毛细管气相色谱法测定保健食品、中药材中的五氯硝基苯残留

(山东省疾病控制中心，济南 250014)

五氯硝基苯(PCNB，Quintozene)是一种专用于种子、土壤消毒的有机氯杀菌剂,其化学性质稳定,高残留性和脂溶性严重污染环境并危害人类的健康。美国和日本对该农药在食品中残留均规定了限量标准。欧盟规定中药材中的最大残留限量为0.6 mg/kg,中国为0.1 mg/kg。我国现行检测标准GB/T 16341-1996[1]和GB/T 5009.136-2003[2]使用填充柱色谱分离五氯硝基苯，受六六六等组分干扰严重，现行检测标准GB/T 5009.19-2008[3]使用凝胶柱层析法净化样液有操作繁琐、成本高等问题。笔者参照文献[4-6]及利用现成的有机氯农药残留量的检测方法建立了保健食品、中药材中的五氯硝基苯残留分析的毛细管气相色谱测定方法，并用此方法对2009年6月至2010年7月间部分保健食品及中药材进行了五氯硝基苯残留分析。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

气相色谱仪：CP3800型，包括63Ni电子捕获检测器，STAR V6.2色谱工作站，美国Varian公司；

超声波清洗仪：AS3120A型，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；

旋转蒸发仪：SENCO-R型，上海申生科技有限公司；

高速均质器：IKA-T18 BS型,德国IKA公司；

离心机：80-2型,上海医疗器械手术离心机厂；

正己烷：经气相色谱确认符合农药残留检测的要求；

丙酮、异辛烷、无水硫酸钠、氯化钠：分析纯；

浓硫酸：优级纯；

五氯硝基苯标准品：含量大于99%，美国Accustandard公司；

五氯硝基苯标准溶液:准确称取五氯硝基苯0.010 0 g，用异辛烷溶解，转入100 mL容量瓶中并用异辛烷定容，得到浓度为100 μg/mL的标准储备液，将储备液稀释100倍，配成浓度为1 μg/mL的标准溶液；

1.2 实验样品

样品为2009、2010年本实验室日常检测的部分保健食品及中药材，其中保健食品36份、中药材20份。

1.3 样品处理和样液净化

试样处理:取试样置于组织捣碎机杯中粉碎过380 μm(40目)筛，精密称取 5 g，加入正己烷30 mL，放置30 min后超声提取10 min，过滤，滤液移入250 mL分液漏斗中，残渣用正己烷提取2次，每次15 mL，合并有机相液，加入20 g/L硫酸钠水溶液50 mL，充分振摇，静止分层，弃下层液水相。上层溶液通过无水硫酸钠，滤于梨形瓶中，于旋转蒸发仪上浓缩后定容至5.0 mL。

样液净化:准确吸取样品提取液5.0 mL，加入1.0 mL浓硫酸，振摇1 min，以2 500 r/min离心15 min，取上清液，供气相色谱分析用。

1.4 色谱条件与色谱图

色谱柱:HP-5型毛细柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm，美国安捷伦公司)；柱温程序：初温90℃保持2 min，以40℃/min升温至170℃，保持1 min，以5℃/min升温至230℃保持9 min；进样口温度：260℃，检测器温度：300℃；载气：高纯氮，流量2.0 mL/min，尾吹28 mL/min；进样量为1.0 μL，分流不分流进样，分流比1∶100；保留时间定性，外标法定量；组分峰保留时间9.36 min。五氯硝基苯标准品色谱图、检出五氯硝基苯残留样品色谱图分别见图1、图2。

图1 五氯硝基苯标准品色谱图

图2 检出五氯硝基苯残留样品色谱图

2 结果与讨论

2.1 色谱柱的选择

本研究综合了文献[1-3，7]的技术特点，参照文献[4-6],利用山东省疾病控制中心实验室现行的六六六和DDT农药残留分析条件及弱极性毛细管柱HP-5与文献[1，2]国家标准使用的填充柱相比分离效率、排除杂质干扰能力明显提高,可解决五氯硝基苯与γ-666用填充柱难以分离的问题。五氯硝基苯、六六六、滴滴涕农药混合标准样色谱图见图3。由图3可知，HP-5毛细管柱能满足同时检测保健食品、中药材中五氯硝基苯、六六六、DDT残留的分析要求。

