HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1对宫颈癌的早期诊断价值

倪红妙 曾慧 丁利胜

[摘要] 目的 探討人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）-DNA分型联合血清中性粒细胞-淋巴细胞比值（lymphocyte ratio，NLR）、双皮质素样激酶1（bicorticoid kinase，DCLK1）水平对宫颈癌的早期诊断价值。方法 随机纳入2018年8月至2022年6月在笔者医院妇科确诊的120例早期宫颈癌患者为宫颈癌组，120例良性病变患者为良性组。采用ELISA法检测DCLK1水平；采用自动血细胞分析仪检测NLR；采用HPV分型基因芯片检测系统检测宫颈分泌物的HPV亚型；采用受试者操作特征（receiver operator curve，ROC）曲线来分析血清NLR、DCLK1水平诊断宫颈癌的截断值；采用四表格分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平单独及联合对宫颈癌的诊断价值。结果 与良性组相比，宫颈癌组血清NLR、DCLK1水平显著升高（P<0.05）。宫颈癌组的各类型HR-HPV阳性率均显著高于良性组（P<0.05）。以血清NLR、DCLK1水平为检验变量绘制ROC曲线，血清NLR、DCLK1预测早期宫颈癌的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.724、0.718，截断值分别为3.08、3.32。HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1检出假阳性18例，假阴性17例，Kappa值为0.725，与病理结果一致性较高。HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1水平诊断早期宫颈癌的敏感度、阴性预测值及准确度均明显高于HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平单独诊断（P<0.05）。结论 HPV-DNA分型联合NLR、DCLK1对早期宫颈癌的诊断结果与病理结果具有较高的一致性，且敏感度、准确度明显提高。

[关键词] 宫颈癌；中性粒细胞/淋巴细胞；双皮质素样激酶1；HPV-DNA分型；诊断

[中图分类号] R737.33      [文献标识码] A      [DOI] 10.3969/j.issn.1673-9701.2024.08.003

Diagnostic value of HPV-DNA typing combined with serum NLR and DCLK1 for cervical cancer

NI Hongmiao， ZENG Hui， DING Lisheng

Laboratory Department of Hangzhou Ninth Peoples Hospital， Hangzhou 311225， Zhejiang， China

[Abstract] Objective To investigate the value of receiver operating curve human papilloma virus （HPV）-DNA typing combined with serum neutrophil lymphocyte ratio （NLR） and bicorticoid kinase 1 （DCLK1） levels in the early diagnosis of cervical cancer. Methods A total of 120 patients with early cervical cancer diagnosed in our obstetrics and gynecology department from August 2018 to June 2022 were randomly included as cervical cancer group， and 120 patients with benign lesions were included as benign group. The level of DCLK1 was detected by ELISA; NLR was detected by automatic blood cell analyzer; HPV subtypes in cervical secretions were detected by HPV genotyping gene chip detection system; the cut-off values of serum NLR and DCLK1 levels in the diagnosis of cervical cancer were analyzed by using the receiver operator curve （ROC）; four table method was applied to analyze the diagnostic value of HPV-DNA typing， serum NLR， DCLK1 levels alone and in combination for cervical cancer. Results Compared with benign group， the levels of serum NLR and DCLK1 in cervical cancer group were obviously higher （P<0.05）. The positive rate of HR-HPV in cervical cancer group was obviously higher than that in benign group （P<0.05）. The ROC curve was drawn with serum NLR and DCLK1 levels as test variables， the results showed that the AUC of serum NLR and DCLK1 predicting early cervical cancer was 0.724 and 0.718， respectively， and the cut-off value was 3.08 and 3.32， respectively. HPV-DNA typing combined with serum NLR and DCLK1 detected 18 false positives and 17 false negatives， Kappa value was 0.725， which was consistent with pathological results. The sensitivity， negative predictive value and accuracy of HPV-DNA typing combined with serum NLR and DCLK1 levels in the diagnosis of early cervical cancer were obviously higher than those of HPV-DNA typing， serum NLR and DCLK1 levels alone （P<0.05）. Conclusion The results of HPV-DNA typing combined with NLR and DCLK1 in the diagnosis of early cervical cancer are highly consistent with the pathological results， and the sensitivity and accuracy are obviously improved.

