文心兰组培苗繁育技术规程

罗远华,叶秀仙,钟淮钦,黄敏玲*

(1.福建省农业科学院作物研究所,福建 福州 350013;2.福建省农业科学院花卉研究中心,福建 福州 350013;3.福建省特色花卉工程技术研究中心,福建 福州 350013)

文心兰(Oncidiumhybridum)又名金蝶兰、舞女兰或瘤瓣兰等,是指兰科文心兰属植物,主要分布于美国、墨西哥、巴拉圭、秘鲁、巴西、牙买加、阿根廷等中南美洲的热带和亚热带地区[1]。文心兰植株轻巧、花色丰富、花姿优美、部分品种具香味,适应性广、花期长、观赏与经济价值高,在切花、盆花及景观等方面应用广泛,与蝴蝶兰、石斛、大花蕙兰并列为四大洋兰,是世界重要的商品花卉。

近年来,文心兰在福建、广东、海南、云南、贵州等地得到快速发展,栽培面积不断增加。但文心兰优质种苗的生产严重滞后,采用传统的分株方式繁殖种苗时不仅繁殖系数低[2],成本高,且种苗参差不齐,产品质量不稳定等问题普遍存在;组培繁育技术虽相对完善[3-5],但由于市场化品种的不断更新,种苗工厂化、标准化生产程度较低,种苗供应不足等严重影响了文心兰产业规模的提升。目前,还未见有关文心兰组培苗繁育技术的国家标准和行业标准,为了规范文心兰组培苗繁育技术,确保种苗质量,提高生产效率,在查阅相关文献的基础上,对多年来不同类型品种的组培繁育技术研究[6-8]进行了总结,提出了文心兰组培苗繁育技术规程,并应用于生产,对提高优质种苗自给率,提升文心兰产业竞争力等具有重要的现实意义。

1 组培苗繁育

1.1 母株选择

符合需求;植株生长健壮、无病虫害、无表型病毒特征、具有品种典型性状。切取外植体前植株提前7～10 d停止浇水。

1.2 外植体选取

植株进入盛花期时,宜选用5～10 cm长的幼嫩花梗,或叶片未展开的嫩芽作为外植体。

1.3 外植体消毒

幼嫩花梗取材后,在超净工作台上先用75%(V/V)酒精浸湿的脱脂棉擦拭表面后置入无菌水中清洗1～2次,取出后剥除幼嫩花梗的苞片,然后置入0.1% HgCl2水溶液中振荡消毒6～10 min,取出用无菌水冲洗4～5次,最后用无菌吸水纸吸干表面水分备用;嫩芽取材后,先用手术刀剥除外部较大的鞘叶,自来水冲洗30～60 min,接着在超净工作台上用75%的酒精振荡浸泡20～30 s,用无菌水冲洗1～2次后,置入加了1～2滴吐温-80的0.1% HgCl2水溶液中振荡消毒6～10 min,无菌水冲洗3～4次,用手术刀再次剥除剩余的鞘叶后,再次置入加了1～2滴吐温-80的0.1% HgCl2水溶液中振荡消毒3～5 min,无菌水冲洗4～5次后,用无菌吸水纸吸干表面水分后备用。

1.4 诱导培养

在超净工作台上,将已消毒的外植体置于接种盘上,用镊子和接种刀将幼嫩花梗切割成带1～2个节的花梗切段;或包括生长点在内的0.3～0.5 cm长的嫩芽茎尖顶端组织,平放接种于事先准备好的诱导培养基中1/2MS+6-BA(2.0～4.0)mg/L+NAA(0.2～0.4)mg/L+蔗糖25 g/L+琼脂(6.5～7.0)g/L,pH值5.6～5.8。培养温度22～26 ℃,光照强度500～1000 lx,光照时间10～12 h/d。

1.5 增殖培养

诱导培养50～60 d后,成活外植体可诱导出单芽、丛芽或类原球茎,将诱导出的材料从外植体上切割下来进行继代增殖培养。单芽或丛芽进行丛芽增殖培养,类原球茎进行类原球茎增殖培养。

切除单芽或丛芽基部无分生能力的组织及已展开的叶片后,竖向接种在增殖培养基中1/2MS+花宝1号1.5 g/L+6-BA(2.0～4.0)mg/L+椰汁100 ml/L+蔗糖(25～30)g/L+琼脂(6.5～7.0)g/L,pH值5.6～5.8进行丛生芽增殖培养;选取健壮的类原球茎接种在增殖培养基中:1/2MS+花宝1号1.5 g/L+6-BA(2.0～4.0)mg/L+NAA(0.2～0.4)mg/L+椰汁150 ml/L+蔗糖(25～30)g/L+琼脂(6.5～7.0)g/L,pH值5.6～5.8进行增殖培养。培养温度22～26 ℃,光照强度1500～2000 lx,光照时间12～14 h/d。40～50 d继代1次,丛芽继代次数不宜超过12次,类原球茎不宜超过10次。随着继代增殖次数的增加,可根据长势将6-BA浓度降低至1.0～3.0 mg/L,NAA浓度降低至0.1～0.3 mg/L。

