酒泉市猪场主要病毒性疾病的检测与分析

张溪 张翠花 南金鱼 张若玉

摘  要：为了解2023年酒泉市几种主要猪病毒病的流行情况，本研究采用荧光定量RT-PCR方法，对酒泉市630份猪血清、270份猪组织进行了病原学检测。结果显示：检出阳性血清107份，样本个体阳性率由高到低依次为猪繁殖与呼吸综合征病毒（7.78％）、猪伪狂犬病病毒（4.92％）、猪细小病毒（4.29％）、非洲猪瘟病毒（未检出）、猪瘟病毒（未检出）、口蹄疫病毒（未检出）；样本混合感染率为3.80％，猪繁殖与呼吸综合征病毒混合猪伪狂犬病病毒感染率最高（1.90％）。本次病原学检测可为酒泉市猪场疫病综合防控提供参考。

关键词：猪；病毒性疾病；病原学检测

中图分类号：S816 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2024）01-0031-04

随着养猪业集约化、规模化程度的提高，猪病的发生、流行情况也越来越复杂。疫病的流行与暴发成为制约养猪业健康有序发展的主要原因，严重危害了养猪业的发展和人民的健康。为摸清酒泉市猪病的流行情况和危害程度，给疫病的预警和防控提供科学依据，降低疫病暴发对养猪业的打击，笔者在流行病学调查的基础上于2023年7月对酒泉市15家规模化猪场、52家散养户、5家生猪屠宰场的630头猪，900份样本（血清630份，组织270份）开展了非洲猪瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）、猪瘟病毒（classical swine fever virus，CSFV）、口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV）、猪伪狂犬病病毒（porcine pseudorabies virus，PRV）、猪细小病毒（porcine parvovirus，PPV）等病原检测。

1  材料与方法

1.1 样本来源

随机采集辖区内15家规模化猪场、52家散养户和3家生猪屠宰场。其中规模化猪场包括  6家种猪场和9家育肥猪场，每家猪场采集生猪血清30份，共计450份；散养户共采集猪血清90份；每家屠宰场采集猪血清30份，并平行采集猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结各30份，共计90份猪血清、270份猪组织。

1.2 主要试剂

非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒荧光PCR检测试剂盒均购自青岛立见生物科技有限公司；猪细小病毒荧光PCR检测试剂盒购自哈尔滨元亨生物药业有限公司；DNA/RNA病毒基因提取试剂盒购自青岛立见生物科技有限公司。

1.3 主要仪器

Step One型荧光PCR购自德国ABI Applied Biosystems公司。

1.4 样本的处理

血清样本：将0.5 mL血清，用高速冷冻离心机按12 000 r/min离心3 min，取离心上清液200 μL。

组织样本：称取猪肺脏、扁桃体、颌下淋巴结0.1～0.2 g或剪下黄豆大小的体积，并加入5倍体积生理盐水（1～2 mL），用组织研磨器将组织研磨成组织匀浆液，取组织匀浆液      0.5 mL，用高速冷凍离心机按12 000 r/min离心3 min，取上清液200 μL。

1.5 样本的荧光RT-PCR检测

按照各病原的荧光RT-PCR检测试剂盒说明书进行试剂配制，在荧光PCR仪上按照试剂盒说明书要求设定具体的反应条件并收集荧光信号。

1.6 不同病原的流行特点分析

根据荧光RT-PCR检测结果，进行不同病原阳性率的统计分析，确定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV流行病学特点。

1.7 不同饲养规模的流行特点分析

根据荧光RT-PCR检测结果，进行不同饲养条件下阳性率的统计分析，确定酒泉市ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV的区域性流行病学特点。

1.8 混合感染的检测分析

根据荧光RT-PCR检测结果，比对各病原的交叉感染情况，分析ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等致病源的混合感染情况。

1.9 不同组织样本的病毒检出情况分析

根据荧光RT-PCR检测结果，对同一头猪的血清、肺脏、扁桃体、颌下淋巴结病毒检出率进行分析，分析不同器官的病毒检出率。

2  结果

2.1 不同病原的流行特点分析

对630份血清进行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV阳性率的统计分析，结果如表1所示。由表1可知，PRRSV阳性率最高，达7.78％；PRV次之，为4.92％；PPV阳性率为4.29％；ASFV、CSFV、FMDV阳性率为0，表明不同病原阳性率差别较大。

