高效液相色谱串联质谱法鉴定山芝麻水提取液的化学成分

宋伟峰 罗淑媛 李瑞明 梁耀荣

1.中山大学附属第三医院，广东广州 510630；2.中山大学附属第一医院，广东广州 510080

高效液相色谱串联质谱法鉴定山芝麻水提取液的化学成分

宋伟峰1罗淑媛1李瑞明2梁耀荣2

1.中山大学附属第三医院，广东广州 510630；2.中山大学附属第一医院，广东广州 510080

目的 鉴定山芝麻水提取液的化学成分。 方法 采用水为溶剂加热回流提取法提取山芝麻药材，提取液采用高效液相色谱串联质谱法鉴定其中的化学成分。 结果 从山芝麻水提取液中共分离得到10个主要的化学成分，并采用多级质谱对其进行了结构鉴定，其中8个化学成分通过对照品得到了确证，分别为奎尼酸、柠檬酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C、异绿原酸A和异绿原酸B。 结论本实验为该药材的开发和利用提供了科学基础。

山芝麻；水提取液；化学成分；高效液相色谱串联质谱法

山芝麻为梧桐科植物山芝麻Helicteres angustifolia L.的干燥根，其味苦、性寒，归肺、大肠经，可解表清热、解毒消肿，用于感冒发热、痄腮、麻疹、咳嗽、泄泻痢疾、痈肿[1-2]。山芝麻为民间常用的中药，始载于《生草药性备要》，是广东凉茶的主要原料，也是多种中药制剂的原料[3]。山芝麻为广东地方特色中药材，其研究水平较低，相关报道也较少，严重制约了该药材的开发利用。近年来对其化学成分的研究逐渐深入开展，植物化学研究表明，山芝麻中含有有机酸、三萜、甾体和倍半萜内酯类等有效成分[4-9]。由于中药饮片主要采用水煎煮的方式服用，研究其水提取液的化学成分具有重要的意义。本文采用水为溶剂加热回流提取山芝麻的活性成分，提取液采用高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MSn）分析，研究结果将为山芝麻药材的开发利用及其质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Agilent 1100 HPLC-MSD高效液相色谱离子阱质谱联用仪（美国Agilent公司）；色谱柱：Zorbax-SB C18高效液相色谱柱（150.0mm × 2.1mm，5μm，美国 Agilent公司）。 乙腈为色谱纯（美国Burdick&Jackson），水为Milli-Q超纯水。山芝麻药材购自广州大参林药店，经鉴定为山芝麻（Helicteres angustifolia L.）。

2 方法与结果

2.1 样品提取

取山芝麻药材粉碎，称取10 g置圆底烧瓶中，加100mL水，加热回流提取2 h，提取液冷却后转移至100 mL的容量瓶中，定容后过0.45μm滤膜，待分析。

2.2 色谱及质谱条件

2.2.1 色谱条件 Zorbax-SB C18高效液相色谱柱（150.0 mm×2.1 mm，5μm）；流动相A为0.5%的甲酸，B为乙腈，梯度洗脱：0～5 min，98%A+2%B；5～25 min，2%～12%B；25～55 min，12%～25%B；55～70 min，25%～95%B；后运行 10 min，98%A+2%B。流速为0.5mL/min，进样量为5.0μL，柱温为25℃，二极管阵列检测器（DAD）扫描波长为190～400 nm。

2.2.2 质谱条件 电喷雾（ESI）离子源，负离子检测模式；雾化N2压力 345 kPa，干燥 N2气流速 10 L/min，干燥 N2气温度350℃；毛细管电压 3 500 V；质谱扫描：m/z 50～1 000，Auto MSn模式，自动选择丰度最高的三个离子进行二级和三级质谱分析。

2.3 成分分析

山芝麻药材水提取液的HPLC-MSn分析总离子流色谱见图1，色谱图上有10个明显的色谱峰，表明山芝麻水提取液中含有10个主要的化学成分。对每个化学成分进行多级质谱分析，并结合相关的文献报道，对这10个色谱峰进行了鉴定，相关信息见表1，图2给出了异绿原酸A的多级质谱裂解途径。异绿原酸（m/z 515）为双咖啡奎宁酸衍生物，多级质谱失去1分子咖啡酰基，得到单咖啡奎宁酸衍生物（m/z353），m/z 353再失去1分子咖啡酰基得到m/z 191的碎片。

