乳腺癌中Tspan8、ITGA5表达情况与临床病理特征及预后的关系*

王秦西,车康明,郭千弘

甘肃省天水市第一人民医院肿瘤外科,甘肃天水 741000

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势,严重威胁女性生命健康[1]。乳腺癌的进展为多基因、多因素协同作用的结果,研究表明,该病预后与有无腋窝淋巴结转移密切相关[2]。临床常依据术中观察是否有腋窝淋巴结转移评估乳腺癌是否发生转移,但仍会出现漏诊、误诊,影响治疗结果。所以寻找一种可准确评估乳腺癌转移的灵敏指标至关重要。四跨膜蛋白8(Tspan8)属于四跨膜蛋白超家族(TM4SF)成员,研究证实胃癌、肝癌中Tspan8呈过表达且参与肿瘤转移、复发过程[3]。整合素α5(ITGA5)属于整合素家族成员,位于染色体12q11-q13区域,胃癌、卵巢癌中ITGA5呈高表达且与不良预后有关[4-5]。但目前涉及Tspan8、ITGA5与乳腺癌关系的研究较少。因此,本研究主要探讨Tspan8、ITGA5在乳腺癌中的表达情况及其与患者临床病理特征及预后的关系,为乳腺癌早期诊断和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 将2018年4月至2020年4月本院收治的136例乳腺癌患者纳入研究,年龄25～71岁、平均(51.37±5.28)岁。纳入标准:(1)经病理检查确诊且符合《2020 CSCO版乳腺癌诊疗指南》中乳腺癌的诊断标准[6];(2)入院后接受乳腺癌根治术、腋窝淋巴结清扫术治疗。排除标准:(1)术前有放化疗、新辅助治疗、内分泌治疗史;(2)心、肝、肺、肾等组织器官功能异常;(3)合并其他恶性肿瘤、免疫缺陷疾病、血液系统疾病;(4)认知异常或精神异常;(5)妊娠及哺乳期女性;(6)依从性差。纳入研究的患者或直系亲属对本研究知情同意。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1免疫组化法检测组织标本中Tspan8、ITGA5的表达情况 收集患者癌组织标本及对应的癌旁组织标本,采用乳腺癌组织及癌旁组织中Tspan8、ITGA5的表达情况。采用4%多聚甲醛常规固定乳腺癌组织和癌旁组织标本,组织标本经脱水、石蜡包埋、切片处理后,制得厚度为4 μm的组织切片。将组织切片进行二甲苯脱蜡、不同梯度乙醇脱水处理后,使用柠檬酸钠溶液在高压高温条件下进行抗原修复,冷却后加入磷酸盐缓冲液(PBS),冲洗3次,每次5 min。随后加入5%山羊血清抗体封闭液进行封闭,滴加兔抗人Tspan8多克隆抗体(1∶50,美国Biorbyt公司)、兔抗人ITGA5多克隆抗体(1∶100,美国Biorbyt公司),4 ℃冰箱内孵育过夜,加入PBS冲洗3次,加入羊抗兔二抗IgG(1∶1 000,北京中杉金桥公司),37 ℃下孵育30 min,PBS冲洗3次。采用DAB染色试剂盒显色,苏木精复染,乙醇脱水,树脂胶封片,高倍显微镜下观察。阳性细胞的判定:显微镜下观察,细胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞。阳性细胞百分比评分:阳性细胞<5%、5%～<25%、25%～<50%、50%～<75%、≥75%分别计为0、1、2、3、4分。染色强度评分:无着色、浅黄或黄色、棕黄色、棕褐色分别为0、1、2、3分。染色指数(SI)=阳性细胞百分比评分×染色强度评分,蛋白阳性或阴性表达的判定:SI>3分为阳性,SI≤3分为阴性[7]。

1.2.2随访 通过电话、门诊复查等方式对出院的乳腺癌患者行连续36个月的随访,记录患者生存状况,随访截止时间为2023年4月。第1年每2个月随访1次,第2、3年每4个月随访1次,死亡或到随访截止时间即可终止随访。

1.3统计学处理 采用SPSS23.0统计软件进行数据处理。计数资料采用例数或百分率表示,组间比较采用χ2检验。采用多因素Cox回归分析乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的危险因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1乳腺癌组织和癌旁组织Tspan8、ITGA5阳性表达率的比较 乳腺癌组织Tspan8、ITGA5阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),见表1,图1、2。

表1 乳腺癌组织和癌旁组织中Tspan8和ITGA5表达情况比较[n(%)]

注:A为乳腺癌组织(×40);B为癌旁组织(×40);A1、B1为A、B的局部放大。

注:A为乳腺癌组织;B为癌旁组织。

2.2Tspan8、ITGA5表达情况与乳腺癌临床病理特征的关系 不同年龄、月经状况的乳腺癌患者Tspan8、ITGA5表达情况比较,差异无统计学意义(P>0.05)。低分化、肿瘤最大径≥3 cm、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有腋窝淋巴结转移、其他分子分型的乳腺癌患者Tspan8、ITGA5阳性表达率高于中/高分化、肿瘤最大径<3 cm、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无腋窝淋巴结转移、三阴性分型的乳腺癌患者(P<0.05)。见表2。

表2 Tspan8、ITGA5表达与乳腺癌临床病理特征的关系[n(%)]

