HPLC法测定胃痛平糖浆中原阿片碱

吴爱军 汝秋明

胃痛平糖浆是以白屈菜为君药的制剂，具有缓解止痛、止咳的疗效;用于慢性胃炎，胃溃疡，十二指肠溃疡，胃肠痉挛引起的疼痛及百日咳，支气管炎等。本实验采用HPLC法对胃痛平糖浆中原阿片碱建立了测定方法，为完善该制剂质量标准提供了依据。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010 hT全自动高效相色谱仪，原阿片碱对照品(由中国药品生物制品检验所提供)批号：110853-200402，规格：20 mg，供含量测定用。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他为分析醇。

2 色谱条件与系统适用性试验

色谱条件：色谱柱为迪马C18(4.6×250 mm，5 μm);流动相：乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)流速：0.8 ml/min;柱温：30℃;检测波长：290 nm。

3 方法与结果

3.1 对照品溶液的制备 取原阿片碱对照品10 mg，精密称定，置100 ml量瓶中，加1%盐酸溶液5 ml使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取适量，加甲醇制成每1 ml含60 μg的溶液，即得。见图1。

图1 对照品色谱图

3.2 供试品溶液的制备 精密量取本品2 ml，加水20 ml，用氨水调至pH 9～10，用乙醚提取4次，30 ml/次，分取乙醚层，用同一份无水硫酸钠脱水，容器、硫酸钠用少量乙醚洗涤，合并乙醚液，挥干，残渣用甲醇溶解并转移置5 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用0.45 μm滤膜滤过，即得见图2。

图2 供试品色谱图

3.3 阴性对照溶液的制备 按处方(不含白屈菜药材)比例及生产工艺配制阴性，并用供试品溶液制备方法处理阴性对照溶液。依上述色谱条件进行测定。结果阴性对照色谱在与原阿片碱峰相应的保留时间处无干扰峰检出，从而证明本方法是合理可行的见图3。

图3 阴性对照色谱图

3.4 测定法 分别精密量取对照品溶液供试品溶液及阴性对照注液各10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，按外标法以峰面积计算，即得。供试品溶液与对照品溶液的保留时间一致。阴性对照无干扰测定。

3.5 标准曲线的制备 精密称取原阿片碱对照品9.66 mg，置100 ml量瓶中，1%盐酸溶液5 ml溶解，用甲醇稀释至刻度，精密量取6 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密量取 2、4、6、8、10、12、14、16、18 μl注入液相色谱仪，以对照品进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=3190+1612986X、r=0.9999，结果原阿片碱进样量在0.1159～1.0433 μg范围内，呈良好的线性关系。

3.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积，平均峰面积为940172，RSD=0.3%。

3.7 稳定性试验 精密吸取取供试品溶液，分别在0、8、16、24、32、40、48、56 h 测定原阿片碱峰面积，平均峰面积为828443，RSD=0.7%。

3.8 重复性试验 取批号20061003供试品6份，分别按供试品溶液制备方法处理并测定，计算得原阿片碱含量(mg/ml)分别为 0.1388、0.1428、0.1418、0.1405、0.1405、0.1406，平均含量0.1408，RSD=1.0%。

3.9 加样回收试验 精密量取已知含量的供试品(批号为20061003，含量为0.1408 mg/ml)1 ml，共6份，分别精密加入原阿片碱对照品溶液(0.0483 mg/ml)3 ml，加水20 ml，按供试品溶液制备方法处理并测定，计算回收率，测得原阿片碱的平均回收率为99.4%，RSD=1.0% 结果见表1。

3.10 样品测定结果 取三批样品按供试品溶液制备方法处理并测定，结果见表2。

表1 回收率试验结果

表2 三批样品中原阿片碱含量测定结果

4 讨论

4.1 测定波长的选择 取原阿片碱对照品的甲醇溶液，经UV-2201紫外-可见分光光度计在200～350 nm范围内扫描，原阿片碱在290 nm和241 nm波长处有最大吸收，考虑290 nm波长处干扰较小，故选择290 nm为本试验的测定波长。

4.2 流动相的选择 参考文献［1］，通过试验选择乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺1 ml，冰乙酸3.5 ml加水至1000 ml)(16：84)为流动相，此流动相的分离效果好，出峰较快，故选择此为流动相。

4.3 提取方法的考察 曾试验加大取样量，溶液乳化非常严重，不易分层;而减少取样量后，再用乙醚提取，溶液不乳化且分层较快，重现性好，故采取此方法。

［1］顾孝红.反相高效液相色谱法测定夏无天中原阿片碱的含量.时珍国医国药，200213(10)：608 ～609.