结核性脑膜炎脑脊液γ－干扰素检测的临床价值

赵日光 姜 彬

(天津市宝坻区人民医院 天津 宝坻 301800;①首都医科大学附属北京友谊医院)

结核病是全球严重的公共卫生问题之一，也是世界上结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上[1]。结核病的临床表现多样，可以累积全身各个系统。肺外结核病变往往十分隐匿，给临床诊断带来极大的困难，近几年来其在我国发病率呈上升趋势，结核性脑膜炎尤其多见，但目前临床缺乏特异敏感的诊断方法，误诊率较高。γ－干扰素(INF－γ)对结核的活动性感染及潜伏感染均有很好的诊断价值[2，3]，Pal等对13项研究进行Meta分析，这些研究共纳入726例受试者，绝大多数是结核培养阳性、HIV阴性的成年人，分析表明INF－γ对结核病诊断的综合敏感性为90%，在免疫力低下的人群中，依然能够维持较高的敏感性[4]。INF－γ在非结核性感染的胸腔积液中并不升高，然而在结核性胸膜炎时，其胸腔积液中IFN－γ活性显著增高[5，6]，由此推测检测INF－γ可能有助于结核性脑膜炎的诊断。本研究中对结核性脑膜炎和病毒性脑膜炎患者的血清和脑脊液的INF－γ水平进行检测，探讨其临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 结核性脑膜炎组:26例，男12例，女14例;年龄16～62岁;均为诊断明确的住院患者。诊断标准为有结核病史或接触史，头痛，发热，脑膜刺激征阳性，脑脊液淋巴细胞增多，糖及氯化物含量减低，抗酸染色或结核分枝杆菌培养阳性。病毒性脑膜炎组:32例，男18例，女14例;年龄15～58岁;均急性起病，有病毒感染的全身中毒症状，如发热、肌痛、食欲减退、腹泻或乏力等，脑膜刺激征阳性，脑脊液细胞数正常或淋巴细胞中度增多，糖含量正常，抗酸染色、革兰氏染色及墨汁染色阴性，结核分枝杆菌培养和细菌培养阴性。上述检测对象均采集空腹静脉血及脑脊液，离心后取上清液分装，置－20℃保存备用。

1.2 检测方法 人γ－干扰素(IFN－γ)定量检测试剂盒(ELISA)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法，严格按试剂盒的说明书进行操作，具体步骤:①设标准曲线的INF－γ标准品浓度(1000，500，250，125，62.5，31.25，15.6，0ng/L);②加入已按要求倍数稀释INF－γ标准液和待测标本100μL至相应孔内，用封板胶纸封住反应孔，37℃温育90分钟，洗板;③除空白孔外，每孔加按说明要求稀释的生物素标记的抗体100μL，封住板孔，37℃温育90分钟，洗板;④除空白孔外，每孔加按说明要求稀释的酶联物100μL，37℃温育30 分钟，洗板;⑤每孔加底物 A、B 各 50μL，避光静置10分钟;⑥每孔加终止液50μL，即刻在450nm酶标仪测定标本的吸光度，做出标准曲线，由标准曲线算出标本的INF－γ浓度。

1.3 数据处理 采用SPSS 11.5统计学软件进行数据统计，计量资料以(均数±标准差)表示，两组数据之间的比较应用t检验，敏感性、特异性应用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)判定，确定诊断临界值，计算敏感性及特异性，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

结核性脑膜炎组和病毒性脑膜炎组血清和脑脊液INF－γ水平:结核性脑膜炎组脑脊液 INF－γ为(564.8±89.5)ng/L，明显高于病毒性脑膜炎组[(98.5 ±24.3)ng/L，P ＜0.01]。结核性脑膜炎、病毒性脑膜炎两组血清INF－γ含量分别为(105.9±54.6)ng/L、(87.3 ±35.8)ng/L，两组比较无显著差异(P ＞0.05)。结核性脑膜炎组脑脊液INF－γ水平明显高于血清含量(P ＜0.01)，且两者之间无相关性(r=0.0196，P ＞0.05)。脑脊液IFN－γ ROC曲线下面积为0.91，该试验最佳临界值为120ng/L，敏感性为 86.5%，特异性为 94.2%。

3 讨论

结核性脑膜炎的早期诊断、早期治疗直接关系到患者的预后，是降低死亡率和并发症的关键。结核性脑膜炎脑脊液早期诊断指标中，脑脊液常规、生化检查具有重要的诊断价值，但患者多数在附近卫生所已使用抗菌、抗结核药物治疗，使脑脊液呈不典型改变，临床常易误诊为病毒性脑炎、化脓性脑膜炎、血管神经性头痛、上呼吸道感染等。国内外文献报道，检测胸腔积液中INF－γ水平有助结核性胸积液的诊断[6～8]，由此推测检测脑脊液中INF－γ可能有助于结核性脑膜炎的诊断。INF－γ为主要由T淋巴细胞和大颗粒淋巴细胞在一定的刺激原作用下产生的一种细胞因子，为多功能调节蛋白。INF－γ是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子。动物实验研究表明，小鼠感染结核分支杆菌后产生有效的抗菌免疫需要一系列T淋巴细胞和巨噬细胞的共同作用，同时细胞因子尤其是INF－γ、肿瘤坏死因子a和白细胞介素4及活化单核巨嗜细胞内产生的活性氮中介物等是抗菌免疫的关键。结核分枝杆菌感染的结果主要产生细胞免疫而不是体液免疫，INF－γ由Th1细胞分泌，主要介导细胞免疫应答[9]。因此，INF－γ的水平可反映机体受结核菌感染后的免疫应答状况，对结核菌的感染有临床诊断价值。

结核性脑膜炎脑脊液以淋巴细胞为主，且依赖T细胞发挥细胞免疫作用。本研究结果表明，结核性脑膜炎组脑脊液中INF－γ水平明显高于病毒性脑膜炎组，具有显著性差异(P＜0.01)，且脑脊液与血清INF－γ水平无相关性，可能说明结核性脑膜炎的局部细胞免疫功能增强，在结核分枝杆菌抗原的刺激下，脑脊液中产生高浓度的INF－γ，而外周血含量很低。ROC曲线的优势在于能够综合判断临床试验参数的敏感性和特异性，从而代表诊断试验的诊断价值。ROC曲线下面积越大，其诊断试验的准确性越高。以脑脊液INF－γ含量＞120ng/L为临界值，ROC曲线下面积达0.91，其敏感性、特异性分别达86.5%、94.2%，脑脊液INF－γ测定是结核性脑膜炎诊断准确性较高的辅助诊断指标之一。

长期以来结核性脑膜炎的诊断临床上采用多项指标联合检测，如脑脊液常规细胞数、单核细胞与淋巴细胞比例、糖、蛋白、氯化物、涂片找抗酸杆菌等，但由于患者常常经过一定时期的抗生素治疗无效，才到神经内科就诊，因此脑脊液检查往往不典型，临床容易误诊，故脑脊液中INF－γ检测对结核性脑膜炎的诊断又提供了重要辅助手段，具有较高的临床意义。

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[6]李 菁，王 超，王玉梅.联合检测腺苷脱氨酶、干扰素－γ、可溶性白细胞介素－2受体对结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断的价值[J].中国医师进修杂志，2010，33(10):15

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