MVD=cL/λ公式在细菌内毒素检查中的应用

吴桂英 黄振华

MVD=cL/λ公式在细菌内毒素检查中的应用

吴桂英 黄振华

通过MVD=cL/λ公式的灵活应用，可做到鲎试剂品种之间的相互替代，扩大每一种鲎试剂的使用范围，避免鲎试剂的过期浪费，是一种全新的细菌内毒素检查工作思路。不管遇到何种检品，都能方便、快捷的完成检品任务。

细菌内毒素鲎试剂MVD=cL/λ最大有效稀释倍数

自从20世纪60年代发现鲎血总凝集机制以后，很快引起了世界各国药学界的重视，并在很多实验室展开了广泛的研究，我国的研究起步虽然较晚，但细菌内毒素检查法作为更简便有效的热原检查法仍被《中国药典》95版收载应用。在随后的2000版、2005版、2010版药典中所占热原检查的比重越来越大，在今后有望代替80%以上的家兔试验。因此细菌内毒素检查法在全国药检机构中已成为重要的检验项目之一。

1 我国目前的现状

为了适应日益扩大的细菌内毒素检查工作，我国日前已有八家公司生产供应鲎试剂，而且各公司生产的鲎试剂品种规格越来越全，在市面上一般均能购买所需的各种鲎试剂，开展细菌内毒素试验很方便。因此，一般基层的药检所大都将鲎试剂品种预备得很全，以满足检验工作的需要。有时，如果遇到缺失的品种，检品就会被搁置，影响检验工作的正常运行。

2 检验中存在的问题

由于生产鲎试剂的厂家较多，生产工艺存在差异，其内在成分也不相同，因此，各厂家生产和鲎试剂的效期都很短，一般只有两年，特别是在基层偏远的药检所，做不到现购使用，如果扣除购置运输的时间，实际上药检所只有一年半左右的使用期限。鲎试剂购置太多太全，由于抽查检验的药品种类的不确定性，有很多鲎试剂还没排上用场就已过期了，以此造成很大的经济浪费是普遍存在的问题。

3 MVD=cL/λ公式的应用

在各版药典中均介绍了MVD=cL/λ公式及其说明，供检验者参考使用。笔者从2000年片版药典开始对公式MVD=cL/λ进行了灵活的应用，并对使用的鲎试剂品种也作了调整，尽量扩大每一种鲎试剂的使用范围。具体的做法是:购置几种常见，有代表性的鲎试剂，如0.5Eu/ml、0.2Eu/ml、0.01Eu/ml来应用绝大多数药品的检验工作，收到了良好的效果。基本上做到了不浪费，或者说过期的鲎试剂很少，一年中只有1～2盒左右，圆满解决了上述过期浪费的问题。

4 MVD=cL/λ的具体应用实例

4.1 实例1 如果检验的药品是注射液，如维生素C注射液，规格为2 ml:0.5 ml。药典规定每1 ml中含内毒素量应＜2.5Eu。本文用0.5Eu/ml的鲎试剂作为测定试剂，检验操作如下:首先依据 MVD=cL/λ进行计算，c=1，L=2.5Eu，λ=0.5Eu代入公式，1×2.5/0.5=5倍。将维生素C注射液用鲎试剂溶解水稀释5倍后可改用0.5Eu/ml的鲎试剂做试验，结果和2.5 Eu/ml的鲎试剂相同。同理0.5 Eu/ml的鲎试剂还可代替 0.75 Eu/ml、1.0 Eu/ml、1.25 Eu/ml、1.5 Eu/ml、2.0 Eu/ml规格的鲎试剂进行细菌内毒素测定。反过来说，一个内毒素量限值为2.5 Eu的药品，可以用2.0 Eu/ml、1.5 Eu/ml、1.0 Eu/ml、0.5 Eu/ml、0.2 Eu/ml规格中的任何一种鲎试剂代替。只是用到哪一种就将哪一种鲎试剂灵敏度示值代入公式计算，求出稀释倍数即可。其他品种以此类推。就可做到用几种鲎试剂来开展细菌内毒素检验工作了。

4.2 实例2 如果注射液是粉针剂，利用MVD=cL/λ也可象实例1一样进行计算。如注射用头孢拉定，药典规定每mg头孢拉定中含内毒素量应＜0.2Eu，本文以0.1 Eu/ml作为测定试剂，操作如下:首先计算:c=1，L=0.2 Eu代入公式，1×0.2/0.1=2倍。即把头孢拉定由粉末状稀释到1 mg/ml浓度后再稀释2倍，达到0.5 mg/ml即可。如果改用的不是 0.1 Eu/ml而是 0.05 Eu/ml，计算为了 c=1，L=0.2 Eu，=0.05 Eu代入公式:1×0.2/0.05=4倍，将头孢拉定稀释到0.25 mg/mg即可，其他以此类推。

5 讨论

5.1 根据药液越稀释对鲎试剂的干扰反应就越小的原理以及笔者的实践经验，一般用高灵敏度的鲎试剂来代替低灵敏度的鲎试剂是可行的，即以0.5 Eu/ml代替0.75 Eu/ml以上的鲎试剂，对于注射剂来说也只能由高浓度向低浓度稀释。对于注射用粉针剂，药典规定将其稀释度看作1来操作，这样就出现了由低灵敏度代替高灵敏度鲎试剂的问题。笔者以为是否可以以低灵敏度代替高灵敏度鲎试剂，即以0.75 Eu/ml代替0.5 Eu/ml以下的鲎试剂，要做大量的干扰性试验方能确定，因此，本文不作推荐。

5.2 用于稀释药品的注射用水一定要用内毒素限量＜0.03 Eu的注射用水或者用鲎试剂溶解水。

［1］李波，蔡彤，张国来.细菌内毒素检查法的国内外发展概况和存在的问题.中国药学杂志，2002，37(12):954.

［2］谭德讲，任捃，杜颖，等.热原和热原检测方法的研究进展.药物分析杂志，2004，24(6):653.

［3］细菌内毒素检查法//中国药典，2005版，附录85.

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