心脑通络液对脑梗死大鼠脑组织Glu、Asp含量的影响

吴限，徐莹，陈鹏

(黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨 150040)

脑血管疾病是神经内科最为常见疾病，也是成人致残的常见因素，在世界范围内已成为继心脏病、癌症之后第3位的致死性疾病，这不仅严重地影响着老年人的生活质量，也给社会和家庭带来沉重的负担。谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)是兴奋性氨基酸(EAA)的递质，广泛存在中枢神经系统(CNS)中。当发生脑缺血时，Glu和Asp会异常升高，在神经元缺血损伤中起重要作用［1］。本实验是通过观察各组的脑梗死大鼠的脑组织中Glu、Asp含量，探讨心脑通络液治疗脑梗死的作用机理。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 动物及药物

健康SD大鼠，体质量250～300g(黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供)。制备浓度分别为0.54ml/ml(高剂量组)和0.27ml/ml(低剂量组)的心脑通络液(黄芪 50g，地龙 20g，桃仁 20g，红花 20g，当归尾 20g，赤芍 20g，川芎 20g，太子参 20g，水蛭 10g，菟丝子20g等，黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室提供)。用生理盐水制备成浓度为0.033g/ml的步长脑心通(咸阳步长制药有限公司生产，每粒0.4g)药液。

1．1．2 试剂及仪器 低温离心机;ASP试剂盒;Glu试剂盒等。

1．2 方法

1．2．1 分组及给药 将健康雄性SD大鼠编号后随机分为5组，分别为心脑通络液高剂量组(高剂量组)、心脑通络液低剂量组(低剂量组)、步长脑心通对照组(对照组)、假手术组和模型组。假手术组和模型组予同等体积的0.9%生理盐水灌胃，1日1次。治疗组大鼠分别于术前5天至处死前予灌胃给药，剂量标准为:高剂量组5.40ml/kg，低剂量组2.70ml/kg，对照组0.33g/kg，每日1次。在造模后每时间点(6h、12h、24h、48h)各取8只大鼠用高效液相色谱仪检测Asp和Glu的含量指标。

1．2．2 模型的复制 参照文献［2－3］，用线栓法制备大脑中动脉局灶性脑缺血的大鼠模型。

1．2．3 检测指标及方法 按照试剂盒说明，将各组大鼠的脑组织去除小脑和延髓，制备好10%脑组织匀浆，用离心机离心10min，提取脑匀浆的上清液。用高效液相色谱仪测定其Glu、Asp的含量。

2 结果

2．1 心脑通络液对脑梗死大鼠脑组织中Glu含量的影响

见表1可知，脑梗塞6h，模型组大鼠脑组织Glu含量开始显著增加，12h有所下降，但仍有显著性差异(P ＜0.01)，24h、48h无统计学意义(P ＞0.05);各治疗组与同时间点模型组相比，脑梗塞6h、12h时大鼠脑组织中Glu含量均有不同程度降低，有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05)，以高剂量组降低最明显;24h、48h各治疗组脑组织Glu含量有所增加，但除48h对照组、高剂量组外，均无统计学意义;高、低剂量组与同点对照组比较，各高剂量组(除48h)有统计学意义(P＜0.01或P＜0.05);各治疗组与同点假手术组比较，6h、12h(除高剂量组)各组均有显著性差异(P＜0.01)。

2．2 心脑通络液对脑梗死大鼠脑组织中Asp含量的影响 见表2。

表1 各组大鼠的脑组织中Glu的含量(±s)

表1 各组大鼠的脑组织中Glu的含量(±s)

注:各组相比:假手术组、各治疗组与同时间点模型组相比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治疗组与同时间点假手术组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低剂量组与同时间点的对照组相比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别Glu(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手术组 8 257．78±29．13▲▲ 261．52±36．63▲▲n 277．00 ±26．69 272．82 ±31．19模型组 8 464．01 ±36．83 384．88 ±31．76 268．59 ±30．02 250．64 ±36．42对照组 8 375．56±31．42▲▲※※ 336．45 ±36．31▲※※ 289．15±27．14 296．87 ±36．14▲▲低剂量组 8 370．30±29．50▲▲※※ 313．18 ±46．65▲▲※※ 281．43±26．06 278．73 ±29．87高剂量组 8 327．97±32．25▲▲※※＊＊ 296．95 ±28．11▲▲＊ 255．63±28．42* 286．66 ±29．76▲

表2 各组大鼠的脑组织中Asp的含量(±s)

