高尔基体糖蛋白73、α-L-岩藻糖苷酶、甲胎蛋白单项检测与联合检测对原发性肝癌的诊断价值研究

肖 蕾，毛 睿，杨 颖，张瑞丽，忙尼沙·阿不都拉，包永星

原发性肝癌是一种常见的恶性肿瘤，在全球恶性肿瘤致死原因中位居第三位[1]，患者预后极差且近10年来其死亡率呈上升趋势，是我国肿瘤防治工作的重点，早期诊断对于提高原发性肝癌患者临床疗效及改善患者预后有重要意义。目前，使用最广泛的诊断原发性肝癌的血清学指标是甲胎蛋白(AFP)，但约有30%的原发性肝癌患者血清AFP阴性或低度阳性，并不能满足早期诊断的需求。因此，寻找新的原发性肝癌标志物或多项肿瘤标志物联合检测成为原发性肝癌早期诊断和治疗的研究热点。高尔基体糖蛋白73(GP73)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)是值得期待的血清肿瘤标志物，本研究旨在探讨GP73、AFU、AFP单项检测与联合检测对原发性肝癌的诊断价值。

1　资料与方法

1.1一般资料选择2011年5—9月初次就诊于我院的原发性肝癌患者80例为肝癌组，肝硬化患者65例为肝硬化组，慢性病毒性肝炎患者54例为肝炎组，同期健康体检正常者50例为对照组。肝癌组中男52例，女28例；年龄37～78岁，平均59岁。肝硬化组中男42例，女23例；年龄33～77岁，平均59岁。肝炎组中男34例，女20例；年龄33～61岁，平均58岁。对照组中男26例，女24例；年龄43～69岁，平均58岁。4组受检者的性别构成、年龄具有均衡性；留取血标本前均签署知情同意书。

1.2诊断标准慢性病毒性肝炎的诊断参照2000年中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中的诊断标准[2]；肝硬化的诊断参照2005年中华医学会肝病学分会、中华医学会感染病学分会联合修订的《慢性乙型肝炎防治指南》中的诊断标准；原发性肝癌的诊断参照中国抗癌协会肝癌专业委员会2001年制订的《原发性肝癌的临床诊断与分期标准》[3]。

1.3检测方法所有受检者抽取清晨空腹静脉血2 ml，室温放置1 h后500×g分离血清，于-20 ℃冰箱保存。GP73的测定采用酶联免疫定量法，试剂盒由北京热景生物技术有限公司提供，严格按照说明书进行操作，以血清GP73水平>150.0 μg/L为阳性；AFU的测定采用免疫比浊法，由我院临床检测中心完成，以血清AFU水平>37.2 μg/L为阳性；AFP的测定采用电化学发光法，由我院检验科完成，以血清AFP>13.4 μg/L为阳性。

1.4统计学方法应用SPSS 17.0软件进行统计学分析，进行正态性检验，血清GP73、AFP和AFU呈偏态分布，采用〔M(QR)〕表示，多组间比较采用Kruskal-WallisH检验，两组间比较采用Mann-WhitneyU检验，检验水准采用Bonferroni进行校正。绘制受试者工作特征(ROC)曲线以确定最佳临界值，计算ROC曲线下面积(AUG)，采用Z检验比较AUG，配对χ2检验比较敏感度和特异度。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1检测结果4组受检者血清GP73、AFU、AFP水平比较，差异均有统计学意义(P<0.001)；且肝癌组血清GP73水平与肝硬化组(U=1 796.0)、肝炎组(U=826.5)、对照组(U=154.0)比较，差异均有统计学意义(P<0.01)；肝癌组血清AFU水平与肝硬化组(U=1 463.0)、肝炎组(U=718.0)、对照组(U=402.5)比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；肝癌组血清AFP水平与肝硬化组(U=1 187.5)、肝炎组(U=1 145.5)、对照组(U=217.5)比较，差异均有统计学意义(P<0.01)。

2.2单项检测通过绘制ROC曲线发现，血清GP73诊断原发性肝癌的最佳临界值为150.0 μg/L，血清AFU为37.2 μg/L，血清AFP为13.4 μg/L(见图1)。GP73诊断原发性肝癌的灵敏度(χ2=4.65)、特异度(χ2=28.91)与AFP比较，差异均有统计学(P<0.05)；AFU诊断原发性肝癌的灵敏度与AFP比较，差异无统计学意义(χ2=0.89，P>0.05)，特异度比较，差异有统计学意义(χ2=8.40，P<0.05)；GP73、AFU诊断原发性肝癌的AUC与AFP比较，差异均无统计学意义(P>0.05，见表2)。GP73、AFU和AFP单项检测诊断原发性肝癌的准确性分别为69.5%、76.3%、81.5%。

表1　各组受检者观察指标检测结果比较〔M(QR)，μg/L〕

注：GP73=高尔基体糖蛋白73，AFU=α-L-岩藻糖苷酶，AFP=甲胎蛋白

表2GP73、AFU、AFP单项检测对原发性肝癌的诊断价值比较

Table2Comparison of diagnostic value of GP73，AFU and AFP in single form detecting PHC

观察指标灵敏度(%)特异度(%)AUC(95%CI)Z值P值GP7382 563 30 804(0 746，0 862)0 017>0 05AFU73 877 50 798(0 739，0 858)0 002>0 05AFP66 388 70 797(0 731，0 862)--

注：AUC=受试者工作特征曲线下面积；“-”表示以AFP为参照

2.3联合检测GP73+AFP诊断原发性肝癌的准确性为68.7%，GP73+AFU为84.7%，AFP+AFU为80.3%，GP73+AFP+AFU为65.5%，以上指标联合检测与AFP单项检测诊断原发性肝癌的AUC比较，差异均无统计学意义(P>0.05，见表3)。

