加味阳和汤对心肌损伤大鼠血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素F1a的影响

姜丽红，温 琦，张 伟

(1.长春中医药大学，吉林 长春 130117;2.城固县医院，陕西 城固 723200)

心肌缺血时，血小板活化开始，血小板聚集和释放反应增强，血小板活化能够造成动脉粥样硬化和血栓形成，这些现象类似中医“瘀血”的病理改变[1]。因此，本实验建立在急性心肌损伤大鼠模型的基础上,采用放射免疫法检测模型大鼠血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a与“瘀血”相关的指标,观察加味阳和汤对心肌损伤模型大鼠血浆“瘀血”相关指标的影响，现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠40只，体质量(258±32)g，吉林大学动物实验中心提供。加味阳和汤(熟地黄20 g，鹿角胶10 g,麻黄10 g，肉桂10 g，炮姜10 g，白芥子10 g,丹参15 g，地龙10 g，生甘草10 g等9味药)浓缩汤剂由长春中医药大学附属医院制剂室提供；硫氮卓酮片(HB)，30 mg/片，上海延安制药厂产品；异丙肾上腺素粉剂和二磷酸腺苷(ADP)为Sigma公司产品，用缓冲液配成终浓度为3 μmol/L的溶液，现配现用;枸橼酸钠，500 g/瓶，用双蒸水配成3.8%的溶液;消炎痛-EDTA·Na2液、6-酮-前列腺素F1a放免试剂盒及血栓素B2放免试剂盒由南京建成生物研究所提供(批号20100416)；乙醚，500 mL/瓶,日产BH-2型Olympus显微镜;PABER-1型血小板聚集、血凝测试仪,TLL-C型台式冷冻离心机。

1.2 方法 将动物随机分为4组，每组8只。生理盐水组；心肌损伤模型组；加味阳和汤组；硫氮卓酮组。以上各组分别用10 mL/kg生理盐水或相应等体积的药物悬液连续灌胃14 d，每日2次,自第12天上午灌胃后1 h，按文献[2]复制心肌损伤性大鼠，心肌损伤模型组、加味阳和汤组、硫氮卓酮组皮下注射异丙肾上腺素48 μmol/(kg·d)，生理盐水组皮下注射等量生理盐水，连续3 d,全部动物于末次注射异丙肾上腺素24 h后乙醚麻醉动物,剖腹并分离腹主动脉，采血5 mL，其中2 mL放入含38 g/L枸橼酸钠(按血液与抗凝剂9∶1比例配备)的血小板最大聚集率(MPAR)离心管，以200 r/min离心8 min,分离上层富血小板血浆(PRP)，余血再以2 200 r/min离心10 min，分离上层贫血小板血浆(PPP)，用PPP调整PRP,使其血小板数量为4×105/mm-3，在血小板聚集仪上测定；3 mL放入含消炎痛-EDTA·Na2的“血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素F1a”(按血液与抗凝剂50∶1比例配备)离心管中，4 ℃离心，3 000 r/min，离心15 min，分离血浆，-20 ℃保存，按操作说明测定各指标。

1.3 统计学处理 实验数据用SPSS 10.0软件进行非参数kruskal-wallis检验及mann-whitney检验，采用Ridit分析法统计。

2 结果

实验结果显示，心肌损伤模型组大鼠血浆血栓素B2含量明显高于生理盐水组、6-酮-前列腺素F1a含量显著低于生理盐水组，TXB2/6-keto-PGF1a比值明显高于生理盐水组(P<0.01)；与心肌损伤模型组比较，加味阳和汤组大鼠血浆血栓素B2含量显著降低、6-酮-前列腺素F1a含量显著升高,TXB2/6-keto-PGF1a比值明显降低(P<0.01)。加味阳和汤可以改善心肌损伤大鼠的血小板集聚状态，减轻缺血时对大鼠心肌的损伤，见表1。

表1 对心肌损伤大鼠血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a含量的影响

3 讨论

异丙肾上腺素造成大鼠急性心肌损伤病理变化，相当于中医血瘀证的病理表现。研究资料[3]表明，血小板前列腺素(PG)代谢亢进与血瘀证密切相关。血栓素B2、6-酮-前列腺素F1a为血栓素A2和前列腺素(PGI2)的稳定代谢产物，构成了PGI2-TXA2平衡调节系统,在调节血小板功能，维持血管壁完好和张力方面具有举足轻重的作用。TXB2升高、6-keto-PGF1a下降则心肌缺血加重,其两者比值也随之下降,说明冠脉痉挛引起的心肌缺血时，血小板功能会随之发生改变。因此测定其代谢产物，观察血小板活化聚集情况对心肌损伤的监测是非常有意义的。

本实验研究结果表明，心肌损伤模型组大鼠血浆血栓素B2含量明显高于生理盐水组、6-酮-前列腺素F1a含量显著低于生理盐水组,TXB2/6-keto-PGF1a比值明显高于生理盐水组(P<0.01)，说明模型大鼠存在血瘀状态；加味阳和汤组大鼠血浆血栓素B2显著低于心肌损伤模型组、6-酮-前列腺素F1a显著高于心肌损伤模型组，两者比值明显低于心肌损伤模型组。结果表明，加味阳和汤可以显著改善心肌损伤模型大鼠的血瘀状态。

[1]周安方,刘建荣,张茂林,等.泻肝补肾汤对前列腺炎性大鼠血浆血栓素B2和6-酮-前列腺素F1a的影响[J].中华中医药学刊,2007,25(8):1551-1552.

[2]Gao F,Chen J,Lopez BL,ChristopherTA,Gu JLysko P,Ruffolo RRJr,Ohlstein EH,Ma XL,Yue TL.Comparison of bisoprolol andcarvedilol cardioprotection in a rabbit ischemia and reperfusion model[J].EurJPharmacol,2000,406(1):109-116.

[3]李泓.血浆TXA2、PGI2水平与血瘀证及活血化瘀研究[J].中国中西医结合杂志,1995,15(11):701.