HPLC法测定丹红注射液中丹酚酸B的含量

潘 磊，韩永鹏(北京中西医结合医院，北京 100039)

丹红注射液为中药丹参、红花按科学配方提取的复方制剂，能够明显缓解心绞痛症状，改善心肌缺血。丹酚酸B作为公认的对心脑血管疾病有较好治疗作用的有效成分，在丹红注射液质量标准中并未涉及。本文采用高效液相色谱法测定丹红注射液中丹酚酸B的含量，供作参考。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪(美国 Agilent科技公司)、丹酚酸 B对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111562-200706)、丹红注射液(菏泽步长制药有限公司，批号:091203)、乙腈(色谱纯)、甲酸(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37);检测波长:286 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱温:35℃ ;进样量:10 μL;理论塔板数按丹酚酸B峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品和供试品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取丹酚酸 B对照品12.50 mg，置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。再精密量取对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.1 mg·mL-1的对照品溶液，0.45 μm 滤膜过滤，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备:精密量取丹红注射液 5 mL，置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，0.45 μm滤膜过滤，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系:分别精密吸取对照品储备液 0.5、1、2、4、8 mL，分别置于10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，按“2.1项”下色谱条件进样测定，以峰面积(A)为纵坐标，丹酚酸B含量(C)为横坐标进行线性回归，得回归方程:A=110 901.106 C+17.220(r=0.999 9)。表明丹酚酸B含量在0.025～0.400 mg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系，见图1(A)。

2.3.2 仪器精密度试验:取供试品溶液，按以上色谱条件，复进样6次，记录峰面积，测得丹酚酸 B峰面积的 RSD为1.51%，见图1(B)。

2.3.3 样品溶液稳定性试验:取供试品溶液，按以上色谱条件每隔1 h进样1针，共进6针，记录峰面积，结果在6 h内供试品溶液峰面积的RSD为1.95%，表明供试品溶液在6 h内基本无变化，稳定性较好。

2.3.4 专属性试验:按处方组成，取红花药材按制备工艺要求，制成不含丹参药材的阴性对照样品，按“2.2.2项”下要求制备供试品溶液，进样，测定。结果阴性对照溶液在与丹酚酸B相同位置处无色谱峰，表明阴性对照无干扰，见图1(C)。

2.3.5 重复性试验:取同一批号样品6份，按“2.2.2项”下方法制备供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算丹酚酸B含量(mg·mL-1)，结果样品中丹酚酸 B平均含量为0.391 mg·mL-1，RSD 为 1.85%(n=6)。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram

2.3.6 加样回收率试验:精密吸取已知含量样品6份，每份1 mL，精密加入丹酚酸B对照品溶液适量，置10 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，制备供试品溶液，记录峰面积并计算含量，平均回收率为97.43%，RSD为0.56%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test

2.4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1项”下色谱条件测定3批样品含量，结果见表2。

3 讨论

经不同品牌的C18色谱柱对多批样品进行反复试验，证明本法的重现性好，可用于丹红注射液中丹酚酸B的含量测定。曾采用乙酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)、甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)、乙酸-水-乙腈(1∶50∶49)为流动相，结果甲酸-水-甲醇-乙腈(1∶50∶12∶37)的分离效果最佳，保留时间适中，故选用为流动相。现行的丹红注射液质量标准中没有丹酚酸B的定量方法，本实验选择公认的有效成分丹酚酸B作为指标成分，初步建立了HPLC法测定其含量，为该药质量控制提供参考。

表2 丹红注射液中丹酚酸B含量测定结果(mg·mL－1)Tab 2 Determination results of content of salvianolic acid B in Danhong injection(mg·mL －1)

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