表2 各组大鼠的脑组织中Asp的含量(±s)

注:各组相比:假手术组、各治疗组与同时间点模型组相比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01;治疗组与同时间点假手术组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01;高、低剂量组与同时间点的对照组相比较，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别Asp(μmol/g·prot)6h12h24h48h假手术组 8 307．73±27．57▲▲ 315．30 ±33．35▲▲ 313．58 ±26．23▲▲ 318．11±23．79 n▲▲模型组 8 525．61 ±22．81 542．03 ±33．72 558．71 ±28．65 570．08 ±27．15对照组 8 461．25±34．96▲▲※※ 478．33 ±33．47▲▲※※ 491．22 ±29．77▲▲※※ 500．76±22．99▲▲※※低剂量组 8 469．09±26．59▲▲※※ 482．81±37．54▲▲※※ 494．32±33．13▲▲※※ 505．12±25．00▲▲※※高剂量组 8 436．99±37．69▲▲※※ 447．37 ±29．04▲▲※※ 456．09 ±26．90▲▲※※ 465．40±22．12▲▲※※＊

在脑梗塞6h时，模型组大鼠脑组织中Asp含量开始增加，脑梗死后48h时Asp含量达到顶峰(P＜0.01);给药后各治疗组与同时间点模型组相比，大鼠脑组织中的Asp含量有不同程度地下降，且有显著性差异(P＜0.01)，尤其以高剂量组下降最为明显;高、低剂量组(除48h高剂量组外)与同时间点对照组相比均无显著性差异(P＞0.05);各治疗组与同时间点假手术组比较，有显著性差异(P＜0.01)。

3 讨论

现代医学有研究表明，兴奋性氨基酸递质的兴奋毒性参与了缺血发作及其再灌流损伤的病理过程，脑缺血发作初期Glu、Asp含量第一次升高可造成缺血灶周围半暗区的细胞膜去极化，Ca2+内流增加，造成脑组织损伤;起病后5h～5天时，损伤的周围组织进一步释放Glu、Asp，导致Glu、Asp含量的第二次升高，这种可扩播的神经兴奋毒性导致半暗区的扩大，引起梗塞灶体积增加［4］。本实验结果表明，心脑通络液可有效降低脑缺血发作时和缺血后再灌注时Glu和Asp的浓度，抑制兴奋性氨基酸递质的兴奋毒性，从而控制脑梗塞病情的进一步恶化，对脑梗塞的恢复起到积极有效地治疗作用。

心脑通络液是李延教授根据中医理论，在汲取历代著名医家经验的基础上，根据多年临床经验，在补阳还五汤基础上加水蛭、太子参和菟丝子等药组成。方中重用黄芪为君，大补脾胃之元气，令气旺血行，瘀去络通［5］。太子参、菟丝子、当归、水蛭四药共为臣药。其中太子参性甘平，味微苦，补气健脾，生津润肺;菟丝子性甘平，味辛，补肾益精，养肝明目。两药合用可助黄芪补虚固本，补而不燥。当归尾活血通络不伤血、水蛭破血消癥不留瘀，两药合用使补而不滞。川芎活血祛瘀，兼有行气作用，赤芍清热凉血，散瘀止痛，红花活血通经，祛瘀止痛，桃仁可活血祛瘀。赤芍、川芎、桃仁、红花四药合用助当归尾、水蛭活血祛瘀，在本方为佐药;地龙通经活络，力专善走，周行全身，以行药力，亦为佐药。本方重用补气药与少量活血药相配，气旺则血行以固本，化瘀通络以治标，使补气不壅滞，活血而不伤正，标本兼治，共奏益气活血之功效。

［1］ 许绍芬．神经生物学［M］．上海:上海医科大学出版社，1998:154－155．

［2］ 吴限，陈鹏，陈曦．心脑通络液对脑梗死大鼠脑组织IL－8、IGF－1含量的影响［J］．中医药信息，2010，27(6):49－52

［3］ Zea－Longa E，Weinstein PR，Carlson，et al．Reversible middle artery occlusion without craniectomy in rats［J］．Stroke，1989，20(1):84－91．

［4］ 王哲，刘丽波，刘畅，等．脑梗塞患者血及脑脊液中兴奋性氨基酸递质的改变及意义［J］．中国实验诊断学，2002，6(6):369－371．

［5］ 李岩，李丹，李书霖．心脑通络液预处理联合针刺后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死范围的影响［J］．中医药学报，2011，39(5):36－39．