羊踯躅果实水煎液联合美托洛尔降压调脂作用研究

黄帧桧， 崔卫东， 张年宝， 丁伯平

（皖南医学院药理学教研室及中药药理国家三级实验室，安徽 芜湖 241002）

杜鹃花科植物羊踯躅广泛分布于长江流域，其花、叶、根均可入药，有镇痛、免疫、解热和降压的功效［1-2］，在发挥以上积极治疗作用的同时也具有一定的毒性，可出现行走困难、下肢瘫痪、呼吸急促甚至死亡［3］。β受体阻断剂是抗高血压常用药，美托洛尔由于缺乏内在拟交感活性，长期应用会引起血脂升高。但羊踯躅果实水煎液与美托洛尔联合应用的效果未见报道，本研究旨在探讨羊踯躅果实水煎液联用美托洛尔是否可以在减少各用药剂量、减轻不良反应的同时，能够达到与单用各药相似的降压作用，并且有效地调节血脂，并分析其可能的作用机制。

1 实验材料和方法

1.1 实验动物 雄性SHR大鼠32只(12周，体质量230～250 g)，饲养条件:温度(23±2)℃，相对湿度60% ～65%，自然光照，自由饮食进水。动物购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号:SCXK(京)2006-0009。饲料购于南京青龙山实验动物中心。

1.2 药物与试剂 羊踯躅果实1 kg购自亳州华申药业有限公司(中药材经营资格证号:Z34200300258)，为道地药材，经水熬煮浓缩［4］(含生药1 g/1 mL)，制成羊踯躅果实水煎液；美托洛尔(批号H32025391)由阿斯得康制药有限公司生产；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒、NO、MDA、ET-1、ANGⅡ试剂盒均购自南京建成生物有限公司。

1.3 仪器 日立7600型全自动生化分析仪；TGL-16G-A冷冻离心机；UV-9100分光光度计；ALC-NIBP无创尾动脉血压测定分析系统等。

1.4 方法 32只SHR大鼠适应性喂养一周后随机分为4组:美托洛尔组(给药剂量为5.8 mg/kg)、羊踯躅果实水煎液组(水煎液组，给药剂量为1.5 g/kg)［5］、羊踯躅果实水煎液联合美托洛尔组(联用组，给药剂量为羊踯躅果实水煎液0.75 g/kg、美托洛尔2.9 mg/kg)、模型组和 Wistar-kyoto大鼠空白组(模型组和空白组给予同容积生理盐水)，每组8只。每天上午10点灌胃给药(1.0 mL/100 g)，每天一次，连续4周。尾袖法测大鼠尾动脉血压，给药前测一次，以后每周测一次(每次测量3次，取平均动脉压)。给药4周后，用25%乌拉坦(3 mL/kg)腹腔注射麻醉，腹主动脉取血后，迅速取出肾脏。血液注入含10%EDTA-Na230 μL和抑肽酶40 μL的试管中，4℃，3000 r/min离心 10 min，分离血浆，－20℃保存，待测血脂、MDA、ET-1及NO。取出一侧肾脏留作HE及Masson染色，观察肾脏组织形态学变化及半定量评分。评分方法为:光学显微镜下统一放大10×20倍，观察肾脏组织形态。每张切片随机选取10个视野，观察肾脏纤维化程度，将其分成0～3级并予评分:0为正常肾脏组织，胶原占视野面积小于5%，评为0分；1为轻度纤维化，胶原蛋白占视野面积小于10%，评为1分；2为中度纤维化，胶原蛋白占视野面积11% ～20%，有少量炎性细胞浸润，评为2分；3为重度纤维化，胶原蛋白占视野面积大于20%，且有明显炎性细胞浸润，评为3分。将10个视野评分叠加求算总分。取另外一侧肾脏，留测肾脏局部AngⅡ水平。

1.5 数据处理 采用spss16.0软件进行数据处理，数值以表示，组间比较采用方差分析，显著性水平P＜0.05。

2 结果

2.1 不同用药组对SHR大鼠的降压作用 用药前，各组SHR大鼠血压无差别(P＞0.05)。用药后，各给药组与模型组比较均有不同程度的降压作用，随着给药时间的延长，降压作用越明显(P＜0.05或P＜0.01)。各给药组间在1～4周内降压作用无明显差别(P＞0.05)。见表1。

表1 不同用药组对SHR的降压作用 (1 mmHg=0.133322 kPa)(，n=8)

表1 不同用药组对SHR的降压作用 (1 mmHg=0.133322 kPa)(，n=8)

