高效液相色谱法测定饮料中柠檬黄、日落黄含量

巩强

柠檬黄、日落黄在饮料中作为着色剂被广泛使用，《食品添加剂使用卫生标准》规定了其最高限量，本实验在GB/T 5009.35-2003基础上，对其检验方法进行了优化。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱仪（岛津，配紫外检测器）；0.02mol/L乙酸铵：经0.45um滤膜过滤；甲醇：色谱纯，经0.45um滤膜过滤；柠檬黄、日落黄标准使用液 1ug/mL、2ug/mL、3ug/mL、4ug/mL，进样前经0.45um滤膜过滤；聚酰胺粉（200目）；乙醇-氨溶液：取2mL的氨水，加70%乙醇至100mL；200g/L柠檬酸溶液。

1.2 样品制备

称取10.0g饮料于烧杯中，然后用20%柠檬酸调pH至酸性，加入0.5g～1.0g聚酰胺粉吸附色素，全部转至G3漏斗中，以pH值为4的酸性热水洗涤多次（约200mL），洗去糖等物质。用甲醇-甲酸溶液洗涤1次～3次，每次20mL，至洗液无色。再用70℃热水多次洗至流出液为中性。用乙醇-氨水分次解吸，收集解吸液，于水浴除氨并蒸发至2mL，用50%乙醇定容至5mL，备测定用。

1.3 测定

色谱条件：波长：254nm；HjchromC18反相柱；流动相：0.02mol/L乙酸铵：甲醇（85：15）；流速：1mL/min；进样体积 10ul；外标法峰面积定量。

1.4 柠檬黄、日落黄的标物图谱（4ug/mL）

2 结果分析与讨论

结果表明：饮料中，方法添加柠檬黄、日落黄回收率分别为99.2%、99.4%。与国家标准检验方法（GB/T 5009.35-2003）结果比较，经配对t检验（p>0.05）无显著性差异。

本法与GB/T 5009.35-2003规定的方法不同之处在于：本法不需要梯度洗脱程序。原因是：GB/T 5009.35-2003规定的方法有8种着色剂的同时检验，而在实际的检验过程中可以根据产品的色泽通过感官确定其着色剂检验项目。当前，市场所售的饮料中添加柠檬黄、日落黄的占多数，因而，在实际检验中可以运用本法进行检验。GB/T 5009.35-2003规定的方法需要用到配置梯度洗脱装置的液相色谱，有些检验机构尚缺乏此硬件设备，本方法的提出可以较好地解决这一问题。

[1]GB/T 5009.35-2003，食品中合成着色剂的测定[S].