蛇菰水提物对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

周卫华 石慧娟 杨梅松竹 钟 飞 米长忠 (吉首大学医学院，湖南 吉首 416000)

酒精滥用和由此导致的酒精依赖已成为现代社会严重的公共卫生问题〔1〕，蛇菰科为双子叶多年生寄生肉质草本植物，具有补肝益肾，止血生肌，调经活血，清热醒酒之功效〔2〕，广西瑶族和黔南布依族民间有饭酒前服用蛇菰解酒的习俗。蛇菰的解酒毒作用已经得到证实〔3〕，临床试用于肝炎和肝硬化有一定疗效〔4〕。但蛇菰提取物对酒精性肝损伤的保护作用还未见报道，本实验利用大鼠酒精性肝损伤模型，研究蛇菰提取物对酒精诱导的肝损伤模型大鼠的保肝作用及其可能机制，为其开发提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 雄性Wistar大鼠40只，体重200～250 g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。蛇菰:购自吉首市益丰药店，经吉首大学医学院药理学教研室鉴定。无水乙醇(国药集团化学试剂公司);谷丙转氨酶(ALT)试剂盒(20100827);谷草转氨酶(AST)试剂盒(20100828);丙二醛(MDA)试剂盒(批号20110616);超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒(批号20110616);谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒(20110615);BCA蛋白浓度测定试剂盒(20110905)，均购自南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 蛇菰水提物的制备 蛇菰全草50℃过夜干燥，粉碎过60目筛子，量取50 g用蒸馏水500 ml溶解，煎煮1 h，过滤得浓缩液，经旋转蒸发得其浸膏12.76 g，将其配置成50 ml，相当于每毫升含生药1 g，实验时稀释至所需浓度。

1.2.2 实验分组与给药 40只大鼠购回后适应性喂养5 d，将40只大鼠随机分为正常组、模型组、蛇菰水提物低剂量组和高剂量组各10只。造模〔5〕共需10 d，正常组:6.0 ml/kg生理盐水灌胃，1 h后50%葡萄糖14 ml/kg灌胃;模型组:每天定时以6.0 ml/kg生理盐水灌胃，1 h后二锅头14 ml/kg灌胃;蛇菰水提物组:蛇菰水提物低剂量组和高剂量组定时分别给予1.5 g/kg和3 g/kg蛇菰水提物灌胃，1 h后以二锅头14 ml/kg灌胃。

1.2.3 血清ALT和AST的活性测定 第11天，用20%的乌拉坦麻醉大鼠，摘眼球取血，3 500 r/min离心10 min，取上清，按试剂盒说明书，测定血清AST和ALT活性。

1.2.4 肝组织蛋白质、MDA、SOD、GSH-Px含量及活性的测定用20%的乌拉坦麻醉大鼠，解剖取相同部位的肝组织冰浴研磨10 min，然后用玻璃匀浆器研磨10 min，用冷生理盐水配制成10%肝匀浆液，4 000 r/min离心10 min，取上清液，按试剂盒说明书，测定肝组织蛋白质、MDA含量和SOD、GSH-Px活性。

1.2.5 肝组织病理学检查 用20%的乌拉坦麻醉大鼠，解剖取其肝右中叶，10%的甲醛固定24 h，常规脱水透明，石蜡包埋，切片，片厚5 μm，HE染色，光学显微镜观察结果并照相。

2 结果

2.1 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠血清ALT和AST的影响 模型组大鼠血清AST和ALT活性显著高于正常组(P＜0.01)，而蛇菰水提物不同剂量组血清AST和ALT明显低于模型组(P ＜0.01)，见表1。

表1 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠血清ALT和AST的影响(，n=10)

表1 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠血清ALT和AST的影响(，n=10)

与模型组比较:1)P＜0.01

组别 AST(U/L) ALT(IU/L)正常组 65.54±12.041) 58.55±11.751)模型组 164.82±31.09 170.59±30.75蛇菰低剂量组 110.76±15.221) 115.32±16.781)蛇菰高剂量组 90.98±26.781) 85.02±27.581)

2.2 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影响 与正常组相比，模型组的SOD和GSHPx活性显著降低(P＜0.01)，MDA含量显著升高(P＜0.01);蛇菰水提物各剂量组的SOD和GSH-Px活性升高，与模型组差异显著(P＜0.01)，MDA的含量降低与模型组差异显著(P＜0.01)，见表2。

表2 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影响(，n=10)

表2 蛇菰水提物对酒精性肝损伤大鼠肝组织SOD，GSH-Px活性和MDA含量的影响(，n=10)

与模型组比较:1)P＜0.01，2)P＜0.05

组别 SOD(U/mg) SH-Px(U/mg) MDA(nmol/mg)正常组 27.60±4.981) 44.76±7.391) 9.38±1.581)模型组 12.79±1.94 24.56±4.76 19.34±3.26蛇菰低剂量组 17.48±3.781) 32.08±4.952) 15.82±2.432)蛇菰高剂量组 21.38±3.581) 36.12±5.641) 14.83±2.722)