图3 五氯硝基苯、六六六、滴滴涕农药混合标准样品色谱图

2.2 样品处理、净化方法选择

基于五氯硝基苯不溶于水,溶于有机溶剂,化学性质稳定,不易挥发、氧化和分解,也不易受阳光和酸碱影响的特点,采用具有强氧化性的浓硫酸进行净化,以排除大量杂质对检测的影响，解决了文献[3]使用的凝胶柱层析法净化样液操作繁琐的问题,同时节省了成本。用硫酸净化在离心管中进行，样品损失少，净化简便、高效。当样液成分复杂、颜色较深、色素和杂质不易去除时可重复磺化一次。样液曾尝试用过Florisil硅藻土小柱净化，回收率为89%～96.7%与硫酸处理相近，但因小柱成本较高、来源困难而弃用。

2.3 标准曲线与检出限

精密称取一定量的五氯硝基苯标准品，用异辛烷溶解并逐步稀释成0.005、0.010、0.020、0.050、0.100 μg/mL的标准品溶液，按1.4色谱条件分析，测定峰面积Y，对峰面积和五氯硝基苯浓度X进行线性回归，得线性方程为Y=2 081.1X-1.58，r=0.999 6，线性范围为0.005～0.10 μg/mL。以阴性样品北沙参中添加五氯硝基苯0.005、0.002、0.001、0.000 6 mg/kg,按1.3方法提取、净化，按1.4色谱条件进样分析。以取5 g样品定容5 mL计，五氯硝基苯的检出限为0.000 6 mg/kg(S/N=3)。

2.4 回收试验

采用标准添加法分别进行回收试验。取适量阴性北沙参样品加标0.02 mg/kg和0.05 mg/kg两个水平，混匀后称取5 g左右，按1.3提取、净化,在1.4色谱条件下进样分析,计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

0.05 mg/kg和0.02 mg/kg两水平回收率范围分别为93.0%和94.5%。

2.5 精密度试验

取阴性样品捣碎加标配成浓度为0.020、0.10 mg/kg的样品，混匀后取5 g左右，按1.3处理、净化，按1.4条件测定，结果见表2。

表2 精密度试验结果

2.6 方法应用

用本方法分别对2009年、2010年山东省内日常检测的部分保健食品及中药材进行五氯硝基苯残留分析，56份样品有10份检出，五氯硝基苯残留最高的一份样品为人参海狗丸(0.066 mg/kg)，检测结果见表3。

表3 部分保健食品及中药材五氯硝基苯检测结果

3 结语

毛细管气相色谱法可对保健食品、中药材中五氯硝基苯残留进行检测,其分析的科学性和可操作性均优于国内外现行标准方法,体现了简便，高效，灵敏度高，准确度、重现性好等特点，方法具有较高的实用价值。

[1] GB/T 16341-1996 食品中五氯硝基苯残留量的测定[S].

[2] GB/T 5009.136-2003 植物性食品中五氯硝基苯残留量的测定[S].

[3] GB/T 5009.19-2008 食品中有机氯农药多组分残留量的测定[S].

[4] 李晶，李晶，董丰收，等.基质固相分散萃取-气相色谱法同时检测人参中五氯硝基苯及其代谢物残留[J].农业环境科学学报，2009,28(1):216-220.

[5] 宋家玉，李泽国，王大卫，等.毛细管气相色谱法测定食品、中药中的有机氯农药[J].化学分析计量，2006,15(6):8-10.

[6] 黄卫平,唐红芳，阮征.GC法检测浙八味药材中有机氯农药的残留[J].华西药学杂志，2008,23(5)：590-591.

[7] GB/T 5009.146-2003 植物性食品中有机氯和拟除虫菊酯类农药多种残留的测定[S].