紫花地丁及其常见混伪品的比较鉴别

张永耀，侯惠婵，杨洁瑜

（广州市药品检验所，广东 广州 510160）

紫花地丁及其常见混伪品的比较鉴别

张永耀*，侯惠婵，杨洁瑜

（广州市药品检验所，广东 广州 510160）

目的：建立鉴别紫花地丁及其混伪品的方法。方法：性状、荧光观察、薄层色谱法、高效液相色谱法鉴别。结果：发现比较明显的鉴别特征。结论：本法简便、专属性较强，可快速鉴定真伪紫花地丁。

紫花地丁；犁头草；长萼堇菜；龙胆地丁；比较鉴别

地丁类药材的植物来源比较复杂，长期以来存在同名异物的现象。目前全国各地使用的“地丁”主要有紫花地丁（堇菜科）、甜地丁（豆科）、苦地丁（罂粟科）、龙胆地丁（龙胆科）、竹叶地丁（远志科）等［1］。

紫花地丁（习称“海地丁”、“辽地丁”）为常用中药材，收载于《中国药典》2010年版，为堇菜科植物紫花地丁（光瓣堇菜）Viola yedoensisMakino的全草，见图1。功能为清热解毒，凉血消肿。用于疔疮肿毒，痈疽发背，丹毒，毒蛇咬伤等。广东常见的伪品为同科植物犁头草（Viola japonicaLangsd.），见图2，长萼堇菜（Viola inconspicuaBl.），见图3；混淆品为龙胆地丁（习称“广地丁”），即龙胆科植物华南龙胆Gentiana loureiriGriseb的全草，见图4。本文采用性状比较、样品溶液的荧光观察、薄层色谱法、高效液相色谱法等鉴别方法，可快速鉴别紫花地丁的真伪。

图1 紫花地丁

图2 犁头草

图3 长萼堇菜

图4 龙胆地丁

1 材料、仪器及试剂

1.1 材料

紫花地丁对照药材（批号121429-200501）、秦皮乙素对照品（批号741-9103）（中国药品生物制品检定所；犁头草，长萼堇菜为自采，各有3批次；龙胆地丁来自澳门市场（澳门卫生局药物事务厅提供），1批次。所有药材均经广州市药品检验所中药室副主任侯惠婵鉴定。

1.2 仪器

岛津LC-10ATVP高校液相色谱仪；色谱柱：Diamonsil C18（200mm×4.6mm，5μm）；薄层用硅胶G（青岛海洋化工厂）；硅胶60预制板（Merck）。

1.3 试剂

所用试剂均为分析纯（液相色谱用的甲醇为色谱纯）。

2 方法和结果

2.1 性状鉴别

紫花地丁与犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等混伪品性状的主要区别见表1。

2.2 荧光观察鉴别

取紫花地丁、犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁粉末各1g，加水10mL，加热至沸，滤过，取滤液，点于滤纸上，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果紫花地丁显亮蓝色的荧光斑点，犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品则不显荧光斑点或显很弱的荧光斑点。见图5。

表1 紫花地丁与犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁的性状比较

图5 紫外光灯（365nm）下下荧光图

2.3 薄层色谱鉴别

取紫花地丁、犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁粉末各1g，分别置带塞锥形瓶中，加甲醇20mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯提取，分取醋酸乙酯提取液，水浴上蒸至约1mL，作为供试品溶液。另取紫花地丁对照药材1g，同法制备对照药材溶液，再取秦皮乙素对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（《中国药典》附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各2μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸－水（10∶6∶3∶1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，结果，紫花地丁供试品色谱中，在与秦皮乙素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色（蓝色）的荧光斑点，用氨水熏后，该荧光斑点加强并显绿蓝色；犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品在与秦皮乙素对照品色谱相应的位置上，不显相同颜色的荧光斑点。见图6～9。