注:与空白组相比，▼ P＜0.05，▼▼P＜0.01；与模型组相比，*P＜0.05，＊＊P＜0.01；与美托洛尔组相比△P＜0.05，△△P＜0.01，下同。

组别 用药前 剂量/(mg·kg －1)用药后1周后 2周后 3周后 4周后空白组 130.18±11.67 － 132.78±15.43 128.96±9.89 140.87±12.22 133.77±18.88模型组 163.56±8.79▼▼ － 179.00±7.88 182.48±6.91 185.18±4.56 193.77±10.79美托洛尔组 168.96±9.14▼▼ 5.8 167.76±7.17* 157.22±13.12＊＊ 148.50±8.36＊＊ 136.14±8.76＊＊水煎液组 171.63±7.83▼▼ 1500 164.84±9.56＊＊ 160.12±9.09＊＊ 150.23±9.91＊＊ 134.13±9.89＊＊联用组 170.67±8.44▼▼ 2.9+750 161.18±7.03＊＊ 154.64±14.11＊＊ 146.91±7.39＊＊ 139.88±10.00＊＊

2.2 不同用药组对肾脏局部AngⅡ水平的影响 SHR组与空白组比较，肾脏局部AngⅡ水平显著升高(P＜0.01)。各用药组同模型组相比，AngⅡ水平表现为不同程度的下降(P＜0.01)。联合用药组与各单用组相比，AngⅡ水平下降更为明显，差异具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。见表2。

表2 不同用药组对肾脏局部AngⅡ水平的影响

2.3 不同用药组对血浆MDA、ET-1和NO水平的影响 各给药组与模型组比较，均表现为MDA下降(P＜0.05或P＜0.01)，联用组与美托洛尔、水煎液两组比较，差异具有显著性(P＜0.05)。同模型组相比，各用药组均使ET-1明显降低(P＜0.01)；而联用组较单用美托洛尔组与水煎液组对ET-1的生成抑制作用更显著(P＜0.01)。而NO的结果与前两个指标的情况恰好相反，即各用药组NO水平与模型组相比均表现为程度不同的升高(P＜0.05或P＜0.01)，联合用药组与单用各药组比较，NO的升高更为明显，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

2.4 各用药组对血浆TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影响美托洛尔组同模型组比较，TC、TG、LDL-C升高(P＜0.01)，HDL-C降低(P＜0.01)；水煎液组同模型组相比，血脂变化无差异(P＞0.05)。联合用药组与模型组比较TC、TG、LDL-C水平无明显变化，差异无统计学意义(P＞0.05)，但HDL-C同模型组相比却表现为明显升高(P＜0.01)。见表4。

表3 各用药组对血浆MDA、ET和NO水平的影响 (，n=8)

表3 各用药组对血浆MDA、ET和NO水平的影响 (，n=8)

组别 剂量/(mg·kg－1) MDA/(μmol·L －1) ET-1/(ng·L－1) NO/(μmol·L－1)

表4 各用药组对血浆TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影响(，n=8)

表4 各用药组对血浆TC、TG、LDL-C及HDL-C水平的影响(，n=8)

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2.5 不同用药组肾脏切片HE及Masson染色纤维化程度半定量分析 水煎液组与模型组相比，肾小球体积增大，细胞数量增多，肾小球内有纤维素渗出。肾小球、肾间质大片红染，细胞核减少、溶解，有中性粒细胞、单核巨噬细胞及淋巴细胞浸润。美托洛尔组、联合用药组同水煎液组相比，肾小球体积明显减小，纤维化不明显。肾小管并未发生萎缩，肾间质也无充血消肿，炎性细胞很少。见图1～2。

图1 不同用药组肾脏组织HE染色光镜下表现(×200)

图2 各组大鼠典型肾脏纤维化Masson染色切片(×200)

Masson染色结果及半定量分析结果显示，联合用药组和美托洛尔组与模型组比较纤维化程度明显减轻(P＜0.01)，而水煎液组与模型组相比肾脏出现了纤维化(P＜0.01)。联合用药组与美托洛尔组相比表现出了更好的降低肾脏纤维化作用，差异有显著性(P＜0.05)。见表5。

表5 不同用药组肾脏纤维化评分

3 讨论

高血压影响重要脏器如心、肾的结构和功能，最终可导致这些靶器官的衰竭。常用抗高血压药物可使患者产生头痛、下肢浮肿、血管性水肿、干咳等一系列不良反应。β受体阻断剂美托洛尔虽然降压显著，但长期使用可引起血脂升高。中药在治疗高血压时由于其作用温和，毒副作用较小，在高血压的治疗中起着举足轻重的作用。羊踯躅的果实又称八厘麻或六轴子，民间常用其驱风除湿、消肿止痛。羊踯躅果实的水煎液在发挥快速降压作用的同时也会出现不良反应，表现为呼吸抑制、惊厥等［6］。本实验采用羊踯躅果实的水煎液联合美托洛尔，探讨此联用组与单用各药组相比，是否可以在保持良好降压作用的同时，能减轻对血脂的不良影响。

