不同免疫剂量的猪圆环灭活疫苗减量免疫效果分析

高勤学 ，蔡云鹏 ，杨伟光 ，祝正高

（1.江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300；2.江苏省种猪性能测定中心，江苏 泰州 225311；3.江苏铂可医疗科技有限公司，江苏 泰州 225316）

前言

无针注射器作为一种取代传统有针玻璃/金属注射器的新型药物输送方式有悠久的历史，最初无针注射器较多用于注射胰岛素、干扰素、麻醉剂等药物，减少病人的痛苦和交叉感染的机会。1992年美国FDA（食品药品监督管理局）批准无针注射胰岛素。加拿大、美国较早开展兽医无针注射器的研究，据报道美国有近80%的大型养殖场在使用无针注射器，代表性公司有美国的Pulse公司和加拿大的Agro-jet公司。但是进口无针注射器价格昂贵，操作繁琐，使用疫苗类型受限制等一系列的问题也限制了它的推广使用。非洲猪瘟催生了一系列养殖技术的变革，注射疫苗作为猪场生物安全必不可少的防线，减少交叉感染势在必行，无针注射器又提上议事日程。国内已经出现了4～6家国产无针注射器厂家，针对进口无针注射器太重、操作时噪音太大、不能注射油佐剂疫苗等缺点进行了攻关和技术革新。据报道，无针注射胰岛素可以减少30%剂量；默沙东在美国使用IDAL无针注射器免疫圆环-支原体二联苗，只需要0.2 mL每头份；在动物上也发现了类似效果。为了验证动物使用无针注射疫苗的减量效果，本文针对猪圆环灭活疫苗减量免疫仔猪进行了对比研究，对不同剂量仔猪的免疫效果进行了评价，确定了用无针注射器免疫猪圆环灭活疫苗最佳免疫剂量。

1 材料与方法

1.1 试验动物

日龄16～21日龄健康三元仔猪，除传统肌肉注射组以外，未注射任何疫苗，体重6～7 kg，购自江苏众成牧业有限公司。饲料采购自南通安佑生物科技有限公司，910T和911T乳猪配合饲料，自由采食。试验地点在江苏省种猪性能测定中心。

1.2 试验材料

圆力康猪圆环病毒2型杆状病毒载体灭活疫苗（CP08株），购自国药集团动物保健股份有限公 司（批 号：170261098）；猪 圆环病毒2型抗体酶联免疫试剂盒（PCV2ELISASK105， 货 号：FS8116），购自常州品芝道科学器材有限公司（荷兰百测BioCheck公司）；有针注射器为常规金属注射器；无针注射器（型号：POK-V-Ⅰ），生 产 批号014710172（20201010），购自江苏铂可医疗科技有限公司。

1.3 试验方法

将30只16～21日龄仔猪随机分成6组，每组5头；第1组采用传统有针注射1头份圆环疫苗，第2组采用无针注射1头份圆环疫苗，第3组采用无针注射0.75头份圆环疫苗，第4组采用无针注射0.5头份圆环疫苗，第5组采用无针注射0.25头份圆环疫苗，第6组作为对照。第2～5组接种时采用CO2气瓶作为动力源，供气压力1.5 MPa。具备减量功能的无针注射器每次注射量为0～0.3 mL，本次试验调整为每次0.25 mL，0.25头份注射一次，0.5～1头份分别注射2～4次，例如1头份就在仔猪颈部两侧各注射两次。

1.4 PCV（猪圆环病毒）抗体检测

圆力康疫苗免疫后7 d、14 d、28 d分别颈静脉采血，分离血清，按照猪圆环病毒2型抗体酶联免疫试剂盒操作步骤进行检测，在405 nm波长处测定OD值、S/P值，将OD值代入标准品制作的直线回归方程，计算每头猪产生的PCV抗体浓度。

