Maspin在非小细胞肺癌中的表达及与p53的相关性

齐淑轶 邓莅霏 蔡 勇 高 文 付爱荣

Maspin基因是丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)超家族的成员之一，在大多数人类正常组织中呈高水平表达，而在恶性肿瘤进展过程中多表现为表达下调或不表达，提示maspin可以作为肿瘤转移及预后评估的1个重要指标。而p53则是肿瘤发生过程中重要的监控基因，通过各种调控因子及信号传导通路发挥作用。maspin在肺癌中的表达及意义目前国内尚鲜有文献报道。我们采用免疫组化方法检测99非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)组织中maspin、p53基因的表达情况，并结合各项临床病理资料，探讨分析两者之间的相关性及其临床价值。

1 材料与方法

1.1 研究对象

收集2007年8月～2008年4月间在我院行手术切除的NSCLC标本蜡块99例。所有病例均为初治患者，术前未进行放化疗，临床病理资料完整，由随访组进行病例随访。99例中男性78例，女性21例。年龄39～77岁，中位年龄61岁。肿瘤的TNM分级、临床分期等均根据2002年版UICC标准而定：临床Ⅰ期38例，Ⅱ期37例、Ⅲ期24例。有淋巴结转移57例，无转移42例。病理类型：鳞癌54例，腺癌45例。肿瘤分化程度：高分化6例，中分化57例，低分化36例。

1.2 免疫组化染色

Maspin蛋白检测采用Maxvision 免疫组化法，p53蛋白检测采用S-P法。浓缩型小鼠抗人Maspin单克隆抗体(EWA 24)、鼠抗人p53单克隆抗体及Maxvision试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。方法按试剂盒说明要求进行，石蜡切片用高温高压法修复抗原，染色过程中均用试剂公司提供的阳性切片作阳性对照，用PBS 替代一抗作阴性对照，DAB 显色,苏木精复染。

1.3 结果判定

1.3.1 Maspin 染色结果判定 Maspin蛋白以肿瘤细胞质和(或) 核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数< 25%判为阴性(-)，≥25% 判为阳性(+)。

1.3.2 p53染色结果判定 p53蛋白以细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性细胞，每张切片随机观察5个高倍视野，每个视野计数100个细胞，阳性细胞数< 5%判为阴性(-)，5%～30%判为阳性 (+)，>30% 判为强阳性(++)。

1.4 统计学处理

应用SPSS13.0对数据资料进行处理，计数资料用χ2检验，maspin和p53的相关性分析采用Spearman相关系数，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Maspin、p53蛋白在肺癌中的表达

maspin蛋白在肺癌组织中的阳性表达率仅为57.6%(57/99)，而p53蛋白在肺癌组织中的阳性表达率为63.6%(63/99)。肺癌组织中maspin表达与病理类型及组织学分化程度、淋巴结状态及临床分期有关，p53蛋白的表达则与临床分期、淋巴结状态相关(P<0.05)，见表1。

表1 NSCLC中maspin、p53表达与各临床病理因素的关系(例)

2.2 Maspin 与p53蛋白的相关性

maspin 和p53蛋白表达的相关性分析显示，Spearman 相关系数为-0.180，显示呈负相关性，但无统计学意义(P=0.075)，见表2。

表2 NSCLC中maspin表达与p53表达的相关性(例)

3 讨论

Maspin(mammary serine protease inhibitor)基因是Zou等[1]于1994年利用消减杂交法对正常乳腺组织和乳腺癌组织进行比较时发现的1种肿瘤抑制基因，其基因编码产物属丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)超家族，可通过多种途径发挥抑制肿瘤的作用。其主要作用机制包括诱导细胞凋亡、降低肿瘤细胞运动、侵袭能力、增加细胞间黏附性以及抑制新生血管的形成等[2～4]。

