气相色谱法检测药用葡萄糖原料碎米的有机氯残留

张秀珍，龚永福，杨满华，任震眠，肖祎云，温家根，肖少香，陈玉祥，，*

（1.中南大学药学院，湖南长沙 410008；2.万福生科（湖南）农业开发有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技职业学院，湖南长沙 410004）

气相色谱法检测药用葡萄糖原料碎米的有机氯残留

张秀珍1，龚永福2，杨满华2，任震眠2，肖祎云1，温家根1，肖少香3，陈玉祥1，2，*

（1.中南大学药学院，湖南长沙 410008；2.万福生科（湖南）农业开发有限公司，湖南桃源 410128；3.湖南科技职业学院，湖南长沙 410004）

考察湖南部分地区碎米的有机氯农药残留情况，为以碎米为原料生产药用葡萄糖提供安全保障，同时为合理使用有机氯农药提供参考。在《中国药典》方法基础上改良，提取样品，浓硫酸净化后，采用气相色谱法测定有机氯含量。色谱柱为SE-54弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.32mm），经程序升温技术分离，然后用电子捕获检测器进行检测，外标法计算含量。结果表明，样品中有不同程度的有机氯农药残留，该方法快速、简便、准确，适用于碎米中有机氯类农药残留的检测。

有机氯农药残留，大米，气相色谱法

在大米的精加工过程中，不可避免的会产生10% ~15%的碎米，碎米所含营养成分与大米相近，其淀粉含量将近70%~80%，但是其价格仅为整米的三分之一到二分之一，因此以碎米代替整米为原料，采用双酶法生产药用葡萄糖，不仅可以充分利用资源、节约成本，还可以增加大米的附加值。但是稻米在生长的过程中施用了大量的农药，因此收获的稻米中均有不同程度的农药残留。尽管我国早在1983年就停止生产和禁止使用一些有机氯类农药（六六六和滴滴涕）[1]，但由于其高效的杀虫能力，低廉的市场价格再加上广泛的适用性，使其仍不绝于市场；另外由于结构稳定和难于降解的特点，有机氯农药在土壤、动物、植物中均有不同程度的残留，给生物体本身及后代造成了很大的危害[2]。农药对人体的危害主要表现为三种形式：急性中毒、慢性危害和“三致”（致癌、致畸、致突变）危害[3]。六六六、滴滴涕等有机氯农药，随食物途径进入人体后，主要蓄积于脂肪中，其次为肝、肾、脾、脑中，通过人乳传给胎儿引发下一代病变[4]。因此，为了保证粮食的安全性和保护人体的健康，检测碎米中有机氯农药的残留就显得至关重要。本文参考2010版药典以及相关文献，采用气相色谱-电子捕获检测（GC-ECD）法对湖南省部分地区的碎米中有机氯农药残留进行检测，旨在了解湖南各地水稻的有机氯残留情况，为农药的合理使用和生产合格的药用葡萄糖提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

α－BHC（批号：GBW（E）080725）、β－BHC（批号：GBW（E）080727）、γ－BHC（批号：GBW（E）0807229）、δ－BHC（批号：GBW（E）080731）、PP’－DDE（批号：GBW（E）080735）、OP’－DDT（批号：GBW（E）080739）、PP’－DDD（批号：GBW（E）080733）、PP’－DDT（批号：GBW（E）080737）和五氯硝基苯（PCNB）粉末（批号：GBW（E）060617）等 标准品，国家标准物质研究中心。

岛津GC－2010气相色谱仪 配SE－54弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.25mm×0.32mm）、63Ni电子捕获检测器（ECD）；AE163电子分析天平 Mettler；FW 80微型高速万能试样粉碎机 天津泰斯特仪器有限公司；KQ－250B超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；RE－5250真空旋转蒸发仪 深圳三利化学品有限公司；飞鸽牌TDC－40B离心机 上海安亭科学仪器厂；N－EVAPTM 112氮吹仪 USA。

