Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在子宫内膜样腺癌中的表达及其临床意义

朱 丹 潘 颖 柴新燕 李妞妞 王铁延 (吉林大学中日联谊医院妇产科，吉林 长春 30033)

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其发病率现逐年升高，已占女性生殖系统恶性肿瘤的第2位;而子宫内膜癌的病因目前尚不十分清楚。研究表明，Maspin(mammary serine protease inhibitor)是一种新的候选肿瘤抑制基因，属于丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpin)超家族。C-erbB-2则被认为是一种原癌基因，又称neu基因或HER2，有表皮生长因子受体的活性与功能〔1〕。近年来，已经发现这两种基因及其表达的蛋白产物maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在许多肿瘤的发生、发展中起重要作用，且与宫颈癌、卵巢癌、乳腺癌等肿瘤的发生关系密切〔2〕，但其与子宫内膜癌的关系鲜见文献报道。我们对此进行了研究，旨在通过检测maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在不同的组织分级和临床分期子宫内膜样腺癌组织中的表达，探讨其在肿瘤转移中的意义，为进一步研究利用基因调整的方法抑制子宫内膜样腺癌的转移奠定基础。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取本院妇科2009年7月至2010年7月住院患者手术切除的子宫标本50例。年龄46～72(平均62.2)岁。子宫内膜样腺癌组织30例，正常子宫内膜组织20例。根据FIGO手术-病理分期:Ⅰ期17例，Ⅱ期8例，Ⅲ期5例。组织学分级:1级9例，2级15例，3级6例。肌层浸润深度≤1/2者22例，肌层浸润深度＞1/2者8例。无淋巴转移23例，有淋巴转移7例。术前均未行放疗、化疗及各种激素治疗。

1.2 试剂及实验 鼠抗人Maspin单克隆抗体(工作效价1:50)，由福建迈新生物技术有限公司提供;鼠抗人C-erbB-2单克隆抗体及免疫组化(Immuno-Bridge+)超敏PV-90000检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司;DBA酶底物显色试剂盒(DBA-0031)用已知Maspin、C-erbB-2蛋白阳性染色的乳腺癌石蜡切片为阳性对照。采用免疫组织化学S-P方法(链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶法)检测Maspin、C-erbB-2蛋白在正常子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中的表达情况。所有标本均经10%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，连续切片4张，厚4 μm，1张行HE染色;1张用PBS液代替一抗作为阴性对照。2张分别作Maspin及C-erbB-2免疫组织化学染色。

1.3 结果判断标准 采用SP免疫组织化学法，均设阴性及阳性对照，采用双盲法观察结果。Maspin蛋白阳性表达是细胞核、细胞质出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。C-erbB2蛋白阳性表达是细胞膜或细胞质内出现黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。蛋白表达结果采用半定量积分法判定，每张切片均为高倍镜下(400×)随机观察10个视野，计数100个细胞，计算其平均阳性百分率。以阳性细胞百分率和染色强度为判定标准。按染色强度评分:无色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分;按平均阳性细胞百分率评分:0分为阳性细胞≤25%，1分为阳性细胞26% ～50%，2分为阳性细胞51% ～75%，3分为阳性细胞＞75%。综合评分为将染色强度和平均阳性细胞百分率两者积分的乘积结果评分:0分为阴性(－)，1和2分为弱阳性(+)，3和4分为中度阳性()，6和9分为强阳性()。

1.4 统计学分析 应用SAS9.1.3统计软件进行χ2检验和非参数Spearman等级相关分析。

2 结果

2.1 Maspin蛋白在不同子宫内膜组织中表达 Maspin蛋白在正常子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中阳性表达率分别为85%、43.33%，呈下降趋势，两组间差异显著(P＜0.05)。

2.2 C-erbB-2蛋白在不同子宫内膜组织中表达 C-erbB-2蛋白在正常子宫内膜及子宫内膜样腺癌组织中阳性表达率分别为10%、56.67%，呈升高趋势，两组间差异显著(P＜0.05)。

2.3 Maspin蛋白、C-erbB-2蛋白表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系 Maspin蛋白与子宫内膜样腺癌的手术-病理分期、组织学分级及淋巴结转移有关(P＜0.05);C-erbB-2蛋白与子宫内膜样腺癌的手术-病理分期、组织学分级及肌层浸润深度有关(P＜0.05)，见图1及表1。

图1 免疫组织化学染色阳性结果(SP，×200)

表1 Maspin与C-erbB-2蛋白阳性表达与子宫内膜样腺癌临床病理特征的关系〔n(%)〕

2.4 Maspin和C-erbB-2蛋白在子宫内膜样腺癌组织中表达的相关性 在30例子宫内膜样腺癌组织中Maspin蛋白阳性表达而C-erbB-2阴性表达者占11例，Maspin蛋白阴性表达而C-erbB-2阳性表达者占15例，二者同为阳性表达者占2例，二者同为阴性表达者占2例。经非参数Spearman等级相关分析表明，二者呈负相关(r= －0.728 5，P＜0.01)。

3 讨论

Maspin蛋白在正常子宫内膜细胞中高表达，而癌细胞中不表达或仅少量表达〔3〕。本研究结果同样证实Maspin蛋白在正常子宫内膜组织中的阳性表达率高于子宫内膜样腺癌组织，提示Maspin蛋白可能发挥肿瘤抑制的作用。Secord等〔4〕通过对晚期上皮性卵巢癌中Maspin蛋白的研究，认为肿瘤的Maspin蛋白表达缺失是进展和死亡风险增加的一项独立预后指标。提示Maspin蛋白的表达缺失可能在子宫内膜癌变中起作用，其可能作为子宫内膜癌早期诊断有价值的分子生物学指标。