[Key words] Cervical cancer; Neutrophils/lymphocytes; Doublecortin like kinase 1; HPV-DNA typing; Diagnosis

宫颈癌是一种常见的妇科恶性肿瘤，其发病率和病死率分别在全球女性恶性肿瘤中排名第3位和第4位，严重危害女性的身心健康[1]。随着靶向治疗等新型治疗技术的出现，宫颈癌的治疗方法已经逐步向精确医学转变，而早期诊断和早期治疗是提高宫颈癌患者生存率的有效手段。虽然有细胞学涂片（thinprep cytologic test，TCT）和人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）检测等筛查工具，但其平均敏感度和特异性令人并不满意[2]。因此，需要有效的生物标志物，可为宫颈癌的早期诊断的治疗提供参考。近年研究证实，恶性肿瘤的发生和发展与炎症因子密切相关，在常见的血液炎症指标中，中性粒细胞-淋巴细胞比值（neutrolphil to lymphocyte ratio，NLR）可有效反映人体内炎症反应[3]。NLR在睾丸生殖细胞肿瘤（testicular germ cell tumors，TCCT）中表达升高，表现出良好的鉴别诊断潜力，可作为预测TCCT的标志物[4]。

双皮质素样激酶1（doublecortin-like kinase 1，DCLK1）是一种多功能蛋白，参与干细胞生成、肿瘤细胞克隆形成和肿瘤发生等过程[5]。研究表明，DCLK1的表达水平随着肿瘤严重程度的恶化而增加，而降低DCLK1表达可显著抑制肿瘤发展，且不会对正常干细胞造成明显损伤[6]。HPV是宫颈癌形成的重要因素，HPV-DNA分型检测可有效阐明HPV感染与宫颈癌发病之间的关系[7]。宫颈癌的进展过程比较复杂，仅凭单个指标难以对其进行准确的早期诊断，需多个指标联合进行判定[8-9]。本研究检测宫颈癌患者血清中NLR、DCLK1水平，分析二者及联合HPV-DNA分型对宫颈癌的早期诊断价值。

1  资料与方法

1.1  一般资料

选取2018年8月至2022年6月在笔者医院妇科确诊的120例早期宫颈癌患者为宫颈癌组。纳入标准：①通过医疗手段，患者被确诊为早期宫颈癌[10]；②首次被确诊，入组前未进行治疗（放疗、化疗等）；③临床资料完整。排除标准：①合并其他肿瘤疾病（如乳腺癌、卵巢癌等）者；②子宫肌瘤者；③肝肾功能异常或不全者；④认知障碍，无法正常交流者。另外同期纳入120例良性病变患者作为良性组。两组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。该研究经本院伦理委员会批准（伦理审批号：2018LW57），研究对象均签署知情同意书。

1.2  血清NLR、DCLK1检测

清晨空腹抽取研究者静脉血6ml，分为2份，一份室温静置30min，以4000r/min离心后分离获得血清，使用特定的酶联免疫测定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技有限公司）检测血清中DCLK1的蛋白水平。另一份使用迈瑞BC-6800全自动血液细胞分析仪检测中性粒细胞（neutrophils，NeuC）及淋巴细胞（lymphocyte，LymC），中性粒细胞/淋巴细胞（neutrophil-lymphocyte ratio，NLR）定义为NeuC绝对值除以LymC绝对值的比值。

1.3  HPV-DNA分型检测

在患者月经期结束1周后进行阴道取样检测。将采集的宫颈口分泌物置于细胞保存液中保存，使用HPV分型基因芯片检测系统检测宫颈分泌物的亚型，其中高危亚型18种，任何一种亚型检测阳性则视为HR-HPV阳性。

1.4  观察指标

比较宫颈癌组、良性组血清NLR、DCLK1水平及HPV-DNA分型情况，受试者操作特征（receiver operator characteristic，ROC）曲线分析血清NLR、DCLK1水平诊断早期宫颈癌的截断值；以病理结果为金标准，分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平单独及联合对早期宫颈癌的诊断价值。

1.5  统计学方法

采用SPSS 25.0统计学软件对数据进行处理分析，计量资料均符合正态分布，以均数±标准差（）表示，組间比较采用独立样本t检验，计数资料以例数（百分比）[n（%）]表示，采用χ2检；采用ROC分析血清NLR、DCLK1水平诊断宫颈癌的截断值；采用四表格分析HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平单独及联合对宫颈癌的诊断价值。P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  血清NLR、DCLK1与HPV-DNA分型比较

与良性组相比，宫颈癌组血清中的NLR、DCLK1水平升高（P<0.05），见表2。宫颈癌组的各类型HR-HPV阳性率均显著高于良性组（P<0.05），见表3。

2.2  血清NLR、DCLK1水平对早期宫颈癌的诊断价值

以血清NLR、DCLK1水平为检验变量绘制ROC曲线。血清NLR、DCLK1预测早期宫颈癌的曲线下面积（area under curve，AUC）分别为0.724、0.718，截断值分别为3.08、3.32，见图1。

