美兰染色法诊断糠秕孢子菌性毛囊炎的室内质量控制

吴绍男，李轶春，吴绪星（.广西壮族自治区合浦县皮肤性病防治院检验科 5600；.广西壮族自治区北海市中医院检验科 56000；.广西壮族自治区合浦县红十字医院检验科 5600）

快速诊断糠秕孢子菌性毛囊炎的实验室传统检查方法是滴加10%氢氧化钾处理标本，然后通过显微镜查找糠秕孢子菌；其他方法还有复方刚果红染色法、派克墨水染色法、龙胆紫染色法［1］、美兰染色法［2－3］等，经过染色后，使用显微镜查找糠秕孢子菌。美兰染色法是快速诊断糠秕孢子菌性毛囊炎的理想方法。其检验的质量保证对于持续提高实验室糠秕孢子菌检验的工作效率和可信度非常重要。本研究采用美兰染色法与培养法对256例疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者进行检测，分析影响美兰染色法诊断糠秕孢子菌性毛囊炎的因素。

1 材料与方法

1.1 标本来源采集自2011年1月至2012年3月来本院就诊的疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者256例。需检查的部位在检查前1周不使用任何抗真菌药物。

1.2 试剂0.6%碱性美兰溶液；培养基按廖万清等主编《真菌病》的橄榄油培养基配方配制。

1.3 方法每例患者用75%乙醇消毒皮肤表面，用取材刀刮挤丘疹毛囊内容物。纳入试验的每例患者取2个标本。将每例患者的其中一个标本接种于培养基中，37℃培养1周后鉴定结果；另一个标本涂于一张玻片上，待涂膜干燥后，用火焰固定，滴加0.6%碱性美兰液1滴，染色1min，然后冲水，凉干后用油镜观察，记录结果。

2 结果

256例疑似糠秕孢子菌性毛囊炎患者中，培养阳性210例，经临床诊断及治疗跟踪确诊为糠秕孢子菌性毛囊炎患者为210例。美兰染色法阳性为201例，其中5例阳性结果与培养结果不符，为假阳性，是污染所致，污染率为1.2%（5／256）；有14例阴性结果与培养结果不符，为假阴性，漏检率为5.55%（14／256）。

3 讨论

经回顾性分析，导致2例假阳性原因是滴加香柏油时，加油棒曾接触过阳性标本的涂膜，造成污染；另外导致3例假阳性的原因是镜头接触阳性的涂片镜检完毕后，未用擦镜纸仔细擦拭油镜头，除去镜头上可能黏附的孢子菌，将孢子菌传递给下一张涂片，造成假阳性。造成假阴性的因素比较多，主要有标本质量、人员素质等因素。根据ISO15189的内涵，通常将过程控制分为分析前质量管理、分析中质量管理、分析后质量管理［3－4］。下面从分析前、中、后谈谈对美兰染色法诊断糠秕孢子菌性毛囊炎的室内质量控制的注意要点。

分析前质量控制受到多种因素影响，也是最难控制的环节。分析前质量控制已经成为保证准确检验结果的重要核心部分［5］。目前基层医院检验科工作人员学历低，缺乏检验专业理论知识，存在人才缺乏和业务素质普遍偏低的现象，特别是细胞学、形态学、微生物学等方面的知识缺乏比较突出［6］。重视检验人员的科学技术素质；加强专业学习，不断更新专业理论知识，同时重点进行糠秕孢子菌检查操作技术的基础教育及实际操作训练有利于提高检查结果的质量。实验室必须建立标准操作程序（SOP）文件，操作要严格按照操作规程操作。实验室每次制备一批新的染色液时以及每周需使用未经染色的已知阳性和阴性的涂片进行染色镜检，并记录结果，以保证染色液的质量。载玻片不清洁、含有油脂，或载玻片有划痕等在检查时都会有误差，所以一般要求用新的载玻片。新的载玻片应先用热肥皂水洗刷，再用1%～2%浓度的盐酸浸泡24h，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗3次，干燥备用。用前再用干净纱布将载玻片擦拭几次，用铅笔在磨砂面载玻片的磨砂面上注明试验的序号及标本的序号，若使用无磨砂面的载玻片，则使用玻璃刻刀在载玻片一端的1／3处进行标注，不能用记号笔或胶布，确保载玻片清洁无油脂、无划痕。

