黄连解毒汤对幼龄自发性高血压大鼠炎性因子、血管性假血友病因子水平的影响

原发性高血压(essential hypertension, EH)是临床常见的心血管疾病之一，高血压是多种心脑血管疾病的重要病因和危险因素。炎症在高血压病中的作用和地位已愈加受到重视。炎症与高血压互为因果、相互影响，是一个恶性循环的关系[1]。现代药理学研究证实黄连解毒汤具有良好的抗菌、消炎、提高免疫功能等作用，目前自发性高血压大鼠(Spontaneity hypertension rat，SHR)为国际公认的最接近于人类原发性高血压的动物模型，研究幼龄SHR可以更好的了解内皮功能和炎性情况，因此我们本研究以幼龄SHR为研究对象，以黄连解毒汤为施加因素，观察幼龄SHR血浆中与炎症反应密切相关的超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平，内皮功能变化，并观察黄连解毒汤治疗对幼龄SHR hs-CRP、MCP-1和vWF的水平的影响，探讨黄连解毒汤对炎性因子的影响和内皮的作用。

1 材料与方法

1.1 药物制备

黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子按3∶2∶2∶3 比例组成。其药材均购于广西中医学院附属瑞康医院药剂科，专人负责质量标准，煎煮取汁，浓缩成清膏，1 g清膏相当于1.5 g 黄连解毒汤生药。

1.2 实验动物

选用雄性6周自发性高血压大鼠(SHR)16只、雄性6周正常血压Wistar-Kyoto 大鼠(WKY)8只，体重80～130 g。SHR购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京) 2006-0009。WKY购自广西医科大学动物实验中心，合格证号：SCXK(桂)2006-0003。

1.3 试剂及仪器

hs-CRP、CMP-1和vWF试剂盒，武汉中美科技有限公司生产；BP-6大鼠无创血压测试仪，成都泰盟科技有限公司生产；MK3酶标仪，美国Thermo生产；1575洗板机，美国BIO-RAD生产。

1.4 实验分组

SHR随机分为黄连解毒汤组、模型组，每组8只。WKY大鼠为空白对照组。黄连解毒汤组：黄连解毒汤清膏蒸馏水稀释1倍，每日上午9时按10ml/(kg·d)灌胃。模型组和对照组：每日同时按10 ml/(kg·d)蒸馏水灌胃。每日1次，连续给药6周。

1.5 数据采集

1.5.1 血压测量 分别于给药前及给药后1、2、4、6周，测量大鼠安静清醒状态下尾动脉收缩压(SBP)。每只鼠连续测量SBP 3次，间隔60 秒，取其平均值。

1.5.2 样品采集与测定 大鼠给药6周后，用2%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血6ml，按3000r/min离心10 分钟，用于hs-CRP、CMP-1和vWF水平检测。标本均置于-20℃冰箱保存待测。测定采用酶联免疫吸附双抗体夹心法(ELISA)， hs-CRP产品编号为E0821r，CMP-1产品编号为E0087r， vWF产品编号为E0833r，操作步骤均严格按试剂盒说明书进行。

1.6 统计学处理

数据以均数标准差(s)表示，采用SPSS11.0统计软件分析处理数据，两组数据间的比较应用t检验，组内为配对t检验，P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 对幼龄SHR血压的影响

正常情况下6周幼龄大鼠的血压仍然处于自发性初始升高的阶段。我们观察结果如表1所示：与对照组比较，治疗前模型组和黄连解毒汤组SHR与对照组没有统计学差异(P>0.05)；随着鼠龄的增长模型组呈现血压进行性增高，第2周时表现出血压显著升高(P<0.05)，第6周时血压及其显著升高(P<0.01)；而黄连解毒汤组能降低大鼠进行性血压增高的趋势，第2周血压升高(P<0.05)，第4周时血压恢复至对照组同等水平(P>0.05)。与同时间段模型组比，黄连解毒汤组在给药第4周后对SHR产生了显著的降压作用(P<0.05)。与本组治疗前比较，黄连解毒汤组血压前后变化没有统计学差异(P>0.05)。

2.2 黄连解毒汤对幼龄SHR大鼠hs-CRP、MCP-1、vWF的影响

由表2结果所示，与空白组比，模型组hs-CRP，vWF显著升高(P<0.01)，CMP-1无显著变化，表明SHR存在炎性反应和内皮功能不全。与模型组比，黄连解毒能够显著降低血浆hs-CRP、vWF(P<0.05)含量。

表1 实验前后各组大鼠血压比较

注：与同时间段空白对照组比,aP<0.05，bP<0.01；与同时间段模型组比,cP<0.05

表2 实验后各组大鼠血浆hs-CRP、MCP-1、vWF的变化

注：与空白对照组比：aP<0.01；与模型对照组比：bP<0.05；取标本时，模型组损失1只。

3 讨论

自发性高血压大鼠心血管疾病发生率高，其心血管疾病发病机制、高血压心血管并发症、外周血管阻力变化、对盐的敏感性等多方面都与人类高血压患者相似。该种大鼠出生后3～4周血压开始升高，12～24周时达到高峰，因此出生后4～12周是血压持续升高的重要阶段。黄连解毒汤由黄连、黄芩、黄柏、栀子4味中药按比例配伍组成，其中以黄连泻心火、兼泻中焦之火为君；黄芩清肺热、泻上焦之火为臣；黄柏泻下焦之火，栀子通泻三焦之火，导热下行，合为佐使，共以收泻火解毒之功，无论内服、外服，均有良好的治疗作用。黄连解毒汤及其配伍成分在心血管疾病的防治中起着越来越重要的作用，在临床上已用于高血压等心血管疾病的治疗[2]。本研究以6周龄SHR为研究对象，目的在于考察黄连解毒汤对自发性高血压的预防作用，从而体现中医“治未病”的优势。