图1　GP73、AFU、AFP单项检测诊断原发性肝癌的ROC曲线

Figure1ROC curve of GP73，AFU and AFP in single form detecting PHC

表3GP73、AFU和AFP联合检测对原发性肝癌的诊断价值比较

Table3Comparison of diagnostic value of GP73，AFU and AFP in combining form detecting PHC

观察指标灵敏度(%)特异度(%)AUC(95%CI)Z值P值GP73+AFP90 058 60 880(0 836，0 925)0 220>0 05GP73+AFU92 581 00 812(0 756，0 868)0 036>0 05AFP+AFU87 576 90 840(0 785，0 895)0 105>0 05GP73+AFP+AFU96 350 90 885(0 842，0 929)0 237>0 05AFP66 388 70 797(0 731，0 862)--

注：“-”表示以AFP为参照

3　讨论

在全球范围内，我国是原发性肝癌发病率及死亡率最高的国家，每年约有11万人死于原发性肝癌，占全世界原发性肝癌死亡人数的45%。AFP诊断原发性肝癌的敏感度为40%～65%，为提高原发性肝癌早期诊断率，满足临床需求和节约医疗资源，寻找其他敏感度较高的肿瘤标志物及多项肿瘤标志物联合检测成为近年研究的热点。

GP73是一种高尔基体跨膜蛋白，2000年由Kladney等[4]首先描述，其在正常人体中主要由胆管上皮细胞中表达，而肝细胞中表达很少甚至不表达，后续的研究者提出肝病患者血清GP73水平明显升高[5]，进一步研究证实 GP73 可以作为诊断原发性肝癌的可靠标志物[5-8]。AFU 是一种溶酶体酸性水解酶，对原发性肝癌亦有一定的诊断价值[9]。

本研究结果显示，肝癌组血清 GP73、AFP、AFU 水平均高于肝硬化组、肝炎组和对照组，与文献报道一致[6-8]。通过绘制ROC曲线发现，GP73和AFU单项检测诊断原发性肝癌的AUC大于AFP，但无显著性差异，提示GP73、AFU与AFP对原发性肝癌的诊断效能相似。进一步计算各指标单项检测的诊断准确性发现，AFP为81.5%，AFU为76.3%，GP73为69.5%，与Ozkan等[10]研究结果相似，AFP单项检测诊断原发性肝癌的准确性最高。

通过比较各指标的敏感度和特异度发现，GP73单项检测诊断原发性肝癌的敏感度高于AFP，但AFP的特异度高于GP73和AFU，与贾保昌等[11]研究报道一致，提示在原发性肝癌的诊断中，GP73具有较好的敏感度，而AFP具有较好的特异度。因此，有必要进行联合检测以提高原发性肝癌早期诊断率。本研究结果显示，GP73+AFP诊断原发性肝癌的准确性为68.7%，GP73+AFU为84.7%，AFP+AFU为80.3%，GP73+AFP+AFU为65.5%，但以上指标联合检测与AFP单项检测诊断原发性肝癌的AUC比较，均无明显差异。2项指标联合检测中，GP73+AFU诊断原发性肝癌的敏感度为92.5%，3项指标联合检测时，其敏感度升高至96.3%，提示GP73、AFU和AFP联合检测可提高诊断原发性肝癌的敏感度，有利于减少漏诊。但本研究样本量较小，纳入的原发性肝癌患者病情不一，由于条件限制不能进行准确的筛选，有待在今后的研究中进一步扩大样本量并严格控制研究对象纳入标准，以更好地反映出GP73、AFU、AFP单项检测与联合检测对原发性肝癌的诊断价值。

综上所述，GP73对诊断原发性肝癌具有较好的敏感度，而AFP具有较好的特异度；GP73、AFU和AFP联合检测有利于提高原发性肝癌诊断率，减少漏诊，值得临床参考借鉴。

1何建伟，曹薇薇，李静，等.甲胎蛋白异质体3及其比值对原发性肝癌和肝硬化的鉴别诊断价值研究[J].中国全科医学，2012，15(8)：2640.

2中华医学会传染病与寄生虫病学分会，肝病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志，2000，8(6)：324-329.

3中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准[J].中华肝脏病杂志，200l，9(6)：324.

4Kladney RD，Bulla GA，Guo L，et al.GP73，a novel Golgi-localized protein upregulated by viral infection [J].Gene，2000，249(1-2)：53-65.

5Kladney RD，Cui X，Bulla GA，et al.Expression of GP73，a resident Golgi membrane protein，in viral and non viral liver disease[J].Hepatology，2002，35(6)：1431-1440.

6Mao Y，Yang H，Xu H，et al.Golgi protein 73(GOLPH2)is a valuable serum marker for hepatocellular carcinoma[J].Gut，2010，59(12)：1687-1693.

7陶立玉.肿瘤标记物联合检测诊断肝癌的临床价值研究[J].实用心脑肺血管病杂志，2012，20(7)：1114.

8许文芳，费迎明，周建康，等.血清GP73、AFP和AFP-L3联合检测在原发性肝癌诊断中的价值[J].中华实验和临床病毒学杂志，2011，25(4)：286-288.

9Bertino G，Ardiri A，Malaguarnera M，et al.Hepatocelluar carcinoma serum markers[J].Semin Oncol，2012，39(4)：410-433.

10Ozkan H，Erdal H，Tutkak H，et al.Diagnostic and prognostic validity of Golgi protein 73 in hepatocellular carcinoma[J].Digestion，2011，83(1-2)：83-88.

11贾保昌，罗小玲，梁嵘，等.联合检测血清GP73和AFP对原发性肝癌诊断价值的探讨[J].中华肿瘤防治杂志，2012，19(11)：832-835.