COX-2及Ki67在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及临床意义

吴 骥， 管小青， 顾书成， 郑向欣， 侍孝红， 江小玲， 袁 牧， 张旭旭

环氧化酶为细胞内调节前列腺素合成的限速酶，环氧化酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)是环氧化酶的一个亚型。研究表明，COX-2在恶性肿瘤的发病机制中起着非常重要的作用：如COX-2能通过促进肿瘤新生血管形成和肿瘤细胞增殖而影响肿瘤患者预后[1]。Ki67是一种存在于增殖细胞中的核抗原，与细胞的有丝分裂有关，其表达能反映肿瘤的增殖活性，研究表明Ki67在多种恶性肿瘤中高表达，并与恶性肿瘤的发生、发展有关[2]。浸润性导管癌 (invasive ductal carcinoma, IDC)是乳腺癌最常见的病理类型且预后较差，在乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki67表达的相关性临床上少见报道。因此，我们采用免疫组化方法检测乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki67的表达，并分析两者之间的相关性及其与临床病理特征之间的关系。

1 资料和方法

1.1 临床资料 随机抽取2003年1月至2012年1月南京鼓楼医院集团宿迁市人民医院甲乳外科接受乳腺癌改良根治术的患者82例(术前均未经放疗、化疗及内分泌治疗)病例资料，均为女性。发病年龄34～66岁，平均年龄(48.67±7.34)岁；绝经前患者48例，绝经后患者34例；病理类型均为浸润性导管癌。依据美国癌症联合会(AJCC)修订乳腺癌分期(第七版)的标准进行TNM分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期47例，Ⅲ期25例；肿块最大直径≤2 cm者23例，>2 cm者59例；伴有腋窝淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者34例；组织学分级：Ⅰ级18例，Ⅱ级43例，Ⅲ级21例；伴脉管侵犯者27例，无脉管侵犯者55例；相应的癌旁正常乳腺组织为对照组。所有病理诊断均经两位病理科副高职称以上专家阅片复核证实。

1.2 方法 手术切除新鲜组织标本，均用10%福尔马林中性缓冲液固定、石蜡包埋，4 μm连续切片后供常规HE染色及免疫组化染色。采用常规S-P法进行免疫组织化学染色，鼠抗人COX-2单克隆抗体、鼠抗人Ki67单克隆抗体、SP试剂盒及DAB底物显色剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，COX-2和Ki67的抗体工作浓度均为1∶100，实验步骤按试剂盒说明书进行。用PBS代替一抗作染色的阴性对照，用已知的COX-2 染色阳性的结肠癌组织作阳性对照。

1.3 判定标准 取任意5个高倍镜视野中阳性细胞所占的细胞总数比例的平均值为阳性细胞百分比，阳性细胞>5%定义为阳性，≤5% 为阴性。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析法，以P<0.05 认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 COX-2和Ki67在乳腺浸润性导管癌组织和癌旁正常组织中的表达 COX-2表达产物主要位于细胞浆，胞浆出现棕黄色或黄褐色均匀颗粒为阳性细胞；Ki67阳性细胞为核着色，少数为较弱的细胞质染色，呈棕黄色或黄褐色线性分布(见图1、2)。82例乳腺浸润性导管癌组织中COX-2的阳性率为71.95%(59/82)，而在癌旁正常组织中其表达率为8.54%(7/82)，两者比较差异有统计学意义(χ2=68.56,P<0.001)；在乳腺浸润性导管癌组织和癌旁正常组织中，Ki67的阳性表达率分别为64.63%(53/82)及13.42%(11/82)，两者比较差异有统计学意义(χ2=45.20,P<0.001)。

图1 COX-2阳性表达(SP, ×100)

图2 Ki67阳性表达(SP, ×100)

2.2 COX-2和Ki67的表达与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系 COX-2 和Ki67的表达与肿瘤临床TNM分期(r=0.349，P<0.05；r=0.305，P<0.05)；淋巴结转移(r=0.336，P<0.05；r=0.419，P<0.01)；脉管侵犯(r=0.235，P<0.05；r=0.461，P<0.01)及组织学分级(r=0.434，P<0.01；r=0.378，P<0.05)呈正相关；Ki67的表达与肿瘤大小呈正相关(r=0.356，P<0.01)；两者的表达皆与患者是否绝经无关，具体数据见表1。