通过与对照品的保留时间、一级质谱和多级质谱信息进行比较，色谱峰 1、2、3、5、6、8、9 和 10 分别确证为奎尼酸、柠檬酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸C、异绿原酸A和异绿原酸B。化合物4由于缺乏相关的文献报道和对照品，故结构未能鉴定，有待进一步分析。化合物7与化合物8、9和10的一级质谱相同，显示具有相同的分子量，而它们的多级质谱碎片信息也非常相似，提示它们具有相似的结构，因此推测化合物7为异绿原酸的异构体。

3 讨论

山芝麻作为岭南常用中药，资源极为丰富，常用于治疗感冒发热、痄腮、麻疹、咳嗽、泄泻痢疾和痈肿等症。HPLCMSn具有高选择性、高灵敏度和能提供结构信息的特性，在中药化学成分鉴定中起着非常重要的作用。本实验通过对山芝麻水提取液进行HPLC-MSn分析，研究了其水溶性化学成分，山芝麻水提取液主要成分为咖啡酰奎尼酸类化合物。咖啡酰奎尼酸类化合物具有广泛的抗菌、抗炎、抗氧化等活性，是山芝麻水提取液的药效物质基础[10-11]。本实验为山芝麻药材的药效作用研究和合理开发利用提供了实验依据。

表1 山芝麻水提取液的化学成分分析

[1]广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准（第1册）[M].广州：广东科学技术出版社，2004：16-17.

[2]苏丹，高玉桥，黄增芳，等.山芝麻挥发油成分的GC-MS分析[J].中国药房，2011，22（23）：2173-2174.

[3] 高玉桥，苏丹，梅全喜.山芝麻的研究进展[J].中国药业，2009，18（16）：88.

[4]魏映柔，王国才，张晓琦，等.山芝麻化学成分[J].中国中药杂志，2011，36（9）：1193-1197.

[5]刘卫国，王明时.山芝麻中三个新三萜化合物的结构测定[J].药学学报，1985，20（11）：842.

[6]王明时，刘卫国，李景荣，等.山芝麻内酯化学结构的测定[J].化学学报，1988，46（8）：768.

[7]郭新东，安林坤，徐迪，等.中药山芝麻的化学成分研究（Ⅰ）[J].中山大学学报：自然科学版，2003，42（2）：52-55.

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[9]ChenW，TangWD，Lou LG，etal.Pregnane，coumarin and lupine derivatives and cytotoxic constituents from Helicteres angustifolia [J].Phytochemistry，2006，67（10）：1041-1047.

[10]郭朝晖，周学清，蒋生祥.甘肃金银花中绿原酸含量与抑菌作用的实验考察[J].时珍国医国药，2005，16（12）：1258-1259.

[11]李满秀，张瑶，杨淑英.绿原酸的直接荧光分析法及其抗氧化性研究[J].分析科学学报，2011，27（2）：203-206.

Identification of the major com ponents from the water extract of Helicteres angustifolia L.by high-performance liquid chromatography coupled w ith tandem mass spectrometry

SONGWeifeng1 LUO Shuyuan1 LIRuiming2 LIANG Yaorong2
1.The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510630,China;2.The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong Province,Guangzhou 510080,China

Objective To identify themajor components from the water extract of Helicteres angustifolia L..MethodsThe Helicteres angustifolia L.was extracted by reflux extraction using water as solvent,and the extractwas analyzed by highperformance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry.Results10 major componentswere separated,and their chemical structures were identified by tandem mass spectrometer.Among them,quinic acid,citric acid,neochlorogenic acid,chlorogenic acid,cryptochlorogenic acid,isochlorogenic acid C,isochlorogenic acid A and isochlorogenic acid B were confirmed by a comparison of MSn information with those of the reference substances.ConclusionThe method provides the scientific basis for the exploitation and utilization of Helicteres angustifolia L..

Helicteres angustifolia L.;Water extract;Components;High-performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry

R284.1

A

1673-7210（2012）12（a）-0108-02

广东省科技计划项目（项目编号：2011A080300004）。

宋伟峰（1972，4-），男，主管药师；研究方向：医院药学。

李瑞明（1974，7-），男，主管药师；研究方向：医院制剂。

2012-06-05 本文编辑：卫 轲）