2.3不同临床病理特征的乳腺癌患者3年生存率的比较 连续随访36个月后,136例乳腺癌患者中94例存活,3年生存率为69.12%(94/136)。低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有腋窝淋巴结转移、其他分子分型及Tspan8、ITGA5阳性表达患者的3年生存率低于中/高分化、TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、无腋窝淋巴结转移、三阴性分型及Tspan8、ITGA5阴性表达患者(P<0.05),见表3。

表3 不同临床病理特征的乳腺癌患者3年生存率的比较[n=94,n(%)]

2.4乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的多因素Cox回归分析 将乳腺癌患者腋窝淋巴结转移作为因变量,将单因素分析有意义的指标作为自变量进行多因素Cox回归分析,结果显示,TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、其他分子分型及Tspan8、ITGA5阳性表达是乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的危险因素(P<0.05),见表4。

表4 乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的多因素Cox回归分析

3 讨 论

乳腺癌属于激素受体依赖型恶性肿瘤,我国乳腺癌发病率呈逐年上升趋势,为女性癌症相关死亡的重要原因之一[8]。晚期乳腺癌会向远处转移,累及多脏器,腋窝淋巴结转移是导致乳腺癌远处转移、术后复发的主要因素,会增加患者死亡风险。研究证实,病灶范围、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移为评估乳腺癌患者预后的重要依据[9]。临床对乳腺癌患者实施腋窝淋巴结清扫术治疗,但手术创伤大、并发症较多,而且对腋窝淋巴结无转移的患者而言属于过度治疗,不会改善局部控制率和生存率。所以,为乳腺癌预后提供新的预测标志物,能为疾病诊断和治疗提供新思路。

四跨膜蛋白超家族成员参与恶性肿瘤转移、浸润过程,Tspan8可作为肿瘤诊断、预后评估指标[10]。有研究通过在结肠癌细胞中的实验研究发现,Tspan8为细胞膜蛋白,不影响肿瘤细胞生长、分裂,其参与癌细胞运动,Tspan8水平升高,癌细胞转移活性、浸润能力增强[11]。另一研究认为,Tspan8通过c-Met、Notch、Rhokinase等信号通路,促进肿瘤新生血管的形成[12]。本研究结果显示,乳腺癌组织Tspan8阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);不同分化程度、TNM分期、分子分型、有无腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者Tspan8表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05),Tspan8与腋窝淋巴结转移有关,提示Tspan8在乳腺癌中呈高表达且与病情进展有关。有研究发现,肠癌细胞株中Tspan8呈过表达,与消化系统肿瘤转移、浸润有关,与本研究结果相似[13]。另一研究报道,胰腺癌转移灶细胞系Tspan8 mRNA表达水平高于原发灶细胞系[14]。分析原因:经血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR)、成纤维生长因子受体(FGFR)、c-Kit等靶点阻断磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)、VEGFR/ Janus激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)等信号通路,可抑制癌细胞增殖、迁移,促使癌细胞死亡。Tspan8表达上调,会促进肿瘤细胞生长、转移,该作用与PI3K/AKT、MAPK/AKT等信号通路有关[15]。本研究结果显示,Tspan8阳性表达患者的3年生存率低于Tspan8阴性表达患者(P<0.05),提示Tspan8过表达与乳腺癌预后不良有关,有望成为评估乳腺癌预后的标志物。

整合素为细胞表面的黏附分子,包含α亚基、β亚基。整合素家族为跨膜二聚体蛋白,具有细胞黏附、信号通路受体功能,ITGA5亚基或二聚体可结合细胞外结构、基质蛋白,从而调控细胞周期,调控细胞增殖、侵袭、迁移等,其有组织、功能特异性[16-17]。ITGA5经依赖黏附、非黏附途径促进乳腺癌发生、发展。本研究结果显示,乳腺癌组织ITGA5阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05);ITGA5阳性表达与分化程度、TNM分期、腋窝淋巴结转移、分子分型有关(P<0.05)。这提示ITGA5高表达与乳腺癌发生、发展有关。免疫组化实验显示,ITGA5在肝癌组织中的表达高于普通肝组织,与本研究结果一致[18]。研究表明,乳腺癌骨转移瘤中ITGA5呈高表达,其可促进癌细胞向骨组织黏附,但肺、肝、脑转移癌中ITGA5呈低表达[19]。有研究示,抑制ITGA5可延缓肺癌细胞迁移。本研究结果显示,ITGA5阳性表达患者的3年生存率低于ITGA5阴性表达患者(P<0.05),提示ITGA5高表达与乳腺癌预后不良有关。有研究发现,胶质瘤中ITGA5表达升高且随胶质瘤WHO分级增加而升高,ITGA5表达与肿瘤增殖、恶性程度相关[20]。多因素Cox回归分析显示,TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、其他分子分型及Tspan8、ITGA5阳性表达是乳腺癌患者腋窝淋巴结转移的危险因素(P<0.05),提示Tspan8、ITGA5表达升高导致乳腺癌细胞侵袭能力增强,细胞黏附性下降,易发生腋窝淋巴结转移、侵袭,监测Tspan8、ITGA5水平变化可反映乳腺癌浸润、转移的风险。综上所述,Tspan8、ITGA5在乳腺癌患者中呈高表达,均与患者临床病理特征及预后有关。