患者需检查的部位在检查前1周不使用任何抗真菌药物，否则可能出现假阴性。选取典型皮疹取材，严格编号或标识。将采集到的丘疹毛囊内容物，在载玻片正面右侧2／3的中央处均匀涂抹面积为5mm×7mm 的卵圆形涂膜。把涂膜已干燥的载玻片放置在报纸上，如果透过涂膜不能分辨报纸上的5号字，则表明该玻片涂抹过厚，会影响镜检结果。固定温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能造成细菌碳化，导致假性。涂片制好后应及时染色，滴加美兰染液盖满整张涂膜，染色期间始终保持涂膜被染色液完全覆盖，染色太久会导致蓝色背景太深，容易遮盖细菌。

检验人员要保证显微镜经常处于良好的工作状态。要使用光学性能好及机械部分灵活的显微镜，使用分辨率高尤其是油系物镜的分辨率高的显微镜，并且要有良好的光源。严禁油镜头直接接触涂片上的涂膜。按照结果报告的标准仔细观察足够的视野数。登记前反复核对检验单、涂片上的标注。检验报告单是标本检测的最终结果，也是提供给临床诊断的依据。也是分析后质量控制工作的必备环节［7］。检验后的每一张涂片结果应按规定准确记录在实验室登记本上。审核结果、签名，及时发出报告，以便尽早为临床提供诊断依据。

糠秕孢子菌性毛囊炎是由圆形或卵圆形糠秕孢子菌引起的皮肤真菌病，好发于中青年，其外观酷似寻常型痤疮、细菌性毛囊炎，毛囊虫样毛囊炎、脂溢性皮炎等皮肤病，临床上极易造成误诊。加深对糠秕孢子菌性毛囊炎发病原因、临床特点、皮疹特征的认识，加上相应的实验室检查，是防止糠秕孢子菌性毛囊炎误诊误治的必要条件［8］。所有质量控制的最终目的是实验室发出的检验报告准确、可靠，对临床诊断、治疗有参考价值［9］。只有做好室内质量控制，防止污染和漏检，保证试验结果的准确性，才能防止糠秕孢子菌性毛囊炎误诊误治，体现实验室存在的价值。

［1］徐明，张弘，邓劲松，等.马拉色菌显微镜检查的方法学比较［J］.福建医药杂志，2011，33（1）：70－72.

［2］钟白玉，刁庆春，黄秀英.方法介绍：美兰染色法在马拉色菌毛囊炎诊断中的应用［J］.岭南皮肤性病科杂志，2002，9（2）：154，160.

［3］熊琳，代亚玲.美兰染色法在马拉色菌检测中的应用［J］.四川大学学报：医学版，2004，35（2）：277－279.

［4］丛玉隆.检验医学高级教程［M］.北京：人民军医出版社，2010：1012－1017.

［5］董大光.浅谈医学检验分析前质量控制［J］.中华全科医学，2012，10（7）：1143－1144.

［6］曾再祥.质量控制与医院检验科管理［J］.中外医疗，2012，31（11）：145.

［7］吴静一.做好血液流变学检验质量控制的探讨［J］.中国社区医师：医学专业，2012，14（17）：275.

［8］王洁，胡利发，杜华，等.糠秕孢子菌毛囊炎37例误诊分析［J］.西北国防医学杂志，2006，27（3）：226－227.

［9］赵惠，刘勋.临床微生物学室内质量控制的管理［J］.检验医学与临床，2011，8（6）：757－758.