口服补液盐微生物限度检查方法学验证

耿涛 李晓波 邢汉学

口服补液盐用于腹泻患者，补充体液。为了更好的控制本品质量，本文笔者通过试验，确定了其微生物限度检查可采用常规法，结果该方法简便易行重现性好，值得推广使用。

1 试验材料

1.1 试验样品 口服补液盐批号:110416生产单位:北京曙光制药厂

1.2 实验菌株 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲莓。来源:由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 试药 营养肉汤培养基、玫瑰红培养基、营养琼脂培养基、胆盐培养基、PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、改良马丁琼脂培养基以上培养基均由:北京三药科技开发有限公司生产;中国药品生物制品检定所监制。

2 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证

2.1 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌新鲜培养物接种至营养肉汤中，培养24 h，白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基在，培养24 h，手术上述培养物用0.9%氯化钠溶液制成每1 ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中培养7天，进入5 ml 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成含孢子数为50～100cfu的孢子悬液，备用。

2.2 方法

2.2.1 常规法 供试液制备，取本品制成1:10的供试液，备用。

试验组:取1:10的供试液1 ml于培养皿中，再依次加入已知菌数的试验菌各1 ml按《中国药典》2005年版微生物限度菌落计数方法测定菌落数。

菌液组:按《中国药典》2005年版微生物限度菌落计数方法测定每1 ml菌落数。除不加供试液，操作同试验组。

供试品对照组:取1∶10的供试液1 ml分别注入平皿中《中国药典》2005年版微生物限度菌落计数方法测定本品的底数。稀释液对照组;在PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液1 ml中加入已知菌数的试验菌1 ml，按《中国药典》2005年版微生物限度菌落计数方法测定菌落数。

菌回收计算

实验结果，验证试验回收率结果见表1。

表1 验证验收回收率

从以上结果可以看出，在两次平行试验中，采用常规法检验口服补液盐，人工加入菌液，稀释剂对照组的回收率均高于70%，说明稀释剂对测定无干扰。试验组回收率均高于70%，细菌数测定、霉菌及酵母菌数均采用常规法检验。

3 控制菌检查方法的验证

供试品的制备:同菌落计数

试验组:取供试液10～100 ml胆盐乳糖培养基中同时加入10～100cfu/ml大肠埃希菌1 ml。

阴性菌对照组:方法同试验组，加入10～100cfu/ml金黄色葡萄球菌1 ml代替大肠埃希菌。

结果:试验菌检出大肠埃希菌，阴性菌对照组未检出金黄色葡萄球菌。

4 验证试验小结

根据验证试验结果，确定口服补液盐微生物限度检出法为:细菌数测定、霉菌和酵母菌及控制菌检出均采用常规法测定。方法如下:取本品10 g加入PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液100 ml中，摇匀，使成1:10供试液照《中国药典》2005年版微生物限度项下常规法进行检查。