王小莺,李麟,韩晓萍,胡路峰,陈勤云
(江西农业大学动物科技学院,江西 南昌 330045)
1.1 供试药品
复方苦参注射液,主要成分为苦参、博落回、槟榔等五种中药提取物,由课题组研制,规格:25mg/5ml,灭菌保存备用。
1.2 试验菌株
大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌均由江西农业大学动物科技学院预防兽医教研室保存。
1.3 试验动物
昆明系小白鼠,50只,雌雄各半,体重20~30g,购自南昌大学实验动物中心。
1.4最低抑菌浓度测定方法
将保存菌种于普通琼脂平板,至37℃恒温箱培养18h,次日挑选单个菌落1~2个接种于2ml肉汤培养基中培养。采用活菌计数法测得细菌的生长浓度,上述菌液临用前用营养肉汤稀释至含菌量约为104~105个/ml的菌液。采用戴自英的试管二倍稀释法分别测定最小抑菌浓度(MIC)。
1.5 急性毒性试验测定方法
取健康小鼠50只,随机分为5组,预试测得复方苦参注射液肌肉注射LD100为37.5mg/kg,LD0为25mg/kg,按改良寇氏法[1]计算每个组的剂量。各组按剂量肌肉注射后立即观察中毒症状,记录中毒事件、死亡情况。
2.1 最低抑菌浓度测定结果
复方苦参注射液对猪大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌的最低抑菌浓度分别为78μg/ml、0.4μg/ml、1250μg/ml.
2.2 急性毒性试验测定结果
中毒症状:大剂量组小鼠肌肉注射约1分钟后动物表现呼吸加快,痉挛,严重的呈划水样运动。约2分钟后,出现步态不稳,后肢无力,四肢痉挛似青蛙跳。中间各剂量症状稍轻,开始呼吸急促,随后精神沉郁,闭眼,不动,死前均出现痉挛。低剂量组无明显中毒症状,全部存活。
采用改良寇氏法计算LD50,小鼠肌肉注射复方苦参注射液测定半数致死量为34.67mg/kg,95%置信区间为26.27mg/kg到38.87mg/kg。
复方苦参注射液,主要成分为苦参、博落回、槟榔等五种中药提取物。苦参具有抗菌、消炎、解热作用。研究表明,抗菌活性成分为苦参碱,1%的苦参碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌及金黄色葡萄球菌均有明显抑制作用。博落回为罂粟科博落回属植物,其性寒,味辛、苦、涩、有杀虫、消肿止痛作用,有一定的毒性。
本实验结果表明,复方苦参注射液对葡萄球菌浓度远远强于大肠杆菌,与万学攀[2]、崔一喆[3]报道的博落回、苦参对葡萄球菌的抑菌作用均强于大肠杆菌一致。但本实验结果测得的复方苦参注射液对葡萄球菌MIC0.4μg/ml远远低于报道的苦参单方和博落回单方对葡萄球菌MIC,可能是复方制剂中各成分产生了协同作用。
小鼠肌肉注射复方苦参注射液表现的急性中毒症状与博落回生物碱的中毒症状一致。研究表明,苦参及槟榔的毒性都比较小,而博落回所含生物碱具有一定的毒性作用。而不同的给药途及不同剂型对博落回毒性有一定的影响。经口给药的毒性较小,粉剂毒性小;注射剂毒性较大。小白鼠灌胃博落回粉混悬液的急性实验结果显示,博落回所含生物碱中提取的乙氧基血根碱与乙氧基白屈菜红碱的盐酸水溶液腹腔注射小白鼠半数致死量为18mg/kg[5];博落回总碱经口的LD50为1657mg/kg[5]。由于博落回成分较为复杂,且有一定的毒性,使博落回的应用受到一定限制,含博落回生物碱的注射液在临床使用时应严格掌握剂量,不可随意加大剂量避免中毒。
[1] 沈建忠.动物毒理学[M]北京:中国农业出版社,2002∶92~94
[2] 崔一喆,王玉梅,王新.苦参与甲氧芐啶联用的抗菌增效作用研究.黑龙江畜牧兽医[J]2009(12):13
[3] 王学攀,赵宝玉,赵延涛,等.博落回生物碱成分初步分析及其抑菌活性部位筛选[J].黑龙江畜牧兽医,2007(2):89~90
[4] 王景,杨军,李晓山.博落回粉的急性和长期毒性试验[J].安徽医学,1998,19(13)∶76
[5] 刘靖,张石蕊,袁忠宇.博落回生物碱的研究进展[J].广东饲料,2009,18(4)∶28~330