化学发光免疫诊断试剂盒变异控制方法探讨

李 彬 陈 静 赵文威 韩梅玲 刘春莉

（郑州安图绿科生物工程有限公司，河南 郑州 450016）

化学发光免疫分析方法具有选择性好、灵敏度高、分析速度快、设备简单等特点，在临床检验领域得到了广泛应用[1]。其检测结果的批间重现性是临床检测的重要性能指标之一。不同试剂对变异系数的要求不同，通常要求试剂的批间变异系数不超过15%[2]。我公司在工艺研究中，总结出四个生产过程变异控制要点，经过验证，能够将批间变异降低5%以上，效果明显。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

包被板原料，见表1。酶结合物使用蛋白原料，见表2。

表1 包被板使用原料

表2 酶结合物使用蛋白原料

1.2 试剂盒

未进行专项控制前的试剂盒：游离前列腺特异性抗原定量检测试剂盒（化学发光法）。批号：20100920、20100925、20101011、20101018。进行专项要点控制后的试剂盒，见表3。

表3 控制各要点后试剂盒批号

1.3 质控品

BIORAD质控品369#，批号54503。

1.4 试验设备

e-Lisa全自动加样器加样；高灵敏LUMO发光仪检测。

1.5 方法

引起试剂盒批间变异较大的原因是多方面的。包括试剂盒的原材料、生产工艺和生产规模等[3]。验证发现，在生产过程中，不同的包被板原料[4,5]、包被液量、封闭液量、酶结合物使用蛋白原料这四个控制点直接影响化学发光免疫诊断试剂盒的批间变异。我公司选取具有代表性的产品：游离前列腺特异性抗原定量检测试剂盒（化学发光法）进行变异研究。我们在产品中试时，分别改变变异控制要点进行同步验证，寻求最佳的要点控制方案。

1.6 对比评价

每个控制要点进行横向比较，确定每个要点控制方案的有效性。

表4 使用不同包被板原料生产的成品批间变异对比

表5 采用不同包被量生产的成品批间变异对比

表6 采用不同封闭量生产的成品批间变异对比

表7 使用不同酶蛋白原料生产的成品批间变异对比

表8 全面控制各要点前后生产的成品批间变异对比

以未进行专项控制前的产品为对照品。评价全面进行要点控制后的产品的批间变异。

统计学处理 试验均采用复孔双次进行。数据采用SPSS10.0统计软件进行批间变异分析。

2 结 果

包被板原料的对比结果，见表4。包被液量的对比结果，见表5。封闭液量的对比结果，见表6。酶结合物使用蛋白原料的对比结果，见表7。全面控制各要点前后对比测试结果，见表8。

3 讨 论

生产用原料，如包被板原料、酶结合物使用蛋白原料明显影响产品的批间变异。我国的诊断试剂生产用原辅料质量有待进一步提高。诊断试剂的生产企业应该经过验证选择性能较好的原辅料进行生产，这样可以大幅度降低批间变异，为临床提供更为稳定的诊断器械。

生产过程工艺，如包被液量、封闭液量等对变异的影响也很大。随着包被液量增大，变异逐渐变小；随着封闭液量增大，变异逐渐变小。这些生产工艺要点的优化可以明显改善产品变异。

综合控制各要点后，我公司自产的游离前列腺特异性抗原定量检测试剂盒（化学发光法）的批间变异降低了5%以上，这项性能的提升对化学发光免疫诊断试剂盒是非常有意义的。同时，我们将这些控制要点进一步推广到其他二十五项化学发光产品中，效果明显，近两年来，各产品变异情况有了很大的改善。建议各生产厂家都能够从源头入手，综合控制生产全过程，为临床提供更为可靠的诊断试剂[6]。

[1]汪晨,吴洁,宗晨,等.化学发光免疫分析方法与应用进展[J].分析化学,2012,40(1):3-10.

[2]王晓娟,廖雪雁,郭中平.对体外诊断试剂质量标准的几点建议[J].中国生物制品学杂志,2009,22(12):1263-1264.

[3]孙玉芬,秦国天.国产ELISA试剂盒批间变异的分析[J].现代医药卫生,2003,19(7):908-909.

[4]李金明.抗原和抗体的固相化方法研究进展.国外医学临床生物化学与检验学分册,1997,18(5):209-212.

[5]许斌,钱卫平,林必华,等.ELISA二种不同包被方法的原子力显微镜表征及活力比较[J].临床检验杂志,1999,17(2):83-85.

[6]戴捷,苏磊.体外诊断试剂有效管理与质量安全控制的探讨[J].中国医学装备,2011,8(11):80-82.