多蜂房蛋白BMI－1在子宫内膜癌中的表达及意义

曹成成，谷丽萍，夏志梅，王俊芳，刘菲菲，刘 影

（吉林大学第二医院 妇产科，吉林 长春130041）

子宫内膜癌（endometrial carcinoma，EC）是一种原发于子宫内膜的上皮性恶性肿瘤，是女性生殖道常见的恶性肿瘤之一。近年来，我国子宫内膜癌发病率呈逐年上升趋势，约占女性生殖系统恶性肿瘤的20%－30%，且趋于年轻化［1］。B细胞特异的莫洛尼白血病毒插入位点1基因（B－cell－specif ic mo loneyleukemia virus insert site 1，BMI－1），是一种核蛋白，属于多梳基基因家族，其在细胞生长、增殖和干细胞自我更新的调节中发挥重要作用，对于造血干细胞自我更新及分化潜能的维持至关重要［2］。已有研究表明，BMI－1在人类的多种肿瘤，如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、鼻咽癌、胃癌、宫颈癌及卵巢癌等中异常表达，并且与肿瘤的转移和扩散相关［3－6］，但目前尚未见到 BMI－1与子宫内膜癌关系的文献报道，因此，本实验采用免疫组化方法研究BMI－1在子宫内膜癌组织中的表达特点，分析其与子宫内膜癌的临床诊断、治疗及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象 选取吉林大学第二医院2010年05月—2011年3月妇科住院患者行子宫切除的正常子宫内膜及宫腔镜检查获得的正常子宫内膜15例（包括增生期8例，分泌期7例）；子宫内膜增生症组20例（包括单纯增生10例，复杂增生5例，非典型性增生5例）；子宫内膜癌42例。所有患者术前均未接受放疗、化疗或任何激素治疗。其中子宫内膜癌患者根据国际妇产科联盟（FIGO 2009）手术－病理分期标准进行分期，Ⅰ期28例，Ⅱ期7例，Ⅲ和Ⅳ期共7例，病理分级：高分化（G1期）17例，中分化（G2期）14例，低分化（G3期）11例，淋巴转移者6例，无淋巴转移者36例。

1.1.2 试剂 兔抗人BMI－1抗体购于北京博奥森生物技术有限公司，SP－9710试剂盒和DAB试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 取得临床标本组织立即泡于10%福尔马林固定液中固定24小时，予以常规石蜡包埋、切片，制成4微米切片；先行HE染色，再切片贴附于涂有多聚赖氨酸的玻片上备用待行下一步的免疫组化染色，RUNX3抗体检测采用免疫组化S－P法（链霉素抗生物素蛋白一过氧化物酶），按试剂盒说明书进行。先对组织切片进行常规脱蜡、水化，然后去离子水孵育10min，PBS洗3次。正常山羊免疫血清封闭，室温孵育15分钟，滴加按1∶100稀释的BMI－1抗体，过夜后用PBS冲洗次。滴加生物素标记的二抗，DAB显色，苏木素复染，盐酸酒精分化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。PBS代替一抗做阴性对照。

1.2.2 结果判定 光学显微镜下观察组织标本的着色程度。BMI－1蛋白阳性表达主要表现为细胞质内呈现棕黄色颗粒，细胞核用苏木精复染为蓝色；偶见细胞核阳性表达，因复染而显蓝黑色；图像分析采用Motic Images Advanced 3.2图像分析软件，测得灰度值越小阳性越强，灰度值越大阳性越弱。

1.3 统计学分析

用SPSS 17.0统计软件对数据进行处理。采用t检验对计量资料进行统计学分析，相关性分析采用Pearson相关检验。以P＜0.05为有显著性统计学意义。

2 结果

BMI－1在子宫内膜癌组中的表达显著高于子宫内膜增生症组及正常子宫内膜组（P＜0.01），在子宫内膜增生症组中的表达也高于正常子宫内膜组（P＜0.05）。子宫内膜癌组中，BMI－1随着手术—病理分期的增加、肌层浸润深度的增加以及出现淋巴结的转移而升高，但比较子宫内膜癌的不同组织学分级、不同病理类型及雌、孕激素受体的表达等方面，结果无统计学意义。（见表1）