图6 紫外光灯（254nm）下TLC图

图7 日光（氨熏后）下TLC图

图8 紫外光灯（365nm）下TLC图

图9 紫外光灯（365nm）下（氨熏后）TLC图

2.4 高效液相色谱鉴别

取紫花地丁、犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁粉末各0.5g，分别置带塞锥形瓶中，加60%甲醇30mL，超声处理15min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10mL溶解，滤过，滤液用醋酸乙酯提取3次，每次20mL，分取醋酸乙酯提取液，水浴上蒸干，残渣用60%甲醇溶解并定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液。再取秦皮乙素对照品，加60%甲醇制成每1mL含20μg的溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（《中国药典》附录ⅥD）试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.5%磷酸（26∶74）为流动相；检测波长为345nm。分别吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱。结果，紫花地丁供试品色谱中，呈现与秦皮乙素对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰；犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品在与秦皮乙素对照品色谱峰相同保留时间的位置上，略显小峰。见图10～14。

图10 秦皮乙素HPLC图

图11 紫花地丁HPLC图

图12 犁头草HPLC图

图13 长萼堇菜HPLC图

图14 龙胆地丁HPLC图

3 讨论

3.1 性状鉴别

紫花地丁与同属的伪品犁头草、长萼堇菜等单从性状较难区分，常出现误用情况。

3.2 荧光鉴别

本文用水煮或热水泡样品，取上述水提液点于滤纸上观察荧光，紫花地丁显较强的蓝色荧光；犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品不显或略显荧光。此法快速简便，特别适合基层用药单位验收紫花地丁药材时使用。

3.3 薄层鉴别

紫花地丁含黄酮类、香豆素类等成分［2］。本文采用薄层色谱法、以秦皮乙素为对照，进行薄层色谱鉴别，曾以《中国药典》2005年版一部“紫花地丁”鉴别项下［3］的展开剂，即甲苯－醋酸乙酯－甲酸（5∶3∶1）上层液，发现该展开剂并不分层，且展开效果不理想，改用本文的展开剂，展开效果较好。氨水熏后，日光下检视，在与秦皮乙素对照品色谱相应的位置上，显一明显的绿黄色斑点；该斑点置紫外光灯（365nm）下检视，荧光加强并显绿蓝色。犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品不显或略显斑点，可资鉴别。

3.4 HPLC鉴别

本文参照《中国药典》2010年版“尿感宁颗粒”中秦皮乙素的含量测定方法［4］试验，得到的HPLC图中，紫花地丁供试品色谱中呈现与秦皮乙素对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰，其含量约为0.03%；犁头草、长萼堇菜、龙胆地丁等紫花地丁的混伪品在与秦皮乙素对照品色谱峰相同保留时间的位置上，略显小峰，其峰面积均少于对照品峰面积的2%，提示HPLC可作为鉴别真伪紫花地丁有效的方法之一，并可测定秦皮乙素的含量。

［1］中国药品生物制品检定所，中国科学院植物研究所.中药鉴别手册（第一册）［M］.北京：科学出版社，1997：196-206.

［2］楼之岑，秦波.常用中药材品种整理和质量研究（第二册）［M］.北京：北京医科大学中国协和医科大学联合出版社，1995：565-669.

［3］国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005：237.

［4］国家药典委员会.中国药典（一部）.北京：中国医药科技出版社，2010：788-789.

Com parison and Identification of Violae Herba and Its Adulterants.

Zhang Yongyao，Hou Huichan，Yang Jieyu
（Guangzhou Municipal Institute For Drug Control，Guangzhou Guangdong510160，China）

Objective：To establish a method to distinguish violae herba and its adulterants.Methods：character identification，fluorescence observation，thin-layer chromatography，and high performance liquid Chromatography identification.ResultsThe obvious identification feature was found.ConclusionThis method is simple and specific，and can quickly identify the authenticity of violae herba.

Violae herba；Viola japonicalangsd.；Viola inconspicuaBl.；Gentiana；Comparison and identification

*张永耀，E-mail：zhangyongyao＠gzfda.gov.cn

2010-05-18）