奥沙利铂原料药3种含量测定方法比较

费瑞娟，陈祥峰，任 凤

（1.江苏省电业职工疗养院，江苏无锡 214164；2.江苏奥赛康药业有限公司，江苏南京 211112）

奥沙利铂原料药3种含量测定方法比较

费瑞娟1，陈祥峰2，任 凤2

（1.江苏省电业职工疗养院，江苏无锡 214164；2.江苏奥赛康药业有限公司，江苏南京 211112）

目的：建立奥沙利铂原料药的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法测定奥沙利铂原料药的含量，并与UV法及炽灼残渣法进行比较。结果：3种检测方法均具可行性。结论：高效液相色谱法测定干扰小，操作方便，结果准确。

奥沙利铂；HPLC；含量测定

奥沙利铂(Oxaliplatin)为为继顺铂、卡铂之后，由法国Sanofi Winthrop公司开发，并于1996年首次在法国上市的第三代铂类抗癌药物[1]。该药是对结、直肠转移癌，尤其是对耐氟尿嘧啶的结、直肠癌有较好疗效的第一个铂类药物。2004年1月FDA批准了奥沙利铂联合方案作为晚期结直肠癌的一线方案[2]。此外Missct JL[3]报道，奥沙利铂对卵巢癌、淋巴瘤、非小细胞肺癌、头颈部肿瘤也有比较客观的疗效[4]。本文主要依据奥沙利铂分子结构特点并参照文献资料以及中国药典2000年版二部上原料药的有关规定及新药(西药)的审批要求进行[5]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

岛津LC-10A高效液相色谱仪系统（包括LC-10AT泵，SPD-10A紫外检测器，C-R6A色谱数据处理仪）、756MC紫外分光光度仪（上海第三分析仪器厂）。

1.2 试药

甲醇（色谱纯）、奥沙利铂（合肥海通药物研究所，980807、980811、980815）、对照品（上述奥沙利铂原料经重结晶三次，经检查符合奥沙利铂对照品暂订质量标准）。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱法(HPLC)

2.1.1 色谱条件

色谱柱：C18柱，150×4.6 mm，5 μm（phnomenex U.S.A）；流动相：甲醇-水(5∶95)；检测波长：250 nm；流速：1 ml/min；进样量：20 μl。

2.1.2 系统适用性试验

按上述色谱条件，分别量取含量测定项下对照品溶液及供试品溶液各20 μl注入液相色谱仪，理论板数按奥沙利铂峰计算不低于3000。

2.1.3 标准曲线

取奥沙利铂对照品适量(约18 mg)，精密称定，置25 ml量瓶中，加流动相适量振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取 1、2、3、4、5 ml于 10 ml量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀，分别量取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量为横坐标，奥沙利铂峰峰面积为纵坐标进行线性回归，回归方程为：A=20778.0C-250.3，r=0.999 7，表明奥沙利铂在1.384～6.920 μg范围内呈线性关系。

2.1.4 进样精密度

取奥沙利铂适量，配制一样品溶液，连续进样5次，计算精密度RSD为0.39%。

2.1.5 精密度试验

取同一批号奥沙利铂原料5份，约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，照含量测定项下方法测定，并计算奥沙利铂的含量，结果奥沙利铂峰面积的RSD为0.18%，表明进样精密度良好。

2.1.6 含量测定

取本品约20 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加流动相适量振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取奥沙利铂对照品适量，精密称定，同法制成每1毫升中约含奥沙利铂0.2 mg的溶液为对照品溶液。分别量取供试品及对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定奥沙利铂峰峰面积，计算即得，测定本品三批（980807、980811、980815）的含量分别为 99.72%，103.1%，101.1%。

2.2 紫外分光光度法(UV法)

2.2.1 标准曲线

取奥沙利铂对照品适量，精密称定，用水溶解，制成每1毫升约含奥沙利铂0.5 mg的标准贮备液，精密量取标准贮备液 1、3、5、7、10 ml，置 25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外分光光度法(中国药典2000年版二部附录ⅣA)于250 nm波长处，测定各溶液的吸收度，以奥沙利铂浓度(C)为横坐标，吸收度(A)为纵坐标，进行线性回归，回归方程为A=-0.00282+0.00664 C，r=0.999 9。结果显示奥沙利铂在18.56～185.6 μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