各用药组与模型组相比均表现出了良好的降压作用，联合用药组与单用各药组降压作用相比，差异无统计学意义。SHR模型组血压由给药前的163.56 mmHg升高到193.77 mmHg，这一现象符合SHR生长期血压变化，同时也说明了单用美托洛尔或羊踯躅果实水煎液及两者联合应用对处于血压上升期的SHR血压都有良好的降压作用。

MDA是生物膜中多价不饱和脂肪酸受自由基作用生成的脂质过氧化代谢产物，主要存在于低密度脂蛋白胆固醇中，检测MDA可以间接反映抗脂质过氧化作用的程度。本研究发现各给药组血浆中MDA明显低于模型组，说明无论是美托洛尔还是羊踯躅果实水煎液都可以通过减少脂质过氧化的程度而发挥抗高血压作用。同时也看到联用组与单用各药组比较可以更好地抵抗脂质过氧化的发生，说明联合用药效果要比单用其中某一药物效果好。

血管内皮功能失调导致舒张因子与收缩因子分泌失衡，是影响高血压心血管重构的重要环节［7］。车在前等［8］认为NO可能通过抑制成纤维细胞增殖及胶原的合成，影响高血压病的发生和发展。实验结果显示，各用药组NO与模型组相比有不同程度的升高，而联用组与单用各药组比较，其升高的程度更为明显，提示联合用药可以使NO生成增多，其机制可能是与鸟苷酸环化酶的活性升高有关。

目前认为ET收缩血管活性最强，作用比血管紧张素强10倍，它由多种组织中血管内皮细胞分泌后，通过自分泌或者旁分泌的形式和ET受体结合，引起细胞外钙内流，起到收缩血管的作用。实验中观察到，联合用药组与单用各药组相比差别有显著性，提示联合用药后抑制内皮细胞分泌ET更为明显。

在肾脏局部，活性增高的AngⅡ直接或间接诱导转化生长因子-β表达，刺激肾脏局部纤溶酶原激活物抑制剂-I等的表达，促进肾小管间质成纤维细胞的增殖、分化，导致大量单核巨噬细胞浸润肾小球，细胞外基质成分合成增多、降解减少，这一局部作用日益引起人们的关注［9］。从实验结果可以看出SHR肾脏局部AngⅡ水平较空白组相比明显升高，单用各药和联合用药均可以收到明显的降低AngⅡ水平的效果。结果也显示，联合用药较单用各药在减少各用药剂量的同时，可以起到更好的降低肾脏局部AngⅡ的作用。

Xie F等［10］研究表明，高血脂这一危险因素可以协同高血压对心脏造成更严重的损害。本次结果显示，美托洛尔组与模型组相比，LDL-C、TG、TC物质的量浓度升高，HDL-C降低，这一点与赵宪平等［11］的实验结果一致。水煎液组与模型组比较血脂变化无明显差别；联用组LDL-C、TG、TC与模型相比无明显差异，而HDL-C却升高。说明联合用药可以使HDL-C升高，对机体具有保护作用。

肾脏损害表现为小管间质纤维化、肾实质丢失、肾小球硬化，有炎症细胞浸润，肾内细胞外基质异常增多和过度沉积，最后导致固缩肾［12-13］。从肾脏的HE组织切片可以看到，水煎液组可引起肾脏纤维化，美托洛尔组和联用组纤维化不明显。联合用药组与美托洛尔组相比具有更加明显的降低肾脏纤维化作用。

综合以上实验结果，提示联合用药不但可以通过减轻脂质过氧化的程度，调节内皮细胞的功能，使它合成的ET-1减少，同时又增加NO的释放，内皮细胞重新处于对机体有利的最佳状态，发挥更好的降压效果，同时还有阻止高血压的易损靶器官肾脏的纤维化的可能。对肾脏的这一保护作用尚需增加样本例数和延长观察时间加以证实。本研究还发现联合用药对血脂的影响，在不影响LDL-C、TG、TC的情况下却可以使HDL-C升高。但其对血脂影响的机制还有待进一步研究。

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［4］陈东生，黄艳兵.薄层扫描法测定羊踯躅根及果实中八厘麻毒素的含量［J］.中国医药学报，1998，13(5):69-70.

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［7］Hoe S Z，Lee C N，Mok S L，et al.Gynura procumbens Merr.decrease blood pressure in rats by vasodilatation via inhibition of calcium channels［J］.Clin(Sao Paulo)，2011，66(1):143-150.

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