茅梅提取物对肝损伤保护作用的研究

宋志远,孔 棣，宋书辉，刘 斌

(1.天津中医药大学，天津 300073;2.天津市南开医院，天津 300100)

茅梅rubusparvifolius为蔷薇科悬钩子属植物，落叶小灌木，资源丰富，分布于河北、山西、陕西、四川及华东各省区[1]。茅梅是一种传统民间中药，据医学古籍《本草拾遗》记载，该植物具有“止血活血、散瘀定痛、清热解毒之功效，可内服、外敷”[2]。现代药理学研究[2]表明，茅梅具有止血、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗菌、抗脑缺血等作用。其化学成分包含黄酮苷、糖类、酚类等多种成分。本文主要对茅梅提取物对肝损伤的检测指标及病理学改变的影响进行研究。

1 实验材料

1.1 实验动物 大鼠50只,体质量(200±20) g，北京维通利华试验动物技术有限公司，动物合格证号SCXK(京)2007-0001。

1.2 药物与试剂 茅梅醇提物(用50%乙醇提取配制成1 mL相当于生药1 g)，由天津中医药大学实验室制备；18a-甘草酸二铵(甘利欣)，江苏正大天晴药业股份有限公司，批号20091105；谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰转肽酶(GGT)临床诊断试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所，批号20100122。

1.3 仪器 高速低温离心机；JY92-2D型超声波细胞粉碎机(宁波新芝科器研究所)。

2 实验方法

2.1 方法 取40只大鼠，用40%的CCl4花生油溶液皮下注射，每日1次，给药体积均为10 mL/kg，连续9 d；其后将小鼠随机分为4组:模型组、甘利欣组(5 mL/kg)、茅梅醇提取物高剂量组(5 mL/kg)、茅梅醇提取低剂量组(2.5 mL/kg)，各组分别灌胃给药，每日1次，连续9 d。

2.2 指标检测 末次给药后2 h摘眼球取血，静置，3 000 r/min，离心15 min，取血清，低温保存[3]。用自动生化分析仪测定血清生化指标的活性。采血后处死动物,立即解剖取肝脏进行病理检查。

2.2.1 肝脏指标的变化 检测血清中ALT、AST、ALP、GGT活性并记录数据,检测结果与模型组比较，见表1。

2.2.2 组织学检查 取肝脏组织经石蜡切片、HE染色，进行病理学检查，根据肝脏组织病变形态程度的差异，将其病变分为，-：正常；++：间质水肿，少量炎细胞浸润；+++：间质水肿，大量炎细胞浸润，细胞变性；++++：间质水肿，大量炎细胞浸润，细胞变性，散在细胞坏死[5]，见表2。

3 结果

3.1 对CCl4花生油溶液所致肝损伤模型小鼠肝指标的影响 见表1。

3.2 对40%的CCl4花生油溶液所致肝损伤模型大鼠肝脏组织学的影响 模型对照组肝脏明显增大，与组织黏连较重，部分组织表面可见暗红色或灰白色片状结节，组织切片可见间质水肿，大量炎细胞浸润，细胞变性，散在细胞坏死。茅梅大、小剂量组肝脏体积轻度到中度增大，与周围组织仅有轻度黏连;肝脏较柔软，表面有光泽，但肝脏较正常组织有不同程度的肿胀;肝脏细胞间质充血、水肿、炎细胞浸润及少量细胞变性，但与模型对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)，与甘利欣组比较差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 茅梅醇提取物对CCl4大鼠肝损伤的影响(±s，n=10) U/L

表2 茅梅醇提取物对CC14花生油溶液所致肝损伤模型大鼠肝脏组织学的影响(n=10)

4 讨论

CCl4急性肝损伤模型是一种经典的实验性肝损伤动物模型，此模型能准确反映肝细胞的功能、代谢及形态学变化，一直是筛选具有保肝降酶作用药物的常用模型之一。肝损伤是由多种病因引起并且可以有多种因素参与的复杂过程。CCl4在体内对肝细胞亲和力大，自由基的形成及引发的链式反应是CCl4损伤肝组织的主要机制[5]。一般认为CCl4损伤肝组织机制是CCl4经肝细胞色素P450代谢激活后生成三氯甲基自由基(·CCl)和氯自由基(·Cl)，引起生物膜脂质过氧化，当自由基增加到一定程度时，清除自由基的特异酶类的活性就降低，造成膜结构和功能损伤，蛋白质等物质合成代谢发生障碍，导致胞浆内转氨酶渗入血液,肝细胞脂质过氧化或坏死[6]。这与病毒性肝炎的病理解剖、病理生理诸方面的改变和表现出来的症状及肝功能检测的指标等方面具有相似性[7]。

茅梅前期的实验研究和调查中就已显示其具有较好的抗肝损伤的作用。本实验结果亦显示,1)茅梅提取物能明显降低CCl4所致的肝损伤大鼠肝指数的升高(P<0.05)。因此茅梅具有明显的抗肝损伤的作用，茅梅高剂量组的效果最好，低剂量组次之。2)推测其抗肝损伤的机制可能与茅梅能增强大鼠清除自由基、抑制自由基启动的脂质过氧化反应、肝细胞受到自由基攻击时可因其过度消耗而减少有关[8]。3)D-GalN可引起肝弥漫性坏死[9]，D-GalN是肝细胞的磷酸尿嘧啶核苷的干扰剂，它进入机体后与磷酸尿苷(UDP)结合，形成UDP-D-GalN,消耗体内的UDP，影响细胞器及酶生成物质核酸、糖蛋白、脂糖等的合成，使细胞器受损、膜损害，致肝细胞坏死[10]。试验结果显示，茅梅提取物能减轻D-GalN所致的肝损伤程度，可能是其具有促进体内尿嘧啶核苷酸的合成，拮抗D-GalN干扰的功能，从而起到保护肝脏的作用。

目前，茅梅的抗肝损伤作用尚未深入研究。本实验对其进行的系统研究，将对开发茅梅成为新的抗肝损伤的药物具有极大的参考价值。

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