1.2 样品的采集

采用随机抽样的方法从湖南六个市区（常德、长沙、岳阳、株洲、郴州、益阳）分别抽取碎米样本各九份。

1.3 实验方法

1.3.1 标准储备液的制备 精密称取六六六（BHC）（α－BHC，β－BHC，γ－BHC，δ－BHC）、滴滴涕（DDT）（PP’－DDE，PP’－DDD，OP’－DDT，PP’－DDT）及五氯硝基苯（PCNB）农药对照品适量，用石油醚（60～90℃）分别制成每1m L约含4～5μg的溶液；精密量取上述各对照品储备液0.5m L置于10m L容量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀；精密量取上述混合储备液对照品，用石油醚（60～90℃）制成每1L分别含有0、1、5、10、50、100、250μg的溶液，即得。

1.3.2 样品溶液的制备 取适量碎米碎成细粉，取约2g，精密称定，置于100m L具塞锥形瓶中，加水20m L，超声处理30m in，精密加丙酮40m L，称定重量，超声处理30m in，冷却，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g，精密加二氯甲烷30m L，称定重量，超声处理15min，再称定重量，用二氯甲烷补足减失重量，静置分层，将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100m L具塞锥形瓶，放置4h。精密量取35m L，于40℃水浴上旋转蒸发仪减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃），如前反复操作至少三次，至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60～90℃）溶解并转移至10m L具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀释至5m L，小心加入硫酸1m L，振摇1min，离心（3000r/min）10m in，精密量取上清液2m L，置于具刻度的试管中，用氮吹仪将溶液浓缩至适量，精密稀释至1m L，即得。

1.3.3 色谱条件 色谱柱：SE－54（30m×0.25mm× 0.32mm）弹性石英毛细管色谱柱，进样口温度260℃，检测器温度300℃，色谱柱程序升温：初始120℃，保持6m in，5℃/m in升至220℃，保持10m in，8℃/m in升至250℃，保持15m in，检测总时间为54.75m in。载气为高纯氮（质量分数＞99.999%），气流量为30m L/m in，1μL不分流进样，外标法定量。

2 结果与分析

2.1 系统适应性

在确定好的色谱条件下，取按照1.3.1项下制备的混合标准品进样。结果发现，两色谱峰分离度大于1.5[5]，理论塔板数按α－BHC对照品峰计算高于1×106，并确定9种有机氯农药的保留时间（图1）。

图1 250μg/L有机氯标准混合液色谱图Fig.1 GC chromatogram of standard solutions of organochlorine pesticides（250μg/L）

从左到右依次是：α－BHC（15.56m in）、β－BHC（16.75min）、γ－BHC（17.02min）、PCNB（17.24m in）、δ－BHC（18.07m in）、PP’－DDE（25.77m in）、PP’－DDD（27.72min）、OP’－DDT（27.91min）、PP’－DDT（29.91min）。

2.2 重复性实验

精密称量常德碎米样本9份，按照1.3.2项下制备样品，依法测定，将峰面积带入回归方程计算得，PCNB的平均质量分数为0.1147mg/kg，RSD为1.02%（最佳是小于1%[6]，该实验结果约等于1%），方法的重复性好。

2.3 稳定性实验

取岳阳碎米样品溶液1μL，分别在0、2、4、6h依法连续测定3次，以质量浓度计算α－BHC、β－BHC、γ－BHC、δ－BHC、PP’－DDE、PP’－DDD的RSD分别为0.8%、0.5%、1.1%、0.3%、0.6%、0.8%。均小于5%，说明样品在制备6h内稳定性良好。

2.4 检出限测定

配制质量浓度为0.1μg/L的混合标准品溶液进样，以3倍的噪声作为仪器的最低检出限，分别测得九种有机氯的检出限（表1），本实验所检测的9种有机氯农药的检测限均低于1μg/L，因此实验结果表明检测器灵敏度良好。

表1 9种有机氯的仪器检测限和方法检测限Table 1 The device determination limitand method determination limit of 9 organochlorine pesticides

2.5 线性关系考察

分别精密吸取1.3.1项下混合标准储备液各1μL进样，以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标（μg/L），计算回归方程见表2。结果表明，各被测组分在0~ 250μg/L范围内峰面积和质量浓度呈良好的线性关系。

表2 9种有机氯农药回归曲线Table 2 Regression equation of 9 organochlorine pesticides

2.6 回收率实验

取常德碎米6份，每份取2g，精密称定。分别准确加入质量浓度为250μg/L的混合对照品溶液0.1、0.5、0.9m L，混合后挥干溶剂。按1.3.2项下方法制备回收率供试品样品溶液，每份依法测定3次，计算回收率见表3。