2.2 不同饲养规模的流行特点分析

对不同饲养条件下的630份血清进行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV阳性率的统计分析，结果如表2所示，在不同养殖规模下不同病原的阳性率存在较大差异，阳性率由高到低依次为：散养户、育肥猪场、种猪场、屠宰场；PRRSV的阳性率在不同饲养条件下均最高；散养户中PRRSV、PRV、PPV阳性率均最高，分别为22.22％、12.22％和12.22％。表明不同饲养方式对不同病原阳性率的影响较大，散养户可能标准化程度低、饲养管理粗放、防疫密度低、疫苗免疫品种少、消毒灭源不彻底，导致其阳性率最高。

2.3 混合感染的检测分析

对630份血清进行ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV交叉感染情况比对分析，结果如表3所示，含两种或两种以上病原的样本共24份，混合感染率为3.80％，PRRSV+PRV混合感染率最高，为1.90％，PRRSV+PPV混合感染率为1.11％，PPV+PRV混合感染率为0.79％，未检测到PPV+PRV+PRRSV三种病原混合感染的情况，表明临床中有混合感染情况发生，应提高重视。

2.4不同组织样本的病原检出情况分析

对3家生猪屠宰场90头猪的血清、肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等样本进行平行采样，并对ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等疫病进行RT-PCR检测，分析不同器官的病原检出率，结果如表4所示。由表4可知，猪血清、肺脏、扁桃体、颌下淋巴结等样本病原检出结果相同，表明RT-PCR检测准确率高，敏感性强。

3  结论

试验选取15家规模化猪场（种猪场6家，育肥猪场9家）、52家散养户和3家生猪屠宰场，采集猪血清样本630份，组织样本270份，通过对不同病原、不同饲养规模，不同组织样本进行荧光PT-PCR检测，检出阳性血清107份，样本个体阳性率分别为PRRSV 7.78％、PRV 4.92％、PPV 4.29％，其中ASFV、CSFV、和FMDV均未检出阳性样本。表明PRRSV、PRV、PPV在酒泉市猪场（散养户）中普遍存在。根据检测结果显示，PRRSV感染率最高，尤其散养户中阳性率达22.20％。PRRSV在种猪场和育肥猪场阳性率分别为5.00％和5.90％；PRV在散养户、种猪场和育肥猪场阳性率分别为12.20％、2.78％和4.81％；PPV在散养户、种猪场和育肥猪场阳性率分别为12.20％、3.33％和3.33％。这表明部分散养户饲养管理手段粗放、防疫密度低、接种的疫苗品种少，对猪病的预防控制能力较弱。通过流行病学调查显示，酒泉市猪口蹄疫和猪瘟疫苗免疫率高，且从未发生过非洲猪瘟，根据检测结果显示ASFV、CSFV和FMDV阳性率为0，说明接种疫苗对疫病的预防和控制呈正相关。

猪感染RRSV、PRV、PPV后临床表现均为公猪种用性能下降，母猪返情久配不孕，妊娠母猪流产，产死胎、木乃伊胎和新生仔猪死亡的临床表现，临床诊断很难区分。根据检测结果显示PRRSV、PRV、PPV有交叉感染的情况，使用荧光RT-PCR的方法能够准确地鉴别病毒，从而采取合理的预防治疗手段。对有临床症状的猪要及时隔离治疗并做好消毒灭源工作，以防疾病的传播和出现继发感染。

在生猪屠宰场中检出PRRSV、PRV、PPV等病毒，说明临床健康猪存在带毒现象，建议猪场定期开展病原学检测，以便有效防止病原的传播。

ASFV、CSFV、FMDV、PRRSV、PRV、PPV等病原引起的病毒性疾病在臨床上无特效药物，主要通过接种疫苗进行预防，但为了防止大肠杆菌、沙门菌等继发感染，在发生疫病时常用抗菌素和磺胺类药物进行防治，可以减少发病率和死亡率。通过有效的检测手段对病原进行准确、及时的监测和诊断是防控疫病的重要环节。在生产中可采取以下措施：严禁从暴发疫病的地区引进种猪；对于购入的猪应立即隔离观察并进行血清学或病原学检查；制定和实施科学合理的免疫程序；定期开展临床检查、实验室检测和消毒灭源工作。

参考文献

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基金项目：酒泉市科技局科技支撑计划项目——PRRS（猪繁殖与呼吸综合征）的防治技术研究与应用（项目编号：2023CA2007）

作者简介：张溪（1988－ ），女，硕士，兽医师，主要从事动物防疫、病原学监测、免疫抗体检测等工作；E-mail：515801697@qq.com

*通信作者：张翠花（1981－ ），女，本科，兽医师，主要从事动物防疫、病原学监测、免疫抗体检测、疫情报告及分析等工作；E-mail：350509808@qq.com