朱砂与石膏体外抑菌作用研究

徐 韬 徐先祥 林小凤 吴雅清 许瑞安

福建省泉州市华侨大学分子药物学研究所＆分子药物教育部工程研究中心，福建 泉州 362021

随着抗生素在临床的广泛使用，耐药问题也日益突出，寻找新的抗菌药物或逆转细菌耐药已成为国际上研究的热点。不少研究显示中药具有抗菌活性或逆转细菌耐药的作用，不少中药具有抗菌活性，而且具有副作用小、很少发生耐药现象等优点［1］。赛霉安散由石膏、朱砂等药组成，具有清热止血、收敛祛湿、化腐生肌功效，临床对于感染具有抗菌的效果［2］。本文从朱砂及石膏单味中药入手，研究赛霉安的抑菌性能，为今后赛霉安的二次开发提供实验依据。

1 实验材料

1.1 标准菌株

革兰氏阳性菌:金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach)，非耐药表皮葡萄球菌 (Methicillin sensitive Staphylococcus aureus)CMCC26069，枯草芽孢杆菌 (B acillus subtilis)。革兰氏阴性菌:大肠埃希氏菌 (Escherichia coli)CMCC44825，铜绿假单孢杆菌 (Pseudomonas aeruginosa)CICC 10204，肺炎克雷伯氏菌 (Klebsiella pneumoniae)CICC 10033，普通变形杆菌 (Proteus vulgaris)AS 1．1527，菌株购自广东省微生物种质资源库。

1.2 药品

朱砂、石膏，由泉州亚泰制药有限公司提供。左氧氟沙星，南阳普康集团衡淯制药有限责任公司提供。

1.3 实验仪器

TS 100倒置显微镜，Nikon公司。DHG－9076干燥箱，上海圣欣科学仪器公司。DHP－9052恒温培养箱，上海圣欣科学仪器公司。恒温震荡培养箱，Thermo公司。

2 方法

2.1 菌液制备

取各菌种的冻存菌种活化，接种到含10 ml LB液体培养基的试管中，37℃震荡培养过夜，取100μl菌液接种到20μl LB固体培养基的平皿，培养过夜，挑取单菌落，10 ml LB液体培养基，37℃振荡培养过夜;取以上活化后菌液1ml作为菌悬液母液。

菌悬液a:吸取菌悬液母液50μl于950μl生理盐水中混匀，计数后调节菌浓为106CFU/ml，用于抑菌圈测定。

菌悬液b:吸取菌悬液母液500μl，加入到10ml LB液体培养基中，计数后调节菌浓为106CFU/ml，用于最小抑菌浓度 (MIC)的测定。

2.2 抑菌圈测定

用无菌移液器吸取菌悬液a 100μl滴加于LB琼脂培养基表面，用涂布棒涂布均匀，静置5min后，每板放置经高压灭菌的牛津杯4个，放置5min，待菌液浸入且牛津杯吸附牢固后，每杯加100μl的各制备药液，阴性对照杯为PH值调为7的模拟人工肠液，阳性对照为左氧氟沙星。置37℃培养箱培养24 h，测定抑菌圈直径。

2.3 最小抑菌浓度 (MIC)的测定［4］

96孔细胞培养板中每孔加100 μl菌悬液b，用PH值调为7的模拟人工肠液分别稀释各药品原制备液，采用二倍稀释法分别稀释至8个浓度梯度，分别加入到96孔板中，每孔100μl，置37℃培养箱培养24 h，测定最小抑菌浓度 (MIC)。加样时，每列为一个药浓度，第一列设为LB液体培养基空白对照，第二列为左氧氟沙星阳性对照，第三列为未加药的空白菌对照。每行为同一菌种，自上而下依次为铜绿假单孢杆菌 (绿脓杆菌)、肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、非耐药表皮葡萄球菌、普通变形杆菌。

表1 测MIC试验中药品稀释终浓度 (mg/ml)

2.4 统计学处理

3 结果

3.1 抑菌圈测定结果

朱砂可显著抑制铜绿假单孢杆菌、肺炎克雷伯氏菌，抑菌圈直径可达35mm以上;对于枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、非耐药表皮葡萄球菌、普通变形杆菌具有较好的抑制效果，抑菌圈直径范围在12－20mm之间;对于大肠埃希氏菌，未检测到抑制效果。且对于铜绿假单孢杆菌、枯草芽孢杆菌、非耐药表皮葡萄球菌的抑制效果要好于阳性对照。

石膏制备液对金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌有抑制效果，但均不显著，见表2。表中数据为受试菌抑菌圈的直径(±s)mm。

表2 朱砂、石膏制备液抑菌效果

3.2 最小抑菌浓度 (MIC)的测定结果

微量倍比稀释法测定朱砂与石膏制备液对各菌株的最小抑菌浓度 (MIC)，与抑菌圈的实验结果相比，朱砂与石膏制备液对各菌株的最小抑菌浓度具有与之类似的结果，朱砂制备液对于肺炎克雷伯氏菌以及铜绿假单孢杆菌有较好的抑制效果，MIC较其他菌种要低;石膏的制备液对于普通变形杆菌以及金葡菌有较弱的抑制效果，对于其他菌种基本无效。具体结果见表3。

表3 朱砂、石膏最小抑菌浓度 (MIC)测定结果

4 讨论

朱砂与石膏均为重要的传统矿物中药，两种也是中药复方赛霉安中主要药物。朱砂外用具有清热解毒功效，在胃肠道中可以溶出汞的各种含硫配合物［4］;石膏“生用不但能治病，且善于治疮，且善于解毒”［5］。从本文实验结果可以看出:朱砂体外对于伤口感染常见的菌种均有较好的抑制效果，以对肺炎克雷伯氏菌以及铜绿假单孢杆菌的抑制效果最为显著，符合朱砂清热解毒的功效特点。但石膏体外对于多数的受试菌株均无抑制效果，只对于普通变形杆菌以及金葡菌有较弱的抑制效果，其具体原因有待进一步研究。由本文结果提示，可以考虑在控制朱砂用量以及其毒性的前提下，运用君臣佐使的指导原则，适当提高朱砂在重新组方的成药中的比例，从而增强赛霉安的抑菌效果。

［1］蔡燕，邢艳，谢文光．中药抗菌作用研究进展［J］．中国医药导报，2011;8(6):9－10．

［2］江絮萍．赛霉安散局部治疗在剖宫产术后切口感染28例效果观察［J］．山东医药，2011;51(2):17．

［3］Soultos N，Tzikas Z，Christaki E，et al．The effect of dietary oregano essential oil on microbial growth of rabbit carcasses during refrigerated storage［J］．Meat Science，2009，81:474 －478．

［4］曾克武，王旗，杨晓达，等．朱砂溶出的体外研究［J］．中国中药杂志，2007;32(3):231．

［5］王世民．石膏的外用方法［J］．山西中医学院学报，2008;9:426－27．