1.6 分化培养

选取健壮的类原球茎接种在分化培养基中:1/2MS+花宝1号1.0 g/L+6-BA(0.5～1.0)mg/L+蔗糖(25～30)g/L+琼脂7.0 g/L,pH值5.6～5.8。培养温度22～26 ℃,光照强度1500～2000 lx,光照时间14～16 h/d。分化培养50～60 d后类原球茎陆续发育成芽苗,分化不完全的类原球茎可再次进行分化培养。

1.7 生根培养

将叶片展开的丛芽苗或类原球茎分化出的芽苗(株高≥3.0 cm)切割成单苗,按植株大小、壮弱分级后,接种于生根培养基中1/2MS+花宝1号1.0 g/L+NAA(0.1～0.3)mg/L+香蕉泥50 g/L+蔗糖(20～25)g/L+活性炭1.0 g/L+琼脂7.0 g/L,pH值5.6～5.8。培养温度为22～26 ℃,光照强度2000～2500 lx,光照时间14～16 h/d。根据品种株型与培养容器规格确定适宜的接种数量,培养40～60 d后可获得具有根、茎、叶的完整植株。

1.8 炼苗

当生根苗株高≥5.0 cm、叶片≥3片、具2～3条根时,可移出培养室进行炼苗。炼苗室无阳光直射,散射光光照强度5000～6000 lx,温度20～28 ℃,空气相对湿度60%～80%,环境清洁。将培养瓶一字排开放置于苗床或炼苗架上,炼苗15～20 d。

1.9 试管苗质量

品种纯正;生长健壮,叶片舒展,叶色浓绿,根系粗壮;无污染;变异率≤5%。参考相关标准[9],文心兰试管苗分级及标准参见表1。

表1 文心兰试管苗分级及其标准

2 组培苗移栽

2.1 环境条件

移栽大棚要求光照均匀,空气流通,水源清洁;温度20～28 ℃,空气相对湿度 60%～80%,光照强度5000～10000 lx。

2.2 洗苗与消毒

将组培苗从培养容器中小心取出,用清水将粘附在根系上的培养基清洗干净,并按植株大小进行分级,整个过程应尽可能减少对植株的机械损伤。将分级好的组培苗放置在塑料筐内,置入800～1000倍多菌灵或百菌清水溶液中消毒3～5 min,取出后放置在移栽大棚育苗床上晾15～20 min后可移栽。

2.3 基质

水苔作为移栽基质,种植前先将水苔放入清水中浸泡24 h,捞出后用清水清洗1～2遍后充分挤出水分,用力挤压水苔至不出水即可。

2.4 移栽

用适量抖松的水苔包裹住组培苗的根部置入口径5 cm且底部带孔的白色育苗杯中,要求水苔的用量要适中,组培苗生长点的位置要露出水苔面,水苔面要低于杯沿0.5～1.0 cm,移栽过程应尽可能减少对植株的机械损伤。移栽后放入专用育苗托盘中,整齐摆放在育苗床上。

2.5 栽培管理

2.5.1 水分管理。移栽后适当控水,保持水苔湿润状态。水苔将要干透时及时浇水,一般早上浇水,浇水时要浇透,使整个水苔湿润。

2.5.2 施肥管理。移栽2～3 d后即可喷施叶面肥,下午喷施,叶面湿润不滴水为宜,植株勿带水过夜。移栽30 d内,每3～4 d喷施2000倍水溶性平衡肥(N∶P∶K=20∶20∶20)1次;移栽30 d后每4～5 d喷施1次,浓度提高至1500倍;移栽90 d后每6～7 d喷施1次,浓度提高至1000倍,此阶段可在杯中补施缓释肥(N∶P∶K=14∶14∶14)1次,每杯约0.5～1.0 g。

2.5.3 主要病虫害防治。预防为主,防治结合[2、10-11]。每15 d喷洒1次800～1000倍多菌灵、百菌清或甲基托布津等广谱性杀菌剂预防病害的发生,发现病株时要及时隔离;根据虫害的季节性发生,要提前预防;各种农药要交替使用。文心兰小苗主要病虫害防治参见表2。

表2 文心兰小苗主要病虫害防治

2.6 移栽苗质量

不同品种的组培苗移栽180～270 d后可达移栽苗标准,要求生长健壮,叶片舒展,叶色浓绿,根系发达;变异率≤5%。参考相关标准[9],文心兰移栽苗分级及标准参见表3。

表3 文心兰移栽苗分级及其标准