3 讨论

子宫内膜癌的发病因素很多，如细胞凋亡的抑制、癌基因与抑癌基因的突变、免疫监视功能降低、雌、孕激素受体表达异常以及P53、VEGF、PDGFD等基因表达异常等，但其具体机制仍不甚清楚。

人类BMI－1基因定位第10号染色体短臂1区3带（10p13），编码含326个氨基酸的蛋白质，分子量为36.9kDa，其NH2末端包含一个保守RF域，中央区域有HTHT构像中心，是诱导端粒酶活性和细胞永生化的决定簇。BMI－1在肿瘤的发生过程中起重要作用，BMI－1调控的下游基因包括INK4a－ARF、端粒酶逆转录酶（hTERT）和Hox基因家族。NK4a－ARF编码两种抑癌基因P16NK4a和P19ARF（在人类为P14ARF），BMI－1高表达时，与c－myc基因共同作用一方面使P16NK4a表达下调，对细胞周期素（cyclinD）抑制作用减弱，使pRb高磷酸化，从而启动DNA复制相关基因的转录，推动细胞周期进入S期，从而促进细胞的生长和增殖；同时另一方面还抑制P19ARF，使后者对mdm2的抑制作用减弱，致其介导的泛素依赖的p53降解增多，阻止细胞周期停滞和细胞凋亡［7］；hTERT高表达可激活端粒酶，使细胞获得无限增殖能力而逃避衰亡，在细胞的恶性转化中起重要作用［8］。自1999年研究者发现BMI－1基因与c－myc基因在小鼠淋巴瘤发生过程中起协同作用，导致淋巴瘤发生；随后，在多种人类癌症如急性白血病、非小细胞性肺癌细胞（NSCLC）、支气管鳞癌、结肠癌、乳腺癌中都检测到BMI－1基因过度表达，新近研究发现在神经细胞瘤、口腔上皮细胞癌、早期肝癌、鼻咽癌、肾脏透明细胞癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌中也能检测到BMI－1基因过度表达［3－6］，提示该基因在肿瘤形成中发挥了重要作用，并可能与肿瘤恶性程度、侵袭及预后有关。

本研究中，BMI－1在不同子宫内膜中表达不同，在正常子宫内膜组织中少量表达，在增生症组子宫内膜中低表达，在子宫内膜癌组织中表达水平明显升高，三者的差别具有显著性，表明BMI－1的表达增加，使正常子宫内膜上皮逐渐向恶性发展，最终发展为子宫内膜癌；同时研究表明，子宫内膜癌组织中，随着浸润深度的增加，BMI－1的表达水平显著升高；淋巴结的转移与临床分期均与子宫内膜癌的诊治和预后有密切关系，临床分期高和／或出现淋巴结转移的患者大多预后不良，在此研究中，子宫内膜癌组织中BMI－1的高表达与临床分期及淋巴结转移呈正相关，提示BMI－1与子宫内膜癌晚期发生浸润及转移有关。但是，BMI－1的表达与子宫内膜癌组织学分级、病理类型及雌、孕激素受体无明显相关。有国外文献报道BMI－1在子宫内膜癌组织中高表达，这与本研究一致［9］，但有最新的研究表明，在mRNA转录水平上BMI－1的低表达与子宫内膜癌的血管侵袭、激素受体缺少有关［10］，这与本研究结果不符，是否与研究方法或样本量有关，尚需进一步证实。

综上可见，BMI－1与子宫内膜癌的发生、发展、浸润、转移密切相关。子宫内膜癌细胞的高表达与肿瘤的进展有关，预示肿瘤具有高度转移潜能，提示BMI－1有望成为子宫内膜癌临床诊断、指导治疗及评估预后的有效生物学指标。但本研究病例数有限，且仅限于免疫组化单方面结果，因此BMI－1能否成为预测子宫内膜癌高度转移的新生物学指标，有待进一步证实。

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