骨骼风痛片中鸡血藤高效液相特征图谱研究

徐 建，徐 云，王 鑫，王婷婷，徐国强，白 冰

(吉林修正药业新药开发有限公司，长春 130012)

骨骼风痛片为修正药业集团通化通药制药股份有限公司生产,由鸡血藤、穿山甲、干姜3味药制成，具有祛风除湿，活血通络，散寒止痛的功效，用于风湿痹痛等症。鸡血藤为豆科植物密花豆SpatholobussuberectusDunn的干燥藤茎，具有补血、活血、通络之功，用于月经不调，血虚萎黄，麻木瘫痪，风湿痹痛等症[1]，是处方中的君药。

中药特征图谱能全面、综合的反映所含成分的相对关系，较好的体现中药成分的复杂性和相关性，具有特征明显、专属性强、重现性好等特点[2-5]。本研究通过HPLC方法建立方中鸡血藤药材特征图谱，从而确定成品中鸡血藤的特征图谱。由于鸡血藤在骨骼风痛片中是以水提物入药，决定以鸡血藤水提物为基础，研究鸡血藤原药材与成品骨骼风痛片的相关性。

1 实验材料

1.1 仪器 HITACHI高效液相色谱仪，紫外检测器；Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。

1.2 试剂与试药 不同来源的鸡血藤药材，S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10分别产自广西白色、广西宁明、广西柳州、广西凭祥、广西宁明、广西玉林、广西钦州、广东德庆、广东高要、云南等地。药材经长春中医药大学王淑敏教授鉴定；骨骼风痛片(批号:20120901)；乙酸乙酯、环己烷、磷酸、甲醇等为分析纯，乙腈为色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[6]色谱柱GraceSmart RP 18 (5 μm,4.6 mm×250 mm) ；流动相：乙腈-0.1%磷酸(34∶66)；检测波长：280 nm；柱温40 ℃；流速0.8 mL/min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芒柄花素10 mg，用甲醇溶解于50 mL容量瓶中，稀释至刻度，作为储备液。取储备液2 mL至10 mL容量瓶中混匀,甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取鸡血藤药材粗粉10 g，加水100 mL，100 ℃水浴回流提取2 h，趁热过滤，滤液浓缩至20 mL，先用乙酸乙酯萃取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，在水浴锅上80 ℃蒸干，残渣用水洗2次，每次10 mL，合并补足20 mL，再用环己烷萃取3次，每次20 mL，合并环己烷液，在水浴锅上80 ℃蒸干，残渣用甲醇洗涤2次，每次2 mL，定容至5 mL容量瓶中，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

2.4 HPLC-UV特征图谱方法学考查

2.4.1 精密度实验 选择S1号鸡血藤药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法连续进样测量6次，各共有峰的相对保留时间的RSD为0.12%～0.90%。表明仪器精密度良好。

2.4.2 重复性实验 取S1号鸡血藤药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法连续进样测量供试品制备方法制备6分样品,各共有峰的相对保留时间RSD为0.11%～0.72%，表明该方法重现性良好。

2.4.3 稳定性实验 取S1号药材，按照2.3项下制备方法制备供试品,按2.1项下方法在0,2，6，8，12 h分别进样检测，各共有峰的相对保留时间的RSD为0.13%～0.33%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.5 特征图谱的建立与相似度评价[7-11]

2.5.1 特征图谱的建立 按2.3项下的方法制备10批不同产地的鸡血藤药材HPLC特征图谱供试品溶液。按2.1项下方法依次进行检测，获得10批不同产地的鸡血藤药材HPLC特征图谱和共有模式图根据10批供试品溶液的测定结果，标定共有特征峰6个,以3号共有峰(芒柄花素)作为参照峰，计算相对保留时间，见表1。

表1 鸡血藤药材6个共有峰的相对保留时间结果

2.5.2 相似度评价 用国家药典委员会中药色谱特征图谱相似度评价系统(2004A版)软件,对10批样品进行分析，自动生成鸡血藤的对照特征图谱，HPLC-UV特征图谱与对照图谱进行比较，寻找共有峰并进行相似度评价，见表2。

表2 鸡血藤HPLC-UV特征图谱相似度结果

结果:10批鸡血藤药材有相对保留时间RSD为0.34%～2.16%，表明相对保留时间稳定。HPLC-UV特征图谱的相似度均90%以上，可以认定10批鸡血藤药材质量相近。

3 骨骼风痛片中鸡血藤的特征图谱研究

3.1 对照品溶液的制备

3.1.1 鸡血藤药材对照品溶液的制备 取鸡血藤药材10 g,精密称定，粉碎后按2.3项下供试品制备方法制备，即得。

3.1.2 阴性对照品溶液的制备 按照骨骼风痛片的工艺,制备缺少鸡血藤药材的阴性样品。取样品10 g，精密称定，粉碎后按2.3项下供试品制备方法制备，即得。

3.2 供试品溶液的制备 取骨骼风痛片(批号：20120901)10 g，精密称定，粉碎后按2.3项下供试品制备方法制备，即得。

3.3 特征峰的确定 为了确定鸡血藤的相关成分在骨骼风痛片图谱中的体现，本实验将芒柄花素对照品溶液、鸡血藤药材对照品溶液、阴性对照品溶液、骨骼风痛片供试品溶液按特征图谱建立的色谱条件分别进样并比较，确定鸡血藤的特征峰。

取上述4种样品分别注入高效液相色谱仪记录色谱并比较,结果可以看出 2、3、6号共有峰为骨骼风痛片中鸡血藤的特征峰，其中3号峰为芒柄花素。

4 讨论

从相对保留时间来看，该特征图谱建立的方法可用于控制该产品的质量，同时通过考察鸡血藤和骨骼风痛片的相关性，将成品中3个特征峰归属为鸡血藤药材，并通过对照品，确定了其中的1个特征峰为芒柄花素。鸡血藤药材特征图谱的建立及成品中鸡血藤特征峰的确定可以为骨骼风痛片的质量标准的制订提供参考。

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