3种猪肺炎支原体疫苗对仔猪的免疫试验

王娟萍，姚敬明，吴 忻，刘文俊，孟 帆，樊振华，雷宇平，米瑞娟

（1．山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西 太原030032；2．山西省动物疫病预防控制中心，山西 太原030024）

猪肺炎支原体（Mhp）是引起猪的一种慢性接触性呼吸道病，这种病世界广泛流行，猪群感染率在30%～80%［1］，由于降低了生长率和饲料利用率引起养猪业的巨大经济损失。一旦猪群中有几头猪被感染，就会在同圏猪之间传播，特别是在断奶时将猪混群以后更是这样。此外，大量研究表明，猪肺炎支原体与其他病原体具有协同感染作用，尤其是与猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）、猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪圆环病毒 Ⅱ 型 （PCV2）、猪流感病毒（SIV）等病毒性疫病混合感染后可以使病毒性肺炎的严重性和持久性明显增加［2］。近年来猪肺炎支原体疫苗已在生产中广泛应用，市场上有国产、进口，肌肉注射、肺内接种、一次、二次免疫等［3－4］，为了查清这些疫苗的免疫效果，我们选择不同类型的疫苗和不同的接种方法进行了免疫试验，总结如下。

1 试验材料与方法

1．1 主要试剂 猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒，购自美国IDEXX公司；猪支原体肺炎灭活苗瑞倍适－旺，购自美国辉瑞（动物保健品）有限公司；猪支原体肺炎灭活苗喜可舒，购自西班牙海博莱生物大药厂；猪支原体肺炎活苗（168株），购自南京天邦生物科技有限公司。

1．2 试验动物及分组 从12窝新生杜长大仔猪中，选择体重相近的健康仔猪72头，随机分成A、B、C、D四组，每组3窝，18头仔猪。A组为瑞倍适－旺疫苗注射组，B组为喜可舒疫苗注射组，C组为猪支原体肺炎活苗（168株）注射组，D组为对照组。按照常规三点饲养进行管理，仔猪于28日龄断奶，63日龄转入育肥舍。4组猪置于同一栋猪舍，所有试验用动物采取相同的饲养和管理方法。

1．3 疫苗的剂量及免疫方法 A组14日龄免疫瑞倍适－旺，免疫剂量2mL／头，颈部肌肉注射；B组分别于14日龄和28日龄免疫喜可舒，颈部肌肉注射，剂量2mL／头；C组7日龄于6～7肋骨间肺内接种1头份猪支原体肺炎活疫苗（168株）；D组分别于14日龄和28日龄每头颈部肌肉注射生理盐水2mL。

1．4 采血及抗体检测 每组随机抽取15头试验猪，分别于14、21、35、49、63日龄和84日龄前腔静脉采血并分离血清，－20℃冷冻保存备用。

按照ELISA抗体检测试剂盒的说明书（北京爱德士元亨生物科技有限公司提供）进行，在630nm测量并记录样品和对照的吸光值。检测结果的判定标准为：S／P＞0．4为阳性，S／P＜0．3 为阴性，0．3≤S／P≤0．4为可疑。

1．5 试验结果统计与分析 应用SPSS17．0统计分析软件统计各组的试验数据，通过Duncan′s新复极差法（DMRT法）比较组间的差异。

2 试验结果

2．1 各组OD值的变化规律及差异显著性分析通过定时采血检测各组猪肺炎支原体抗体效价，经统计分析，其结果见表1。

表1 各组猪肺炎支原体抗体水平

由表1可见，14日龄时各组抗体水平差异不显著（P＞0．05）；在21日龄时A组产生的抗体水平显著高于C、D两组（P＜0．05）；35日龄时，A、B两组抗体水平极显著高于C、D两组（P＜0．01），A组显著高于B、C和D 3组（P＜0．05），B组显著高于C、D两组（P＜0．05）；49日龄时，A、B两组抗体水平极显著高于C、D两组（P＜0．01）；63日龄时，B组抗体水平极显著高于A、C、D三组（P＜0．01），A组抗体水平极显著高于C、D两组（P＜0．01）；84日龄时，A、B两组抗体水平极显著高于C、D两组（P＜0．01）。

2．2 猪肺炎支原体抗体阳性率变化规律 在检测各种疫苗免疫效价的同时，对各组猪群肺炎支原体抗体阳性率变化规律进行了统计，见表2。

表2 各组肺炎支原体抗体阳性率的变化

从表2可见，在免疫前即14日龄时，各组阳性率均为0；在21日龄时，A、B两组的阳性率有一定的升高；35日龄时A、B两组阳性率明显上升，而C、D两组阳性率为0；在49、63、84日龄时，A、B两组阳性率维持在一个较高的水平，C组阳性率为0，而D组阳性率在84日龄时有1头感染。

3 小结与分析

3．1 试验证明不同疫苗免疫接种试验猪后抗体产生不同。14日龄时，各组抗体水平差异不显著。在21日龄时A组产生的抗体水平显著高于C、D两组；35日龄时，A组显著高于B组，B组显著高于C、D两组；49日龄时，A、B两组抗体水平极显著高于C、D两组；63日龄时，B组抗体水平极显著高于C、D两组，84日龄时，A、B两组抗体水平极显著高于C、D两组。由此从免疫效价分析，进行二次免疫喜可舒疫苗效果最好，一次免疫瑞倍适－旺疫苗效果次之，肺内接种猪支原体肺炎活疫苗（168株）组检测不到抗体，这和厂家介绍的该疫苗只起占位效应不产生体液免疫抗体，但对猪群呼吸道综合征临床症状有明显的改善，发育增重，提高生产效力相符。

3．2 对照组在第12周有1头检测呈阳性，这可能试验环境控制不良，外界感染有关。通过对试验猪群肺炎支原体抗体阳性率变化规律的统计，A、B两组的阳性率随着仔猪日龄的增长，抗体阳性率逐渐升高，但只检测到84日龄，以后如何变化需要进一步检测证明。

3．3 控制和净化猪支原体肺炎是世界养猪业面临的难题，疫苗免疫接种是控制该病的有效措施，试验证明，通过接种疫苗预防该病的发生有良好的效果，从临床症状看猪呼吸道症状明显减少，体重，均匀度发育良好，比用药物预防和控制，省力，成本低，效果好，本项试验没有进行生产性能比较，也未做对试验猪的肺部病变进行观察比较，今后在推广免疫试验时，要定时测定猪的体重、耗料等生产性能。

［1］ 于敏，王文军，李景鹏，等．猪肺炎支原体的研究近况［J］．畜牧兽医科技信息，2003（8）：14－16．

［2］ Barbara E S，Jeffery J Z，Doid J T，etal．猪病学［M］．9版．赵德明，张仲秋，沈建忠，主译．北京：中国农业大学出版社，2008：795－816．

［3］ 梅学华．三种猪肺炎支原体灭活疫苗免疫仔猪后抗体效价的比较研究［D］．雅安：四川农业大学硕士论文，2004．

［4］ 刘茂军，苗连叶，赵永前，等．猪支原体肺炎活疫苗（168株）临床试验［J］．畜牧与兽医，2009，41（8）：93－95．