有学者研究表明Maspin蛋白与子宫内膜样腺癌的临床分期及淋巴结转移有关〔5〕。本研究证实Maspin蛋白与子宫内膜样腺癌的手术-病理分期、组织学分级及淋巴结转移有关(P＜0.05);提示Maspin蛋白可能与子宫内膜样腺癌的演变有关，并在一定程度上可反映肿瘤的恶性程度。此外，本研究还证实，子宫内膜样腺癌组织中，Maspin蛋白阴性表达或低表达者淋巴结转移倾向较高，肌层侵袭能力较强，由此可以推测Maspin蛋白的低表达可能增加了肿瘤细胞通过基底膜的能力，促进了子宫内膜样腺癌的进展、侵袭和转移，但其与肌层浸润深度无统计学意义(P＞0.05)。支持了maspin蛋白发挥肿瘤抑制作用的论点，并且提示其在肿瘤演变进展中起一定作用。

研究显示正常子宫内膜组织中C-erbB-2蛋白表达率明显低于子宫内膜癌组织〔6〕。本研究结果与上述文献一致。说明C-erbB-2蛋白可能在子宫内膜样腺癌的演变过程中起一定作用。提示maspin蛋白、C-erbB-2蛋白的检测可能作为子宫内膜癌早期诊断有价值的分子生物学指标。

Loffe〔7〕等发现C-erbB-2蛋白阳性表达与子宫内膜癌临床分期、组织学分级有关。本研究证实C-erbB-2蛋白与子宫内膜样腺癌的手术-病理分期、组织学分级及肌层浸润深度有关(P＜0.05)。这与文献报道结论一致。提示其阳性表达与子宫内膜样腺癌的分化程度及恶性程度有关。因此，其可作为预测子宫内膜样腺癌恶性程度的一个指标。

有关Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白在肿瘤组织中表达的相关性已有文献对其进行报道。研究发现乳腺癌细胞中Maspin蛋白表达与C-erbB-2蛋白表达呈负相关〔8〕。孙永杰等〔9〕对乳腺癌相关特异基因的研究显示乳腺组织中CerbB-2蛋白表达与Maspin蛋白表达有显著差异，CerbB-2蛋白阴性组Maspin蛋白表达率高。Maspin蛋白阳性表达与C-erbB-2蛋白阳性表达呈负相关。本研究结果提示两者与子宫内膜样腺癌的发生、发展、侵袭及转移过程有关。其可能机制如下:①肿瘤发展依靠血管内皮生长因子(VEGF)促进肿瘤新生血管生成，C-erbB-2原癌基因的激活能促进肿瘤细胞分泌VEGF〔10〕，Maspin则通过血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞因子(bFGF)抑制肿瘤生成血管。②Maspin蛋白通过其细胞表面作用靶点(uPA/uPAR)表达特性可直接作用于 C-erbB-2蛋白受体，阻断C-erbB-2蛋白的信号转导，减少VEGF释放。③C-erbB-2蛋白扩增和过度表达会导致正常细胞的恶性转化，Maspin蛋白抑制肿瘤细胞侵袭和转移，调节细胞对促凋亡因子的敏感性。因此，联合检测Maspin蛋白和C-erbB-2蛋白可作为预测子宫内膜样腺癌的恶性程度的指标。

1 Zou Z，Anisowicz A，Hendrix MJ，et al.Maspin，a serpin with tumor-suppressing activity in human mammary epithelial cells〔J〕.Science，1994;265(5180):1893-4.

2 Domann FE，Rice JC，Hendrix MJ，et al.Epigenetic silencing of maspin gene expression in human breast cancers〔J〕.Int J Cancer，2000;85(11):805-11.

3 乔玉环，陈志华，郭瑞霞，等.子宫内膜癌中Maspin基因的表达及其与雌激素受体表达的相关性研究〔J〕.现代妇产科进展，2008;17(4):264-8.

4 Secord AA，Lee PS，Darcy KM，et al.Maspin expression in epithelial ovarian cancer and associations with poor prognosis:a Gynecologic Oncology Group study〔J〕.Gynecol Oncol，2006;101:390-7.

5 夏明静，纪新强，孙秋茹，等.子宫内膜样腺癌组织maspin基因表达及其临床意义的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2008;15(18):1393-5.

6 蒋宋薇，徐 红.C-erbB2基因在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义〔J〕.肿瘤学杂志，2009;15(4):335-7.

7 Loffe OB，Papadimitrion JC，Drachenberg CD.Correlation of proliferation induces apoptosis and related oncogene expression(bcl-2 and c-erbB-2)and P53 in proliferative hyperplastic，and malignant endometrium〔J〕.Hum Pathol，1998;29(10):150.

8 刘 巍，张祥宏，张志刚，等.Maspin BCSG1及C-erbB-2表达与乳腺癌预后的关系〔J〕.中国肿瘤临床，2005;32(8):431-4.

9 孙永杰，侯连泽.乳腺癌相关特异基因的研究进展〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2006;13(16):1261-4.

10 Mazumdar A，Adam L，Boyd D，et al.Heregulin regulation of urokinase plasminogen activator and its receptor:human breast epithelial cell invasion〔J〕.Cancer Res，2001;61(1):400-5.