1.5 统计分析

用SPSS软件ANOVA程序分析每组仔猪免疫后产生的抗体浓度、体重差异，结果以平均值±标准差表示，分析各组之间的差异，确定无针注射对仔猪减量免疫效果的影响。

2 结果

2.1 不同免疫剂量接种圆环病毒疫苗后对仔猪增重的影响

试验猪分别饲养在三个独立的保育圈里，每个保育圈饲养10头。记录仔猪的初生重、断奶重，每次采血的同时进行称重、记录。最后一次称重减去试验开始时的重量即为增重，增重除以试验期32 d即为日增重。用统计软件SPSS25.0的ANOVA程序进行单因素方差分析结果表明（表1）：对照组和全量免疫组与减量免疫组增重差异显著，日增重差异亦显著。

表1 不同接种剂量接种圆环疫苗对仔猪增重的影响

2.2 不同免疫剂量接种圆环病毒疫苗后PCV抗体浓度比较

分别于免疫后10 d、21 d和32 d采血，分离血清，检测血清PCV抗体浓度。根据百测（BIOCHECK）猪圆环病毒2型（PCV2）抗体ELISA检测试剂盒说明书，样品S/P值大于或等于0.5时认为样品阳性、免疫合格、具有保护作用。结果显示（见表2）：传统有针注射组抗体上升很快，10 d即达合格水平，一直维持到32 d都处于合格水平。无针注射组（1头份，0.75头份和0.5头份）抗体上升较慢，但是10 d也达到合格水平，32 d抗体浓度和传统注射组浓度接近。0.25头份注射组一直达不到合格水平。

表2 不同接种剂量接种圆环疫苗对仔猪抗体的影响

3 讨论

3.1 减量免疫的有效性

金扩世等猪圆环病毒免疫仔猪抗体消长规律试验表明，仔猪免疫圆环病毒后灭活疫苗后7 d免疫抗体开始升高，21 d达到峰值，抗体可以维持180 d以上。本试验对照组仔猪免疫时间为22日龄，无针注射日龄为23日龄，由于应激较大，第一次检测抗体时间为免疫后10 d。因此对照组抗体上升很快，试验组也达到合格水平。空白对照组抗体一直都是阴性，说明母源抗体或野毒抗体对试验干扰不严重。0.25头份试验组32日龄抗体不合格，和对照组差异显著。因此除0.25头份试验组以外，无针减量试验组抗体都达到了合格水平，对猪具有保护作用。笔者也同时监测了猪生长情况，结果表明传统免疫组、对照组和1头份试验组增重差异不显著，0.75头份和0.5头份、0.25头份试验组增重差异不显著，但是和前面三组增重差异显著。《现代养猪生产技术》（P269）记载第8周仔猪平均日增重应为429 g，本试验组日增重大大小于参考值。可能的原因是猪只采血应激较大，影响生长，也有可能和品种有关，由于非洲猪瘟影响，很多仔猪是商品猪再留种的母猪生产的，较纯正的三元猪生长性能要差一些。但是空白组的日增重大于其他组，可能和没有注射圆环疫苗应激小有关，如果延长试验时间，有可能观察到圆环疫苗对猪整个生产的影响。减量免疫对于猪生长的影响需要更大的样本和更长的试验期来观察。

3.2 最优减量免疫剂量

本试验的目的是验证猪圆环灭活疫苗减量免疫的效果，探索最佳免疫剂量，从而达到养猪业降本增效的最终目的。从免疫抗体分析结果来看，除0.25头份试验组抗体下降较快，32日龄变为阴性，其他组都是合格的，因此建议将0.5头份作为减量免疫的最佳剂量。

综上所述，采用无针注射器给仔猪接种圆环疫苗可以达到传统有针疫苗同样的抗体水平。除了0.25头份试验组32日龄抗体不合格以外，0.5头份、0.75头份和1头份的无针注射组抗体都达到合格水平，因此建议采用0.5头份作为仔猪减量免疫圆环病毒的最佳免疫剂量。此外，本文还对不同试验组增重进行了初步探讨，减量免疫组增重较慢，原因还需要扩大试验动物数量和试验时间进行进一步验证。