表1 COX-2和Ki67的表达与IDC临床病理特征的关系

2.3 乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki67表达的相关性 在82例乳腺浸润性导管癌组织中COX-2阳性表达而Ki67阴性表达者13例，占15.84%；COX-2阴性表达而Ki67阳性表达者7例，占8.54%；两者共同表达者46例，占56.10%；两者表达均阴性者16例，占19.51%；经统计学分析在浸润性导管癌组织中COX-2和Ki67表达呈正相关性(r=0.475，P<0.05)。

3 讨论

近年来，大量研究发现COX-2的高表达与乳腺癌的发生发展密切相关[3]。COX-2通过介导前列腺素(尤其是PGE2)刺激肿瘤细胞的增殖，PGE2在表皮生长因子的作用下刺激乳腺细胞增长，其作为上皮细胞分裂素通过增加雌激素水平直接刺激细胞增殖，芳香酶复合体与乳腺癌组织局部产生雌激素有关，COX-2催化的PGE2可通过上调芳香化酶活性，导致雌激素合成增加，从而使肿瘤细胞增殖。COX-2可通过抑制肿瘤细胞凋亡，促进肿瘤新生血管生成及肿瘤细胞的侵袭和转移等途径调节肿瘤的发生发展，COX-2在肿瘤的发生发展过程中发挥重要的作用，从早期的增生到转移的发生，COX-2 的高表达贯穿于肿瘤发生发展的整个过程。有研究发现在乳腺癌组织中46.8%的癌组织存在COX-2过表达，且COX-2阳性表达预示患者较短的生存时间，与患者预后密切相关[4]。又有研究表明，COX-2的过度表达与肿瘤新生血管的形成密切相关，COX-2可诱导乳腺癌细胞合成血管内皮生长因子C(VEGF-C)，COX-2抑制剂对COX-2介导的VEGF-C合成具有明显抑制作用[5]。Stasinopoulos等[6]研究发现COX-2基因沉默将会导致低分化的乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞生长缓慢，并抑制癌细胞的转移。这都进一步提示COX-2将成为乳腺癌治疗和预防的靶点。本研究结果发现在浸润性导管癌组织中COX-2的阳性表达率为71.95%，明显高于癌旁正常组织8.54%(P<0.001)，这一结果与文献报道相似。COX-2的阳性表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移、脉管侵犯及组织学分级呈正相关，而与肿瘤大小及患者绝经与否无关，这提示COX-2高表达与乳腺浸润性导管癌的发生、发展密切相关。

Ki67是一种能识别存在于增殖细胞核基质内的核蛋白，能够有效评估肿瘤细胞增殖活性的重要标记物。Ki67蛋白表达可反映肿瘤细胞增殖活性，是目前公认的肿瘤细胞增殖的特异性指标。Ki67蛋白与恶性肿瘤的发展、转移和预后高度相关，而肿瘤的高增殖又与肿瘤的浸润生长和转移有关，因此Ki67的高表达与肿瘤患者的不良预后相关。Stuart-Harris等[7]经过Meta分析，表明Ki67高表达的乳腺癌患者的中位生存期与总生存期均明显差于Ki67表达正常的患者。近年的研究还发现Ki67在三阴性乳腺癌中的表达显著增高，且Ki67的表达水平与一种凋亡抑制蛋白XIAP的表达呈正相关，提示Ki67的表达与细胞的凋亡密切相关[8]。笔者曾研究发现Ki67在复发转移性乳腺癌组织中表达较其在原发性乳腺癌组织中的表达增高，提示该类患者预后不良[9]。本研究中Ki67在乳腺浸润性导管癌组织中的阳性表达率为64.63%，癌旁正常组织中的表达率为13.42%。同时，Ki67阳性表达与脉管侵犯、组织学分级、肿瘤大小呈正相关，进一步表明Ki67是反映乳腺癌生物学行为的可靠指标，可以作为判断肿瘤细胞增殖状态及评价乳腺癌预后的生物学指标。有关Ki67表达与腋淋巴结转移的关系是目前研究的热点之一，本研究结果显示Ki67表达与患者腋淋巴结转移状态显著相关，此结果与谢春华等[2]的研究结果不一致，尚有待于大样本的进一步研究。

综上所述，乳腺浸润性导管癌组织中COX-2和Ki67的表达呈显著正相关，并与乳腺浸润性导管癌临床病理特征关系密切，提示两者在乳腺浸润性导管癌发生发展中发挥着重要作用。对两者进行联合检测，可作为反映其生物学行为的指标；选择性COX-2抑制剂的开发有望为肿瘤预防及治疗开辟新的途径。

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