Vimentin、Ki－67在透明细胞性肾细胞癌组织中的表达及其与MVD的相关性研究

张丽娜，张淑敏

（天津医科大学第二医院 天津市泌尿外科研究所，天津300211）

波形蛋白（vimentin）属于Ⅲ型中间丝蛋白，表达在间充质细胞和一些外胚层细胞［1］，多种上皮性肿瘤细胞表达波形蛋白，且被认为与肿瘤细胞的恶性程度密切相关［2，3］。Ki－67是细胞核内与细胞分裂及增殖相关的核蛋白，其表达与细胞增殖状态高度相关，是反映肿瘤细胞增殖活性和判断肿瘤恶性程度的指标［4］。CD34主要分布于血管内皮细胞，可作为内皮细胞的特异标志计算肿瘤微血管密度，了解肿瘤的血管形成情况。我们采用免疫组织化学SP法对68例透明细胞性肾细胞癌组织中vimentin、Ki－67和CD34的表达情况进行研究，并探讨其相关性。

1 材料与方法

1.1 临床资料 天津市泌尿外科研究所病理科2010年1月至2011年2月收检的肾根治术后标本68例，男52例，女16例；年龄27－70岁，平均年龄52.3岁；左侧38例，右侧30例；肿瘤直径0.4cm－13cm，平均4.7cm。病理分期采用2004年 WHO肾细胞癌分期系统：pT1：36例；pT2：26例；pT3：4例；pT4：2例；组织学分级用1982年Fuhrman四级分类法：Ⅰ级：12例；Ⅱ级：39例；Ⅲ级：14例；Ⅳ：3例。所有患者术前均未发生远处转移并无其他恶性肿瘤病史，术前均未接受放疗、化疗或免疫治疗。全部68例为实验组，病理证实均为透明细胞性肾细胞癌，另取距肿瘤边缘2cm癌旁组织40例作为对照组，经病理证实均为正常肾脏组织。

1.2 试剂 链亲和素－生物素－过氧化物酶（Streptavidin－biotin immunoperoxidase，SP）试剂盒及vimentin单克隆抗体（ZM－0260）、Ki－67单克隆抗体（ZM－0166）和CD34单克隆抗体（ZM－0046）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组织化学染色方法 vimentin、Ki－67和CD34表达检测均采用SP法，试验步骤按照说明书进行。以正常肾组织中的肾小球作为vimentin和CD34的阳性对照，以乳腺癌组织作为CD34的阳性对照，PBS代替一抗作为空白对照。

1.4 结果判定

1.4.1 vimentin染色程度判断 阳性结果为比较鲜明的棕黄色染色，靠近包膜或充满包浆，弥散分布。按文献进行染色程度判断［5］每张切片随机选取10个高倍视野，每个高倍视野计数100个癌细胞，观察阳性细胞染色强度，计数阳性细胞百分数并进行评分：1分为阳性细胞百分率≤10%；2分为阳性细胞占11%－40%；3分为阳性细胞占41%－70%；4分为阳性细胞百分率≥70%。根据染色强度计算分数：0分无染色，1分为淡黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色颗粒。结果取两者评分之乘积，0分为阴性（－），1－2分为弱阳性（＋），3－4分为阳性（＋＋），大于4分为强阳性（＋＋＋）。

1.4.2 Ki－67染色程度判断 Ki－67以胞核呈棕黄色为阳性。按文献 Ki－67计数标准［6］，每张切片随机数5个高倍视野，每个视野计数200个细胞，共计数1000个细胞，计算每张切片阳性细胞百分率，无阳性细胞为阴性（－），阳性细胞数＜10%为弱阳性（＋），10%－30%为阳性（＋＋），＞30%为强阳性（＋＋＋）。

1.4.3 CD34的表达和 MVD计数 CD34阳性染色呈棕黄色，分布在细胞质及细胞膜上。采用Weidner微血管计量方法。即每一个染成棕黄色的，可与周围血管、肿瘤细胞和其他结缔组织区分开的内皮细胞和内皮细胞簇，不论管腔和红细胞出现与否，均作为一个单一的、可计数的微血管。每张切片先在10倍物镜下寻找肿瘤中微血管密度最高的3个区域，然后在40倍物镜下计数5个视野的微血管，取其平均值。本过程按盲法操作。

