高效液相法测定琦红丸中酸式及内酯洛伐他汀含量

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(1.吉林省生物研究所，吉林 长春 130012；2.长春金赛药业股份有限公司，吉林 长春 130012)

琦红丸是吉林省生物研究所开发的由功能性红曲、荷叶、黑木耳等制成的具有降血脂作用的保健食品，功能性红曲所含有的洛伐他汀是体内胆固醇合成酶Hmg-COA还原酶的专一性抑制剂，能够有效减少或阻断内源性胆固醇的合成，达到降血脂作用。其存在形式分酸式和内酯2种,酸式结构的洛伐他汀空间结构与体内Hmg-COA更为接近，无需水解，其活性较内酯式高约一倍。而内酯结构的洛伐他汀本身无生物活性，但在人体内可以被水解成酸式结构而具有活性。有关文献[1-3]对洛伐他汀含量测定报道只测定内酯洛伐他汀，鉴于洛伐他汀在功能性红曲米中的存在特点,本文采用酸式和内酯2种形式的洛伐他汀含量之和作为制定琦红丸中洛伐他汀含量测定标准的依据，更为合理、科学，能够较好地控制产品的质量。

1 仪器与试剂

安捷伦1100高效液相色谱仪，安捷伦自动进样器，低速离心机，超声波清洗器；甲醇为色谱纯，无水乙醇、磷酸、氢氧化钠等试剂均为分析纯；洛伐他汀(内酯)标准品(批号：100600-200502,供含量测定用)购自中国药品生物制品鉴定所，规格:100 mg；琦红丸样品由吉林省生物研究所提供。

2 适应性试验

色谱柱：XDB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇∶0.12%磷酸溶液(V/V)=77∶23；柱温：24 ℃；流速：1 mL/min；检测波长238 nm；进样量：20 μL。规定其理论塔板数按洛伐他汀(内酯)峰面积计算，应不低于2 000。

3 洛伐他汀标准品溶液制备

精密称取洛伐他汀(内酯)标准品40.0 mg，以75%乙醇定容100 mL。此溶液浓度为400 μg/mL。

4 操作方法

4.1 洛伐他汀(内酯)标准工作液制备 准确量取洛伐他汀标准品溶液1 mL，以75%乙醇定容至10 mL。此溶液浓度为40 μg/mL。

4.2 供试品溶液制备 取20袋琦红丸，粉成细粉，混匀，取粉末约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入30 mL 75%乙醇(体积分数)，室温下超声50 min，加75%乙醇至接近刻度,再超声10 min，之后冷却至室温，用75%乙醇定容至50 mL，混匀。以3 500 r/min的转速离心10 min，取上清液，0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液待用。

4.3 定性用酸式洛伐他汀的制备 称取洛伐他汀(内酯)标准品4 mg，以0.2 mol/L氢氧化钠溶液定容至100 mL，在50 ℃条件下超声转化1 h，放置到室温后再放置1 h。

4.4 供试品中洛伐他汀含量测定 取洛伐他汀内酯标准工作液、洛伐他汀酸式对照品溶液、供试品溶液各20 μL分别注入高效液相色谱仪，以供试品中洛伐他汀酸式峰面积与内酯峰面积之和与洛伐他汀内酯标准品峰面积之比计算琦红丸中洛伐他汀的含量。洛伐他汀(内酯)色谱图见图1；洛伐他汀(酸式)色谱图见图2；供试品色谱图见图3。

图1 洛伐他汀(内酯)标准品色谱图

图2 洛伐他汀(酸式)标准品色谱图

图3 琦红丸供试品色谱图

5 方法学考察

5.1 标准曲线的制备 分别精密吸取洛伐他汀标准品溶液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL置10 mL容量瓶中，加75%乙醇定容至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，分别注入液相色谱仪。测定峰面积，以峰面积为纵坐标，以洛伐他汀(内酯)含量为横坐标，绘制标准曲线。测得回归方程为Y=67.471 14X-8.914 04(r=0.999 9)。结果表明洛伐他汀(内酯)在8.44～253.2 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

5.2 空白试验 取不含功能性红曲的阴性对照样品，按上述方法检测，结果阴性对照色谱中，在洛伐他汀酸式与内酯的保留时间处，无干扰峰出现。

5.3 稳定性试验 取同一供试品溶液20 μL，分别在0、2、4、6、8、10 h照上述方法测定，以洛伐他汀酸式与内酯峰面积之和计，结果表明供试品在10 h内，未发生明显变化。峰面积的RSD值为0.23%。

5.4 精密度试验 取同一标准品溶液20 μL，连续进样6次，测定峰面积值，结果，RSD=0.11%。

5.5 重复性试验 取同一批号供试品(批号：20100801)6分，按4.2项下方法制备供试品溶液，分别按上述方法测定含量，结果RSD=0.47%。

5.6 回收率试验 精密称取已知含量的样品(批号：20100801)6分，分别加入等量的内酯洛伐他汀标准品。按照上述方法进行测定，计算出回收率，测定结果平均回收率=99.25%，RSD=1.42%。

5.7 3批样品的含量测定 批号20100801、20100802、20100803的含量(mg/100 g)分别为350、349、352。

6 结论

通过比较红曲原料、按配方比例混合的样品及生产的3批样品含量测定结果发现，生产过程酸式洛伐他汀部分脱水转成内酯结构，而且洛伐他汀含量有少量下降现象，可能是生产过程中受热所造成的，但不影响产品质量及功效。总之，本方法操作简便，结果准确，重现性好，用于琦红丸中洛伐他汀的含量测定，能够很好的控制该产品的质量。

[1]廖一民,向世学.高效液相同时测定保健食品中两种结果形式洛伐他汀的含量[J].中国卫生检验杂志,2006,16(3):286-287.

[2]宋洪涛.HPLC法对不同来源红曲中洛伐他汀的定量分析[J].中草药,1999,30(2):49.

[3]文镜,常平.红曲中内酯型Lovastatin的HPLC测定方法研究[J].食品科学,2000(12):56.