多数研究表明，maspin在口腔癌[5]、前列腺癌[6]、乳腺癌[7]等多种恶性肿瘤中表达降低或不表达，并提示预后不良。但亦有学者报道胰腺癌组织中maspin高表达而正常胰腺组织则低表达[8]。而Sood等[9]也发现maspin在卵巢恶性肿瘤中呈过度表达，在正常组织中则表达微弱，且maspin的过度表达与肿瘤晚分期、低分级，腹水出现及生存时间缩短相关。提示maspin在不同肿瘤中的表达情况可能存在差异。

Takanami 等[10]用免疫组化法检测了181例NSCLC中maspin的表达，发现maspin在鳞癌中的阳性表达率显著高于腺癌，而与肿瘤大小、淋巴结状态等临床病理参数无关。Maspin与肺癌的关系，国内仅孙萍等[11]报道，maspin蛋白表达与NSCLC临床分期、淋巴结转移呈负相关，与病理类型、组织分化程度无关。而本研究中，我们则观察到淋巴结阳性者、肿瘤分化差者及临床分期晚者，其maspin表达阳性率均显著降低，而且我们也同样发现maspin在鳞癌中的阳性率显著高于腺癌。表明肺癌的侵袭、转移潜能与maspin的低表达有着密切的关系。

p53基因则是肿瘤中最常见的突变基因之一，约50%的肿瘤存在p53基因的突变，野生型p53基因可抑制肿瘤发生，而突变的p53基因则成为原癌基因。在肺癌中，突变型p53的阳性表达率为46%～68%[12]，多认为与淋巴结转移、肿瘤分化、肿瘤大小及预后等临床病理因素有关[13]。本研究中，突变型p53蛋白的阳性率为63.6%，且与临床分期、淋巴结转移相关，与文献报道基本一致。

至于p53与maspin的相关性，目前认为，maspin是野生型p53作用的1个靶点，maspin基因启动子区域有p53结合位点，其表达受p53的调控[14]。胃癌、甲状腺癌、乳腺癌、前列腺癌等的研究均提示maspin与p53的表达呈负相关。我们的研究显示，maspin蛋白的表达与突变型p53的表达有呈负相关的趋势(γ=-0.180)，但尚未达具有统计学意义的水平(P=0.075)，可能是由于样本量过小的缘故。

综上，我们认为maspin在非小细胞肺癌中的表达显著下调，与肿瘤的侵袭、转移密切相关，且可能与突变型p53的表达呈负相关。

[1]Zou Z,Anisowicz A，Hendrix MJ,et al .Maspin,a serpin with tumor-suppressing activity in human mammary epithelial cells〔J〕 .Science,1994,263(5146):526.

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[4]Li Z,Shi H Y，Zhang M.Targeted expression of maspin in tumor vasculatures induces endothelial cell apoposis〔J〕.Oncogene,2005,24(12):2008.

[5]Yoshizawa K，Nozaki S，Okamune A,et al.Loss of maspinis a negative prognostic factor for invasion and metastasis in oral squamous cell carcinoma〔J〕.Acta Otolaryngol，2009，129(5):476.

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[9]Sood A K，Fletcher M S，Gruman L M，et al.The Paradoxical expression of Maspin in ovarian carcinoma〔J〕.Clin Caner Res，2002,8(9):2924.

[10]Takanami I，Abiko T，Koizumi S.Expression of maspin in non-small-cell lung cancer: correlation with clinical features〔J〕.Clin Lung Cancer，2008，9(6):361.

[11]孙 萍，张良明，潘祥林，等.Maspin CD44V6在非小细胞肺癌中的表达及意义〔J〕.中国肿瘤临床,2006,33(12):712.

[12]Dworakowska D，Gózdz S，Jassem E，et al.Prognostic relevance of proliferating cell nuclear antigen and p53 expression in non-small cell lung cancer〔J〕.Lung Cancer，2002,35(1):35.

[13]Tammemagi MC，McLaughlin JR，Mullen JB，et al.A stud-y of smoking，p53 tumor suppressor gene alterations and non-small cell lung cancer〔J〕.Ann Epidemiol，2000，10(3):176.

[14]Zou Z，Gao C，Nagaich AK,et al.p53 regulates the expression of the tumor suppressor gene maspin〔J〕.J Biol Chem，2000，275(9):6051.