2.3 肝组织的病理学检查 大体解剖肉眼观察可见，正常组大鼠肝脏呈红褐色，质地柔软，富有弹性。酒精性肝损伤组大鼠肝脏体积增大，淤血明显，肝脏表面有少量点状出血。蛇菰水提物组肝脏轻度肿大，比较接近正常组。显微镜观察如图1所示，正常组大鼠肝小叶结构完整，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列，大小均匀，无变性、坏死等病理改变，肝索排列整齐，无炎症细胞浸润;模型组大鼠肝小叶结构被破坏，肝索排列紊乱，肝细胞呈大面积水肿变性，胞浆疏松透亮，部分肝细胞脂肪变，汇管区有炎细胞浸润;蛇菰水提物处理组较模型组肝细胞水肿和脂肪变程度明显减轻，炎细胞浸润程度也有所减轻。

图1 蛇菰水提物酒精性肝损伤大鼠肝组织的影响(HE，×400)

3 讨论

本研究证实大鼠酒精性肝损伤模型是成功的。经蛇菰水体物干预后，大鼠肝组织脂肪变性和炎症浸润明显减轻，大鼠血清ALT、AST活性下降，表明蛇菰对酒精性肝损伤有显著的保护作用。

乙醇经胃肠道吸收，约90%在肝细胞内氧化代谢。乙醇代谢产生大量有害自由基，包括O－2、H2O2、OH－及C2H5O－和C2H5OH－〔6〕;机体抗氧化能力不足以应付自由基的积累，氧化应激便发生在肝脏中，氧化应激在肝功能损害中发挥重要作用〔7〕。由此产生的自由基氧化生物膜脂质，破坏肝细胞膜及线粒体膜的正常结构，最终导致细胞结构和功能的改变〔8〕。MDA是脂质过氧化的产物，可作为反映机体组织或细胞受自由基攻击和损伤的指标;GSH-Px和SOD是体内主要的抗氧化的酶，其活力的高低反映了机体清除自由基和抗氧化能力的高低。本研究中模型组大鼠MDA含量显著升高，而SOD和GSH-Px活性显著降低。而灌胃给予蛇菰可增强肝脏的SOD和GSH-Px活性，并降低其MDA含量，其护肝作用可能是通过增强肝细胞内清除自由基的酶的活性实现的。王慧等〔9，10〕研究表明，蛇菰提取物具有较强的抗氧化活性;而蛇菰中含有三萜类、苯丙素类、甾醇类、鞣质类、黄酮类及其苷类等多种化学成分，其中三萜类、苯丙素类及黄酮类均具有抗氧化活性，但具体是哪一种成分具有保肝作用，需要进一步研究。

1 Moriarty KJ，Platt H，Crompton S，et al.Collaborative care for alcohol-related liver disease〔J〕.Clin Med，2007;7(2):125-8.

2 王 慧，罗 兵，邹 坤.蛇菰的化学成分及药理活性研究进展〔J〕.时珍国医国药，2008;19(4):809-11.

3 张朝卿，戎聚全，沈振华，等.葛根、蛇菰解酒毒的实验研究〔J〕.黔南民族医专学报，2003;16(4):196-8.

4 陈吉炎，李 聪，王雪芹，等.蛇菰属药用植物的种类与研究进展〔J〕. 时珍国医国药，2010;21(8):2032-4.

5 张维丽，潘 玲，胡胜军，等.枳黄方对急性酒精性肝病大鼠TNF-α和内毒素的影响〔J〕.中西医结合肝病杂志，2006;16(2):99-100.

6 Conde de la Rosa L，Moshage H，Nieto N.Hepatocyte oxidant stress andalcoholic liver disease〔J〕.Rev Esp Enferm Dig，2008;100(3):156-63.

7 Niemela O，Parkkila S，Juvonen RO，et al.Cytochromes P450 2A6，2E1，and 3A and production of protein-aldehyde adducts in the liver of patients with alcoholic and non-alcoholic liver diseases〔J〕.J Hepatol，2000;33(6):893-901.

8 Bailey SM，Cunningham CC.Contribution of mitochondria to oxidative stress associated with alcoholic liver disease〔J〕.Free Radic Biol Med，2002;32(1):11-6.

9 王 慧，张红歧，邬昊洋，等.筒鞘蛇菰提取物及松柏苷的抗氧化作用研究〔J〕.三峡大学学报(自然科学版)，2009;31(3):99-101.

10 邓 靖，莫正昌，汲广全，等.蛇菰提取物体外抗氧化活性研究〔J〕.食品科学，2010;31(5):23-5.