藏药七十味珍珠丸对实验性心肌缺血大鼠的保护作用

吴 穹， 马祁生， 刘永年

（青海大学医学院病理生理学教研室，青海 西宁 810001）

七十味珍珠丸(藏文译音:然那桑培Ran na san pei，RNSP)，收载于18世纪名医葛玛·额勒丹增所著的《药方集万部》中，其方药由珍珠、玛瑙、珊瑚、牛黄、麝香、藏红花等七十味动、植物和矿物质组成，对高血压病、脑卒中及其后遗症、癫痫、脑动脉硬化、脑血栓、心肌梗塞等有确切的疗效［1-3］。为此，本实验从对大鼠实验性心肌梗死的的保护作用方面探讨七十味珍珠丸抗心肌缺血性损伤的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SD成年雄性大鼠36只，清洁级，体质量(200±20)g，由青海省实验动物中心提供，合格证号:青医动管001号，购回后适应性喂养24 h。

1.2 试剂与药品 藏药七十味珍珠丸(金诃藏药生产，批号:080916)，用前研磨成粉，以蒸馏水稀释为每1 mL溶液含生药0.5 g；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；灌注液(碳素墨水与多聚甲醛按6∶1混匀制成)。

1.3 仪器 BL420-E生物信号采集系统(成都泰盟)；Olympus光学显微镜；LD4-2A离心机(北京医用离心机厂)；750型全自动生化分析仪(日本东芝)；HX-300动物呼吸机(成都泰盟)；Motic6.0数码医学图象分析系统(厦门麦克奥迪仪器仪表有限公司)。

2 方法与结果

2.1 分组和给药 36只大鼠随机分为3组，每组12只(6只用于血清酶学、SOD活性、MDA水平测定，6只用于大鼠心肌微血管形态学观察)，即假手术组、模型组、藏药七十味珍珠丸组(简称藏药组)。造模前7 d，藏药组大鼠灌胃给予七十味珍珠丸水溶液5 g/kg，模型组及假手术组大鼠给予生理盐水10 mL/kg。每天1次，共7次，末次给药30 min后，实施手术。

2.2 模型的制作 参考文献方法［4］加以改进，大鼠用盐酸氯胺酮(80 mg/kg)腹腔麻醉，呼吸机辅助呼吸，确定心搏位置，在心搏最明显处沿胸骨左缘剪开3～5肋骨，打开胸腔，轻轻挤压胸腔，暴露心脏，剪开心包，于左心耳根部下方2 mm处进针，肺动脉圆锥出针，结扎冠状动脉左前降支，然后逐层缝合胸壁，开胸前后及时记录Ⅱ导联心电图，以结扎部位以下变白，心电图出现ST段弓背向上明显抬高为造模成功，造模后动物单笼饲养。

2.3 统计学处理 应用SPSS13.0软件进行统计分析。数据均以表示，显著性检验采用方差分析和SNK-q检验，显著性检验水准α=0.05。

2.4 血清酶测定 各组大鼠均于缺血24 h后心脏取血，离心后用生化分析仪测定血清LDH和CK。与模型组比较，七十味珍珠丸能显著降低血清中LDH和CK的释放(P＜0.05)，结果见表1。

表1 各组大鼠心肌缺血后血清酶LDH、CK的变化(n=6，)

表1 各组大鼠心肌缺血后血清酶LDH、CK的变化(n=6，)

注:与假手术组相比，★P＜0.05；与模型组相比，◇P＜0.05。

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2.5 心肌组织SOD活性和MDA定量的测定 缺血24 h后取出心脏，用冰冷的生理盐水冲洗后制备成10%和5%的组织匀浆，严格按照试剂盒说明测定心肌组织SOD活性及MDA水平。与模型组比较，七十味珍珠丸显著升高心肌SOD活性，降低MDA水平(P＜0.05)，结果见表2。

表2 各组大鼠心肌缺血后心肌组织SOD、MDA的变化(n=6，)

表2 各组大鼠心肌缺血后心肌组织SOD、MDA的变化(n=6，)

注:与假手术组相比，★P＜0.05；与模型组相比，◇P＜0.05。

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2.6 心肌微血管面密度和面积的定量分析 缺血24 h后进行活体灌注。①迅速夹闭大鼠主动脉，腹主动脉及上、下腔静脉；②以玻璃注射器抽取配好的灌注液，接上针头，插入左心室，以均匀恒定压力缓推注灌注液，待心脏显黑色，呈充盈状态，连同玻璃注射器一同放入冰箱中冷藏24 h后取下心脏，取冠状动脉左前降支供血区心尖部及左室前壁心肌组织(略大于该动脉灌注区)，进行－20℃恒冷箱切片，切片厚度10 μm；③每只动物连续取4张切片，用Motic6.0数码医学图象分析系统对灌注微血管面密度和面积进行定量分析，结果见表3。

表3 心肌微血管面密度及面积百分比的比较(n=6，)

表3 心肌微血管面密度及面积百分比的比较(n=6，)

注:与假手术组相比，★P＜0.05；与模型组相比，◇P＜0.05。

组别 例数 心肌微血管面密度/(个·mm－2)面积百分比/%假手术组6 16.5±1.6 18.4±2.1模型组 6 4.8±1.4★ 3.8±1.0★藏药组 6 8.5±1.7★◇ 7.3±1.5★◇

3 讨论

七十味珍珠丸具有调和气血，通经活血通络的功能，能协调各脏腑功能，加强机体气血运行，改善心血管血液循环［3］；而促进缺血心肌区域侧支循环的建立、健全动脉血管的新生，是目前国际心血管病学界的研究热点。在正常心脏中，存在着冠状动脉的吻合通路，但其内仅有少量的血液流通，基本上属于潜在性的吻合:口径小，流量低。但当局部心肌缺氧和压力梯度改变时，可刺激侧枝血管的构建。冠脉侧枝循环的建立能减轻心肌缺血坏死，预防和延缓缺血性心脏病和室壁瘤形成，改善临床症状和预后。血管面密度是直接反映侧枝血管形成最可靠的解剖学指标［5］；而心肌缺血患者血清中的CK、LDH水平是反映心肌组织受损情况敏感的生化指标［6］。本实验结果表明，模型组缺血心肌组织微循环受到严重损伤，缺血后24 h血管面密度、面积骤减，而七十味珍珠丸预处理组可起到改善侧枝循环的效应，快速建立有效的功能性侧枝循环，增加冠脉血流量，升高心肌SOD活性，降低MDA水平，减轻心肌细胞脂质过氧化程度［7-8］，显著降低冠脉结扎致心肌梗塞大鼠血清中LDH和CK的释放，说明七十味珍珠丸可通过促进缺血心肌区域侧支循环的建立，从而增加心肌供血，增强自由基清除剂的功能，阻止心肌脂质过氧化，减轻心肌损伤的程度。

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［5］王大英，李 勇，范维琥.麝香保心丸对心肌梗塞大鼠梗塞面积和血管新生作用［J］. 中成药，2004，26(11):912-915.

［6］覃秀川，郭新文，睢大员，等.人参Rb组皂苷对急性心肌梗塞大鼠自由基代谢的影响［J］.吉林中医药，2002，22(3):52-53.

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