（P=0.456）。男性患者组感染类型与女性体检组差异有统计学意义（P=0.032）；男性患者组与女性患者组差异无统计学意义（P=0.192），见表1。

表1 三组受试者的HPV感染类型比较[n（%）]

2.2 男科门诊患者HPV感染状态与女性组结果的比较

103例男科门诊阳性患者单一亚型感染59例，占57.28%，二重及以上感染（多重感染）44例，占42.72%，最多十重感染；单一亚型感染以高危型为主，二重及多重感染以高危型及高低危混合型为主，见表2、表3。男性患者组感染状态与女性体检组相比，差异有统计学意义（P<0.001），男性患者组与女性患者组差异无统计学意义（P=0.102）。

表2 男性HPV阳性患者感染状态与女性组的比较[n（%）]

表3 男性HPV阳性患者不同感染状态时的感染类型（n）

2.3 男科门诊患者HPV感染的年龄分布

男科门诊患者及HPV阳性者年龄分布均主要集中于20～29岁和30～39岁阶段，其次为40～49岁，50岁以上年龄段相对较少。HPV感染的高峰年龄为20～39岁，占74.75%，各年龄段HPV检出率差异无统计学意义（P=0.297），见表4。

表4 258例男性就诊者HPV感染的年龄分布

2.4 HPV亚型分布情况

37种HPV基因亚型中，男性患者组除HPV57、67、69、83型外，其他亚型均有检出。男性患者组检出率位列前5位的是HPV52、58、51、54、61型。女性体检组和女性患者组除HPV57、69、72、26型外，其他亚型均有检出，位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型。HPV各基因亚型检出率见表5。

表5 男性患者组与女性体检组和女性患者组基因亚型分布比较[n（%）]

2.5 男性HPV感染者就诊原因

103例男性感染者就诊主要原因：健康查体（包括患者性伴侣确诊HPV感染主动要求检测者）75例，占72.82%；生育检验15例，占14.56%；不育症5例，占4.85%；外生殖器炎症或有赘生物5例，占4.85%；病毒性疣2例，占1.94%；男性勃起障碍1例，占0.97%。

3 讨论

HPV能引起人体皮肤及黏膜的鳞状上皮增生，且不同型别HPV的致病力存在差异，国际癌症研究协会（International Agency for Research on Cancer，IARC）根据其与肿瘤发生危险性的高低，把HPV亚型分为低危型和高危型，其中低危型HPV感染尤其是HPV6型和HPV11型与外生殖器尖锐湿疣等良性病变有关，高危型HPV持续性感染与女性宫颈癌的发病及男性阴茎癌和口咽癌等病变密切相关[1-5]。HPV感染被认为是男性和女性感染相关癌症的主要原因之一[1]。本研究主要探讨男科门诊患者HPV感染及其基因型的分布特点及与女性两组结果的比较，有助于男性HPV相关性疾病的防治及降低HPV相关肿瘤的发生。

根据流行病学调查发现我国男性HPV的总体感染率与西方国家相比处于较低的水平，且国内普通男性HPV感染情况及基因亚型分布特征存在地区性差异[10]。耿见忠[11]报道贵州地区男性HPV感染率为76.59%；张新鹏等[12]报道北京东南地区男性HPV感染率为64.30%；钟阳青等[13]报道东莞地区男性HPV感染率为58.33%，与本研究结果存在不同程度的差异。本研究检测258例男科门诊患者样本，HPV感染率为39.92%，与程连娜等[14]报道丽水地区男性HPV感染情况相似，与其他地区比较处于相对较低的水平，分析原因可能为样本来源不同，本研究采集样本多为无症状健康体检或生育检查患者。本研究显示HPV阳性样本中感染HPV高危型占58.25%，与贵州地区及北京东南地区以低危、高危混合感染为主不同，可能为地区性差异[11-12]；本研究以单一亚型感染为主，占57.28%，与东莞地区、丽水地区及海南地区的报道基本一致[13-15]。

本研究显示男科门诊患者及HPV阳性患者年龄均主要集中于20～29岁和30～39岁，HPV感染的高峰年龄为20～39岁，占74.76%，与钟文英等[16]报道基本一致；各年龄组HPV检出率差异无统计学意义，但50岁以上患者HPV检出率较高，因此中老年男性的生殖健康也值得重视。本研究检测的37种HPV基因亚型中，男性患者组除HPV57、67、69、83型外，其他亚型均有检出。

目前HPV感染已成为全球最常见的性传播疾病之一，配偶感染HPV可增加性伴侣被感染的风险，有研究报道配偶宫颈HPV感染男性外生殖器HPV感染率高[6-7]。吴正沐等[17]研究女性HPV感染患者的男性性伴侣感染HPV型别与女方基本一致，吻合率高达97.70%。本研究显示男性患者HPV感染率和感染类型及感染状态与女性患者差异无统计学意义，与女性体检者相比差异有统计学意义，表明除与女性健康体检者有差异，男性患者与女性患者HPV感染情况基本一致，均以高危型感染为主，且以单一亚型感染为主。女性组除HPV57、69、72、26型外，其他亚型均有检出，女性组检出率位列前5位的是HPV52、16、58、53、61型，低危型以HPV61（7.73%）、HPV81（6.45%）、HPV54（5.89%）为常见亚型，高危型以HPV52（22.285）、HPV16（14.92%）、HPV58（11.79%）为常见亚型，与男性患者相比略有不同，这与邵玲俐等[18]研究结果相似。

随着HPV在人群中筛查工作的开展，研究发现与异性恋男性相比，男男性行为者的口腔和生殖器HPV感染率更高[8-9]。研究表明在男男性行为者中，HPV疫苗接种对预防肛门生殖器和口腔HPV是有效的，尤其是在年轻时接种[19]。2018年10月5日，美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration，FDA）批准九价HPV疫苗的补充申请，将使用该疫苗的年龄范围扩大到27～45岁女性和男性成人的接种，而此前九价HPV疫苗只适用于9～26岁女性或男性。近年来，随着女性HPV感染研究和宫颈癌防治工作的深入，男性HPV疫苗接种也将逐渐引起大家的重视[20]。有研究显示男性HPV感染可能影响精子活力、增加畸形率，从而降低精液质量，影响男性生育能力，尤其是对单纯精子活力减低的原发性不育男性，应当考虑到精液HPV感染的可能并予以检测[21-22]。

综上所述，本研究结果显示男科门诊患者HPV感染率较高，以高危型感染为主，且以单一亚型感染为主，感染的高峰年龄为20～39岁，各地区应重视男性HPV感染患者及各基因型的检测。由于HPV可通过性接触传播，因此对男性生殖健康的监测还可降低性伴侣感染HPV的风险，减少HPV相关疾病的发生。本研究采集的样本量较小，不能完全反映本地区的男性HPV感染情况，因此还需大量数据进一步研究，为男性HPV感染的干预和治疗提供科学依据。