高效液相色谱法测定黄藤素注射液中葡萄糖含量

张慧 孟宪生 罗国安

(1.辽宁中医药大学药学院 大连 116600;2.清华大学分析中心 北京 100084)

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100 series高效液相色谱仪(包括低压二元梯度泵,Alltech ELSD 2000 检测器,Agilent柱温箱,浙大N2000化学工作站),鼓风干燥机(天津市泰斯特仪器有限公司101-1 AB型),Milli-Q Synthesis超纯水纯化系统(美国Millipore公司),天平(德国赛多利斯BT125D,十万分之一)。

色谱柱:COMOSIL Packed column sugar-D(4.6mm×250mm)。

1.2 试剂

乙腈(J.T.Baker,色谱纯),乙酸铵(北京第二化工厂,分析纯),水为MilliQ-超纯水。

样品:黄藤素注射液(昆明兴中制药厂)。

批号:100305、100313、100312。

对照品:D-(+)-葡萄糖标准品(J＆K CHEMICAL 批号234317)。

2 方法与结果

2.1 黄藤素注射液中葡萄糖含量测定

2.1.1 色谱条件 色谱柱:COMOSIL Packed column sugar-D(4.6mm×250mm)。流动相:A相为10M冰醋酸-水溶液-乙腈(25∶75),流速1.0mL/min。柱温为30℃,ELSD检测器N2流速为2.1mL/min,温度为85℃,在上述色谱条件下,葡萄糖与其他干扰成分能得到很好的分离,理论塔板数按葡萄糖计算,不低于1500,分离度均＞1.5。

2.1.2 供试品溶液 取注射液稀释1mL,置50mL容量瓶中,定容到刻度。取适量过0.45μm滤膜,备用。

2.1.3 对照品溶液 称取葡萄糖标准品25.00mg置100mL容量瓶中,定容至刻度。备用。

2.1.4 阴性对照溶液 取3次过滤水过0.45μm微孔滤膜作为阴性对照溶液。

2.1.5 线性关系考察 称取葡萄糖标准品25.00mg水定容到100mL,分别稀释到原来的1、2、4、8、10、20、40倍进HPLC。得线性回归方程,y=8.64×10-8-0.0061,r=0.9999,结果表明,在2.50～0.0625mg/mL范围内对照品D-(+)-葡萄糖进样量与峰面积值呈良好的线性关系。

2.1.6 精密度实验 分别精密吸取浓度为3.20mg/mL葡萄糖对照品溶液20μL,进样,重复6次,峰面积的RSD为2.65%,表明仪器精密度良好。

2.1.7 重复性实验 取批号为100305样品按“2.1.2”方法配成6份供试品溶液,分别进样20μL,得峰面积的RSD为3.75%。

2.1.8 稳定性试验 取批号为100304的按“2.1.2”方法配成供试品溶液,分别在放置0、2、4、6、8、12h后,进样做色谱分析,进样量为20μL,结果葡萄糖的RSD为3.85%。说明供试品溶液在12h内稳定。

2.1.9 加样回收率实验 取100305批注射液按“2.1.2”供试品方法处理,精密吸取1mL加浓度为0.10mg/mL标准品溶液1mL,连续进6针HPLC测定含量。

2.2 样品中葡萄糖含量测定(表1)

表1 葡萄糖的样品含量

3 讨论

目前,测定葡萄糖的方法多为HPLC法、苯酚-硫酸法[1]、蒽酮-硫酸法和3,5-二硝基水杨酸(简称DNS)法等,且HPLC法方法准确、易操作,所以本实验采用了HPLC法测定黄藤素注射液中葡萄糖含量。本实验试用了不同水相添加剂,发现酸对葡萄糖出峰时间和峰面积影响较大,所以选择了有缓冲作用的醋酸铵作为水相的添加剂,使HPLC法测定葡萄糖稳定。

[1]王瑞明,李先荣.黄芪地上部分(茎、叶)多糖含量测定[J].中成药,1999,21(5):254～255.