1.5 统计学方法

2 结果

透明细胞性肾细胞癌组织中vimentin蛋白的表达（见表1）。正常肾组织中小管上皮细胞阳性表达率为10.00%；CCRCC组织中阳性表达率为76.47%，两组有显著性差异（P＜0.01）。正常肾组织的表达均为弱阳性，CCRCC中强阳性17例，阳性30例，弱阳性5例。CCRCC不同病理分期中pT1与pT2及pT1与pT3＋pT4之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。组织学分级三组之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。

透明细胞性肾细胞癌组织中ki－67蛋白的表达（见表1）。正常肾组织中小管上皮细胞核阳性表达率为0；CCRCC组织中阳性表达率为89.71%，两组有显著性差异（P＜0.01）。CCRCC中强阳性14例，阳性42例，弱阳性5例。不同病理分期三组之间无显著性差异（P＞0.05）。组织学分级表现为Ⅰ级与Ⅱ级及Ⅰ级与Ⅲ级＋Ⅳ级之间差异具有统计学意义（P＜0.05）。

透明细胞性肾细胞癌组织中MVD计数（见表1）。CCRCC组织中MVD计数高于正常肾组织，两组有显著性差异（P＜0.01）。pT1与pT3＋ T4及pT2与pT3＋ T4之间有显著性差异（P＜0.05）；pT1与pT2之间无显著性差异（P＞0.05）。组织学分级三者之间具有显著性差异（P＜0.05）。

vimentin、Ki－67和 MVD计数间的关系：统计分析表明，CCRCC组织中vimentin表达与 MVD计数呈正相关（r＝0.928，P＜0.01）；Ki－67表达与MVD计数亦呈正相关（r＝0.895，P＜0.01）。

VEGF与 Ki－67表达无显著性差异（P＞0.05），显示二者的阳性表达趋于一致。

3 讨论

vimentin是一种Ⅲ型中间丝蛋白，主要在间叶组织中表达，可作为在组织病理学诊断中鉴别肿瘤细胞分化起源的特异性标记物［7］。Vimentin在乳腺癌、肝细胞癌、透明细胞性肾细胞癌等多种上皮癌中表达［8－10］，其高表达与癌细胞的分化程度低、侵袭性强和易转移有密切关系［11］。本研究发现CCRCC组织中vimentin的阳性表达率显著高于正常肾脏组织，且癌的病理分期及核分级越高，其表达强度和阳性表达率越高，提示vimentin表达增加可能在肾细胞癌的发生及进展中起重要作用。

表1 CRCC和正常肾组织中vimentin、ki－67的表达及MVD计数

Ki－67是目前应用最广的细胞增殖标志之一，能可靠地反映肿瘤细胞增殖情况。本研究显示Ki－67在CCRCC组织中的阳性表达率为89.71%，且癌的病理分期及核分级越高，其表达强度和阳性表达率越高，而正常肾脏组织不表达，提示Ki－67标记有利于判断CCRCC的分化程度，为评估其预后提供参考。

血管生成是肿瘤侵袭性生长和转移的必备条件之一，新生血管不仅为肿瘤细胞的增殖提供养分，而且是肿瘤细胞进一步侵袭的重要途径。由于MVD能反映肿瘤血管的发生情况，Ueda等认为MVD计数可作为判断癌复发和预后的可靠指标［12］。本研究发现，CCRCC组织中vimentin和Ki－67表达都与MVD计数呈正相关；vimentin和Ki－67的阳性表达率具有相似性，提示vimentin和 Ki－67在CCRCC的发生、发展过程中起协同作用。另外，vimentin既在癌细胞中表达，同时也在间质中表达这一特征提示，其有促使新生血管形成的可能。肿瘤细胞生长与血管生成是相互依赖和相互促进的关系，联合检测vimentin、Ki－67和 CD34在 CCRCC组织中的表达，有助于判断其生物学行为和预后，从而更好的指导该病的治疗。

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