高效液相色谱法测定复方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定含量

王 璐

(河南省洛阳市食品药品检验所，河南 洛阳 471003)

复方替硝唑氯己定含漱液的处方组成为替硝唑(0.5 g/L)和醋酸氯己定(0.2 g/L)、硼酸、糖精钠等，以水作为溶剂，为抗菌消炎药。醋酸氯己定为阳离子表面活性剂，抗菌谱广，对多数革兰阳性及阴性细菌都有杀灭作用。本试验中建立了高效液相色谱法，测定复方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定含量，现报道如下。

1 仪器与试药

美国Agilent 1260型高效液相色谱仪。醋酸氯己定对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100183－199902);复方替硝唑氯己定含漱液(批号分别为110102，110301，110506，由河南科技大学第一附属医院制剂室提供);甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse XDB－C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:三乙胺缓冲液(0.05 mol/L，用磷酸调 pH 至3.5)－乙腈 － 甲醇(42 ∶13 ∶45);流速:1.0 mL/min;检测波长:259 nm;进样量:10 μL。在此色谱条件下，醋酸氯己定与其对照品峰保留时间一致，无其他干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取醋酸氯己定对照品25.9 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。取对照品贮备液8.0 mL，置100 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。精密量取样品溶液10 mL(约相当于醋酸氯己定2 mg)，置50 mL的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取不含醋酸氯己定的样品溶液，照供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品贮备液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，分别置 25 mL 量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，量取10 μL，在2.1色谱条件下测定，以峰面积 A与质量浓度 C绘制标准曲线，得回归方程 A=29.44 X+4.828，r=0.9999(n=8)。结果表明，醋酸氯己定质量浓度线性范围为10.36 ～ 82.88 μg/mL。

精密度试验:取2.2项下同一对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，重复进样5次。结果平均峰面积为1215，RSD=0.38%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，置无色容量瓶中，在自然光下，分别于 0，2，6，10，12，24 h 时测定，记录主峰面积。结果平均峰面积为1218，RSD=0.55%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验:取同一批样品5份，按2.4项下样品测定方法操作。结果醋酸氯己定平均含量为0.2022 g/L，RSD=0.72%(n=5)，表明分析方法重复性良好。

加样回收试验:精密量取已知含量(醋酸氯己定质量浓度为0.2046 g/L)的样品2.0 mL，分别精密加入对照品贮备液(醋酸氯己定质量浓度为 0.518 g/L)0.6，0.8，1.0 mL，置 25 mL 的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按2.4项下样品测定方法测定。结果见表1。

表1 醋酸氯己定加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

按2.2项下制备对照品溶液和供试品溶液，在2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算其含量。结果批号为110102，110301，110506的样品中醋酸氯己定含量分别为0.2046，0.2022，0.1987 g/L。

3 讨论

取醋酸氯己定对照品(10 μg/L)溶液，在220～360 nm波长内扫描，结果在259 nm波长处有最大吸收峰，且吸收光谱曲线较平滑，参考文献[2]，选择259 nm作为测定波长。

笔者曾选用三乙胺缓冲液(0.05 mol/L用磷酸调pH至2.5)－乙腈－甲醇流动相的比例为(45∶10∶45)，但醋酸氯己定峰拖尾，且pH过低恐对硅胶相连的化学键合相有影响，最终确定流动相三乙胺缓冲液(0.05 mol/L用磷酸调pH至3.5)－乙腈－甲醇比例为(42 ∶13 ∶45)，效果理想。

醋酸氯己定定量分析的研究有容量法[1]、紫外分光光度法[2－3]、高效液相色谱法[4－5]，本样品为复方制剂，由于其他成分的干扰故不能用紫外分光光度法、容量法，而高效液相色谱法具有分离性能好，灵敏度高等特点。因此，用高效液相色谱法测定醋酸氯己定的含量，样品不经过处理直接测定，操作简便，精密度高，可用于复方替硝唑氯己定含漱液中醋酸氯己定的含量测定。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:1131.

[2]费克军，朱晓萍.复方替硝唑含漱液的含量测定[J].中国医院药学杂志，2003，20(10):39.

[3]边 疆，杨立延，陈奕桦.双波长线性回归测定醋酸氯己定和甲硝唑的含量[J].中华预防医学杂志，2000，34(1):75.

[4]田兆红，庞小莲.HPLC法测定醋酸氯己定栓的含量[J].华夏医学，21(2):219.

[5]董 煜，董 莉.HPLC法测定甲硝唑氯己定洗剂和复方氯己定含漱液中甲硝唑和葡萄糖氯己定含量[J].中国药学杂志，2003，38(7):532.