2.3  HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1水平诊断宫颈癌与病理标准的一致性分析

HPV-DNA分型单独检出假阳性17例，假阴性24例，Kappa值为0.658（P<0.05），与病理结果一致性较高。血清NLR水平检出假阳性36例，假阴性28例，Kappa值为0.467（P<0.05）；血清DCLK1水平检出假阳性55例，假阴性21例，Kappa值为0.367（P<0.05）。HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1水平检出假阳性16例，假阴性17例，Kappa值为0.725（P<0.05），与病理结果一致性较高，见表4。

2.4  HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1水平诊断早期宮颈癌的效能

HPV-DNA分型联合血清NLR、DCLK1水平诊断早期宫颈癌的敏感度、阴性预测值及准确度均明显高于HPV-DNA分型、血清NLR、DCLK1水平单独诊断（P<0.05），见表5。

3  讨论

宫颈癌是一种影响女性生殖系统的恶性肿瘤，其发病率居女性常见癌症中第4位，对女性身心健康构成严重威胁[11-13]。晚期宫颈癌治疗效果较差且易复发，生存率亟待提高；然而宫颈癌在早期无较多典型症状，其中阴道出血、分泌物异常等症状易与其他妇科病混淆，早期诊断难度较大[14]。因此，寻找有效的生物标志物对宫颈癌进行早期诊断，对患者的生命健康有着重大意义。

癌细胞以及周围的基质和炎性因子通过相互协调作用产生炎症性肿瘤微环境（tumor microenvironment，TME），可诱导癌症的发生，并影响癌症进展的所有阶段[15-16]。炎症标志物具有成本低、易获得的特点，且炎症与肿瘤之间的关系被多项研究证实，它可能通过刺激肿瘤细胞增殖或迁移侵袭，在癌症的进展中起重要作用[4，17]。NLR是炎症疾病中简单、有效的代表性标志物[4]。本研究结果表明，宫颈癌组的NLR显著高于良性组，这与Han等[18]发现在子宫宫颈癌中NLR上调的结果一致，为NLR用于诊断早期宫颈癌疾病提供了理论支持。DCLK1是一种微管相关蛋白，属于钙调蛋白依赖性激酶（calmodnlin dependent protein kinase，CaMK）家族成员，可通过促进恶性肿瘤的生长、EMT过程等参与肿瘤的发生、发展。

DCLK1作为肿瘤中潜在的癌症干细胞标志物，在结直肠癌中DCLK1表达上调，DCLK1抑制剂可以阻断宫颈癌AR1/β-连环蛋白途径，减弱癌细胞干性[19]。Lai等[20]的研究表明，DCLK1在子宫内膜癌中DCLK1表达上调，可通过调节Akt/NF-κB途径活化，促进子宫内膜癌细胞的增殖和转移。与上述研究结果一致，本实验中宫颈癌组的DCLK1显著高于良性组，这提示DCLK1参与宫颈癌疾病的发生、发展。另外，研究发现宫颈癌的发生发展受NF-κB途径调控，而DCLK1参与NF-κB信号转导，NLR则由NF-κB途径激活[21-22]。此外，NLR、DCLK1预测早期宫颈癌的AUC为0.724、0.718，提示血清NLR、DCLK1对早期宫颈癌有一定的诊断价值。

宫颈癌诱因繁多，其中HPV感染是宫颈癌的主要诱导因素之一，因此，HPV筛查、TCT检查方法是早期宫颈癌筛查的主要手段[23]。然而，细胞学假阳性率很高，易造成过度医疗和额外的经济损失，因此，建议进行敏感度高的HPV-DNA检测[24]。研究显示，多项指标联合可提高对宫颈癌诊断的准确度[25]。本研究中将HPV-DNA分型作为早期宫颈癌的诊断标准，发现HPV-DNA分型与病理结果的一致性为良，表明单独使用HPV-DNA分型作为早期宫颈癌的独立诊断方法不甚理想。因此本研究将HPV- DNA分型、NLR、DCLK1联合用于早期宫颈癌的诊断，结果显示，联合诊断结果与病理结果具有较高的一致性，且具有更高的敏感度、阴性预测值及准确度，表明NLR、DCLK1联合HPV-DNA分型对于早期宫颈癌的诊断效果较为理想，可较为灵敏地筛查出早期宫颈癌患者，并尽早进行治疗。

综上所述，HPV-DNA分型联合NLR、DCLK1对早期宫颈癌的诊断结果与病理结果具有较高的一致性，且敏感度、准确度明显提高。由于宫颈癌具有可预防性、可恢复性，因此，对其早诊断、早防治，可有效保障患者生命安全。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。

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（收稿日期：2023–03–28）

（修回日期：2023–11–24）

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