表3 回收率测定结果（RSD，%）Table3 Recovery resultsof9 organochlorine pesticides（RSD，%）

通过表3可知，不同农药量条件下，9种不同有机氯农药的回收率和RSD满足农药残留检测的精密度的要求。当检测农药的含量在25～225ng或检测浓度在5~250μg/L时，回收率处于86.83%～118.33%间，RSD在0.30%～2.32%之间，符合实际检测的要求。

2.7 样品的测定

准确称取各地区大米样品，按照1.3.2项下制备样品溶液，依法进行测定，按外标法以峰面积计算含量见表4。

根据中国农药残留量国家标准规定：粮食农产品中滴滴涕、六六六、五氯硝基苯的农药残留最高限量分别是0.2、0.3、0.1mg/kg[7]。从表4可知，只有常德的农残超标，其PCNB含量为0.1147mg/kg，微大于0.1mg/kg。图2为常德地区碎米中有机氯农药检测的色谱图。

图2 常德碎米有机氯农药检测色谱图Fig.2 Gas chromatogram of organochlorine pesticides in rice from Changde

3 结论与讨论

从方法学上可以看出：首先我们采用的提取方法是根据药典改良的。与药典方法相比，我们的方法更简单快捷、节省时间、节省试剂。与近年来发展的样品前处理技术相比，该方法操作简单、成本较低[8-11]。其次，我们建立的方法中，九种有机氯的保留时间较短，比文献中的保留时间缩短了近一半[12]，这不仅可以节省大量的操作时间，同时还可以减少仪器的损耗；最后，我们建立的方法回收率高、重现性好、检测灵敏度高、可用于大批量的样品检测，为有机氯农药残留的检测提供了一个可靠的方法。

从检测结果来看：岳阳和益阳碎米中的有机氯农药残留种类较多，主要是六六六和滴滴涕两类，但是残留量并没有超标，因此可以得知，两地农民对这两种农药的使用较多，今后应该在量上严格控制，否则就要超出安全范围；常德碎米样品只有PCNB一种残留，但其残留量超过了安全范围，因此我们可以得知该地的农民用药比较单一，但是用量却比较大，可能存在滥用的现象；株洲、郴州和长沙检测结果较好，仅有一种农药的微量残留；益阳的碎米农药残留种类较多，含量较少。从以上结果可以看出，各地用药情况参差不齐，但总的来讲六六六和滴滴涕两大类农药仍是使用较多的，因此，以后有关部门应该加强对这种农药的限制使用，以确保粮食安全。

表4 大米样品中有机氯检测结果（mg/kg）Table 4 Organochlorine determination results in the rice samples（mg/kg）

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Determ ination of organochlorine pesticides residues in broken rice for pharmaceuticalglucose by gas chromatography

ZHANG Xiu-zhen1，GONG Yong-fu2，YANG Man-hua2，REN Zhen-m ian2，XIAO Yi-yun1，WEN Jia-gen1，XIAO Shao-xiang3，CHEN Yu-xiang1，2，*
（1.School of Pharmacy，Central South University，Changsha 410008，China；2.Wanfu Biotechnology（Hunan）Agriculture Development Co.，Ltd.，Taoyuan 410218，China；3.Hunan Vocational College of Technology，Changsha 410004，China）

Organochlorine pesticides residues in rice in several Hunan d istrict was exam ined so as to p rovide security for p roduc tion of pharmaceuticalg lucose which wasmade w ith b roken rice and a reasonab le reference for the app lication of organic pesticides.The mod ified method of Chinese pharmacopoeia was used to extract and p repare the samp les which were analyzed by gas chromatography w ith SE-54 fused silica cap illary column（3.0m×0.25mm×0.32mm）and the contents ofnine organic chlorine pesticide were separated by column tem perature p rogram and detected by electronic cap ture detector，calculated by external standard.The results showed that organic chlorine pesticides in rice were determ ined and found in all sam p les.This method was fast，sim p le and accurate that it could be used to determ ine organic chlorine pesticide in rice.

organic chlorine pesticide residues；rice；gas chromatog raphy

TS210.1

A

1002-0306（2012）14-0093-04

2011－11－25 *通讯联系人

张秀珍（1987-），女，硕士研究生，研究方向：新药新制剂。