RRM1在宫颈癌中的表达及意义

刘爱华

RRM1在宫颈癌中的表达及意义

刘爱华

目的 探讨RRM1在宫颈癌组织中的表达水平与宫颈癌发生、发展的关系。方法 用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测35例宫颈癌组织、28例宫颈上皮内瘤变组织(CIN)和10例正常宫颈组织中RRM1 mRNA表达情况。结果 宫颈癌组织中RRM1 mRNA的表达显著高于正常宫颈和CIN组织(P＜0.05)。宫颈癌组织中RRM1的表达水平与分化程度相关, 随着宫颈癌组织分化程度的降低RRM1的表达增强(P＜0.01)差异均具有统计学意义。结论 RRM1在宫颈癌的发生发展中起重要作用,有望成为宫颈癌新的早期诊断指标。

宫颈癌；宫颈上皮内瘤变；RRM1

在女性的恶性肿瘤中, 宫颈癌为女性生殖道肿瘤的首位。目前认为, 肿瘤的发生与DNA修复基因的修复能力下降密切相关。RRM1基因属于新近发现的DNA修复基因, 它为DNA修复提供必须的前体。因此研究RRM1的表达水平与宫颈癌的发生、预后的关系有重要的临床意义。作者收集宫颈癌患者手术切除的标本, 同时收集正常宫颈组织及不典型增生组织(CIN)作为对照, 通过RT-PCR方法在mRNA水平上了解RRM1在宫颈癌组织中的表达情况, 探讨其与宫颈癌发生发展的关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 RT-PCR标本：35例新鲜宫颈癌组织标本取自青岛大学医学院附属医院妇科2009年1月至2010年7月因宫颈癌行手术治疗的患者, 临床分期按国际妇产科联盟(FIGO)2000 年修订的标准, I期15例, II期12例, III期8例。宫颈癌病理分级按WHO的分级标准, 高分化11例, 中分化11例, 低分化13例。另取宫颈上皮内瘤样病变(CIN)标本28例(其中CIN I 5例, CIN II 11例, CIN III 12例), 因子宫肌瘤行宫颈切除手术患者的正常宫颈组织10例, 新鲜标本冻存于-80℃超低温冰箱备用。

1.2 主要试剂 Trizol为Gibico公司产品, 反转录试剂盒为Fermentas公司产品。引物序列：RRM1(265bp)：上游引物(5’-TGT GGA GAT GGC TGT GAC-3’), 下游引物(5’- CAG GAT CCA CAC ATC AGA CA -3’)； β-actin(229 bp)：上游引物(5’-GGA CTT CGA GCA AGA GAT GG-3’), 下游引物(5’-TGT GTT GGC GTA CAG GTC TTT G-3’)。 引物由北京赛百盛基因技术有限公司合成。

1.3 实验方法 RNA提取和RT-PCR：取新鲜宫颈鳞癌组织80～100 mg 于液氮中速冻、玻璃匀浆器彻底匀浆, 按Trizol试剂盒说明书裂解抽提总RNA、异丙醇沉淀、DEPC水溶解、逆转录合成cDNA。PCR反应条件为：预变性94℃ 5 min；扩增反应变性94℃, 30 s, 退火温度RRM1为55℃, β-actin为58℃, 45 s, 延伸72℃, 45 s, 共30个循环；最后延伸72℃, 5 min。取5 μl PCR扩增产物于含5 mg/l溴化乙啶(EB)的1.8%琼脂糖凝胶电泳, 凝胶图形分析仪计算平均荧光强度, 以β-actin作内参照, 计算相对值。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0分析软件包对数据进行处理。采用方差分析、Kruskal-Wallis H检验、χ2检验及Fisher精确检验法进行分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RRM1 mRNA在正常宫颈上皮、CIN和宫颈癌组织中的表达 宫颈癌组织中RRM1 mRNA的表达水平(0.65±0.37)明显高于正常宫颈组织(0.28±0.13)和CIN组织(0.47±0.21)； CIN组织中mRNA表达水平也高于正常宫颈组织；差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 RRM1 mRNA表达与CIN分级的关系 RRM1 mRNA在CIN I级组织中仅有弱阳性表达(2/10, 20.0%), 在CIN II级和CIN III级组织中既有弱阳性表达也有阳性表达, RRM1 mRNA的阳性表达率分别为41.7%(5/12, CIN II级)和71.4%(10/14, CIN III级)。随着CIN组织分级的增加, RRM1 mRNA的表达强度也增加；不同分级的CIN组织中RRM1 mRNA表达的差异具有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

近年来, 人们发现DNA修复和复制的缺陷是细胞发生癌变的重要机制［1］。如果核苷酸损伤未得到及时、有效的修复可引起基因不稳定性的增加, 进而引起肿瘤的发生, 故可以推断DNA损伤修复能力与癌症发生之间存在一定的关系。RRM1是最近被广泛关注的一个基因, 作为核糖核苷酸还原酶的其中一个亚单位, 在DNA修复、细胞的增殖、恶性肿瘤的进展、转移等众多细胞活动中扮演着重要角色［2］。

本研究采用RT-PCR方法检测RRM1在宫颈癌中的表达, 结果显示, RRM1 mRNA在正常宫颈上皮、CIN 组织中和宫颈癌中的表达程度呈进行性的增加, 表明宫颈癌组织中存在基因损伤使DNA修复基因的表达增加, 这一结果符合癌变模型假设, 认为癌是由于进行性基因损伤在上皮细胞内积聚的结果。因此, 本研究提示RRM1表达的增多与宫颈癌的发生有关。RRM1在CIN组织中的表达与CIN的分级有关, CIN组织分级越高, RRM1的表达越多, 说明RRM1参与了宫颈癌的早期发展过程, 提示其有可能成为较好的宫颈癌早期诊断的分子标记物。

［1］ Burton TR, Kashour T, Wright JA, et al.Cellular signaling pathways affect the function of ribonucleotide reductase mRNA binding proteins: mRNA stabilization, drug resistance, and malignancy (Review) .Int J Oncol, 2003, 22(1):21-31.

［2］ Jordan A, Reichard P.Ribonucleotide reductases .Annu Rev Biochem.1998(67):71-98.

265600 山东省蓬莱市人民医院妇产科