本研究表明SHR从第6 周到第12周与同龄WKY大鼠比，血压呈进行性增高，与模型组比较，黄连解毒汤组能抑制幼龄SHR血压进行性增高，表明该方能控制幼龄SHR血压的上升，对自发性高血有一定的预防作用。

近年研究发现，EH的炎性反应性主要表现在炎性因子对血管内皮功能的影响。血管内皮可分泌多种血管活性物质如内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)和vWF。其中vWF主要由上皮细胞合成且储存于weibel-palade小体中[3]。当血管内皮受损时，Weibel-Palade小体发生变形性损害，vWF被释放，血浆中vWF水平升高，因此，血浆vWF是反映血管内皮细胞受损的重要指标。本研究发现，vWF在12周龄SHR血浆中含量较空白对照组明显增加(P<0.05)，说明在SHR在血压达到高峰前已发生内皮损伤，应用黄连解毒汤之后，vWF较模型组显著降低(P<0.05)，说明黄连解毒汤有可能能够预防SHR内皮受损从而降低了vWF。

内皮受损所致的高血压与C反应蛋白(C-reactive protein, CRP)参与的炎性反应密切相关[4]。CRP对炎症的反应，实际上是炎症反应过程中各种细胞因子信号的一种放大。Bautista等[5]2001年首次明确血清CRP是高血压的独立危险因子。高浓度CRP可促进血管内皮细胞增生、迁移、动脉内膜增厚，促进动脉粥样硬化的形成、发展，导致血管重构、循环阻力增加。多项大型研究显示超敏C反应蛋白作为一种炎性生物标志是心血管事件的独立预测因子，同时能预测高血压和心血管事件发生[6]。本研究中，hs-CRP在12周龄SHR中明显高于空白对照组，有显著的差异(P<0.05)，与其有高血压预测作用相一致。应用黄连解毒汤能降低hs-CRP，与模型组比较有显著差异(P<0.05)。

MCP-1是炎症的始动因子及标志[7]。在MCP-1诱导下，单核细胞粘附于内皮表面，表达细胞因子参与并扩大炎症反应，损伤内皮细胞，内皮细胞通透性增加使血液中的脂质易于沉积在内膜，此亦为As发生的早期关键环节。然而本实验发现，与空白对照组相比，12周龄地SHR血浆中MCP-1水平有升高趋势，但没有统计意义。应用黄连解毒汤对幼龄SHR血浆的MCP-1也无明显影响。推测是否与治疗的时间等有关，是否改变局部组织的炎性反应亦有待研究。

总之，本研究表明SHR在血压达到高峰前已存在内皮功能不全，部分炎性反应，早期应用黄连解毒汤能预防内皮损伤，减轻炎性反应。通过早期抗炎和保护内皮干预，不仅仅有利于血压自身的好转，更有利于控制其并发症，本研究考察黄连解毒汤对大鼠自发性高血压的预防作用，与中医“治未病”相符，对有明显高血压家族史的人群提前预防高血压有重要意义，这也为中医药抗高血压治疗策略提供了新的思路。关于黄连解毒汤具体的保护内皮功能、抗炎作用机制尚待今后深入的研究。

[1]Vaziri ND, Rodriguez-Iturbe B. Mechanisms of disease: Oxidative stress and inflammation in the pathogenesis of hypertension[J]. Nat Clin Pract Nephro, 2006, 2(10): 582-593.

[2]李运伦. 黄连解毒汤加减治疗高血压病30例临床研究[J]. 国医论坛，2000，15(2)：38-39.

[3]Lim HS, Lip GY, Blann AD, et al. Plasma von Willebrand factor and the development of themetabolic syndrome in patientswith hypertension[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2004, 89 ( 11 ): 5377-5381.

[4]李自微，赵妍，周惠华. 代谢综合征患者血管内皮损伤标志物、C反应蛋白与胰岛素抵抗的关系[J]. 微循环学杂志， 2007，17(4)：47-48.

[5]Bautista LE, Lopez JP, Vera LM, et al. Is c-creative protein an independent risk factor for essential hypertension[J]. J Hypertens, 2001, 19: 857-861.

[6]Ridker PM. C-reactive protein and the prediction of cardiovas-cular events among those at intermediate risk: moving an inflammatory hypothesis toward consensus[J]. J Am Coll Cardiol, 2007, 49(21): 2129-2138.

[7]毋淑珍，赵洛沙，范萍. 氯沙坦对高血压病患者单核细胞趋化蛋白-1的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2008，6(9)：1029-1030.