2.2.2 溶液稳定性试验

取标准曲线项下的标准溶液置室温下，立即测定，并分别在 1、2、4、6、8 h 及 1、2、3、4 d 测定溶液的吸收度， 以 0 小时的吸收值为100%计算4 d内溶液的稳定性，结果显示日内差的RSD为0.15%，日间差的RSD为0.13%，溶液在4 d内吸收度没有明显的变化。

2.2.3 精密度试验

2.2.3.1 重复性试验 取同一批号奥沙利铂原料5份，约25 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加水振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5 ml置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照含量测定项下的方法测定各样品中奥沙利铂的含量，结果含量测定的平均值为99.61%，RSD为0.20%，表明本方法的重现性良好。

2.2.3.2 中间精密度 分别于不同时间和不同的仪器上，照含量测定项下方法进行同一批号样品（批号：980807）的含量测定，测得平均含量为（99.42±0.15）%，RSD 为 0.15%。

2.2.4 含量测定

取本品约25 mg，精密称定，置50 ml量瓶中，加水适量振摇（或超声）使溶解，并定容至刻度，摇匀，精密量取5 ml置25 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取奥沙利铂对照品适量，精密称定，同法制成每1毫升中约含奥沙利铂100 μg的溶液为对照品溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录ⅣA）于250 nm波长处测定供试品及对照品溶液的吸收度，计算，得本品三批样品（980807、980811、980815）测定结果分别为 99.56%、99.43%、99.27%。

2.3 炽灼残渣法

2.3.1 精密度试验

取同一批号样品(批号:980807)5份，精密称定，照含量测定项下的方法操作，计算含量，测定结果奥沙利铂峰面积的RSD为0.68%，表明进样精密度良好。

2.3.2 含量测定

取本品约1.0 g，照中国药典2000年版二部附录ⅧN炽灼残渣检查法操作，置已炽灼至恒重的坩锅中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，放冷至室温，在400℃炽灼使完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在400℃炽灼至恒重，测得本品 3 批（980807，980811，980815）的含量为 99.65%，99.95，99.42%。

3 讨论

分别采用高效液相色谱法（HPLC）[6]、紫外分光光度法（UV）和炽灼残渣法进行本品含量测定。奥沙利铂分子结构内存在共轭体系，在紫外光区有明显的特征吸收，因此可采用紫外分光光度法测定本品含量。中国药典2000年版二部收载的顺铂为本品的同类化合物，其含量测定采用炽灼残渣的方法，因此可采用此方法进行本品的含量测定。结果显示：3种方法的测定结果无显著性差异。

考虑到本品为原料药，且高效液相色谱法进行含量测定干扰较小，因此推荐选用高效液相色谱法进行本品的含量测定。

[1]郭德嵩.第三代铂类抗癌药物奥沙利铂的研究进展[J].国外医学:药学分册,1999,26(1):4-5,7．

[2]张文.晚期结直肠癌的化疗进展[J].中国癌症杂志,2004,14(4):380．

[3]Missct JL.Oxaliolatin in practice[J].Br J Cancer,1998,77(Suppl4):S4-S7．

[4]任鹏，孙坚彤，沈云玉,等.反相高效液相色谱法测定奥沙利铂的含量[J].抗感染药学,2005,2(1):24-26.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社,2005:附录 XI,XA1．

[6]田琳.HPLC法测定注射用奥沙利铂主药含量[J].中外医疗,2009,28(14):14.

Determination of Oxaliplatin by three methods

FEI Ruijuan1,CHEN Xiangfeng2,REN Feng2
(1.Jiangsu employee arcadia resorts of electricity power,Jiangsu Province,Wuxi214164,China;2.Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co.,Ltd,Jiangsu Province,Nanjing 211112,China)

Objective:To develop a method for determining the content of oxaliplatin.Methods:RP-HPLC,UV and residue on ignition method were used to determine oxaliplaitin,respectively,and the results were compared with each other..ResultsAll the three mothods were feasible for determining oxaliplatin.Conclusion:RP-HPLC method is simple and more accurate.

Oxaliplatin；HPLC；Content

R943

B

1674-4721（2010）12（a）-057-02

2010-10-29）