益母草与鸡血藤及其配伍的抗氧化活性比较

何梦杰，刘莹莹，任瑞华，董玉倩，甘广玉，黄锁义

(1.右江民族医学院临床医学院，广西壮族自治区 百色 533000；2.右江民族医学院医学影像学院，广西壮族自治区 百色 533000；3.右江民族医学院药学院，广西壮族自治区 百色 533000；4.右江民族医学院广西高校右江流域特色民族药研究重点实验室，广西壮族自治区 百色 533000)

益母草是唇形科益母草属植物益母草(LeonurusjaponicusHoutt.)，又名茺蔚、坤草，为唇形科。益母草属植物益母草的全草，夏季开花。其干燥的上部分，其味苦，性微寒，为常用中药，生用或熬膏用[1]。益母草具有抗氧化、抗血小板聚集[2]、促进子宫收缩、活血，化瘀，调经等多种生物学作用。益母草的有效成分已被证明对子宫平滑肌有影响[3]。现代药理研究表明益母草有效成分对实验性脑梗死小鼠血脑屏障的保护作用与其体内的抗氧化活性有关，在世界范围内，疾病负担、伤害及危险因素评估显示，脑梗死是至死的第二大常见原因，致残的第三大常见原因[4]。益母草在此方面具有很大的应用潜能。

鸡血藤为豆科植物密花豆(SpatholobussuberectusDunn)的干燥藤茎。鸡血藤具有活血补血、调经止痛、抗炎、抗氧化、免疫调节、抗病毒、抗肿瘤等多种药理活性。黄酮类化合物是鸡血藤的主要活性成分，具有很强的抗氧化和自由基清除活性[5]。研究表明，鸡血藤能够降低血浆中总胆固醇量、高密度脂蛋白-胆固醇量,还能够升高高密度脂蛋白胆固醇亚组分(HDL2-C/HDL3-C)的量,同时,还可以延缓动脉粥样的硬化[6]。鸡血藤黄酮的强抗氧能力及广泛的药理活性，使它在减轻氧化应激、增强机体免疫力、提高抗病能力方面有着很大的应用潜能[5]。但目前还少有文献对其抗氧化活性进行报道。表明益母草与鸡血藤可能还具有其他药理作用值得我们去开发。为此，本实验探究益母草与鸡血藤提取物及其配伍体外抗氧化活性的比较。

1 材料与试剂

1.1 仪器 紫外可见分光光度计(仪器型号：N4S,上海仪电分析仪器有限公司)；KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FK1204B电子天平(上海天美天平仪器有限公司)。

1.2 材料 益母草、鸡血藤均购自广西百色市药店。

1.3 试剂 95%的乙醇(成都市科隆化学品有限公司)；1，1-二苯基-2-苦基肼自由基(批号：D4313，东京化成工业株式会社)。

2 方法

2.1 DPPH·溶液的制备 精密称取0.04 g DPPH·,用300 mL无水乙醇溶解，移至500 mL 量瓶进行定容,所得DPPH·溶液的浓度为20 mol·L-14 ℃避光保存备用。

2.2 益母草鸡血藤的提取与溶液的配制

2.2.1 醇提取物制备 益母草20 g粉碎成细末,将叶、茎碎粉混合均匀,取8 g样品粉末置入250 mL锥形瓶中，加入80 mL 95%乙醇超声提取45 min,真空抽滤，弃残渣,再用20 mL 95%乙醇溶解后,4 ℃避光保存备用。

2.2.2 水提取物制备 益母草20 g 粉碎成细末,将叶、茎碎粉混合均匀,取8 g 样品粉末置入250 mL锥形瓶中，加入80 mL 蒸馏水超声提取60 min,真空抽滤，弃残渣,再用20 mL蒸馏水溶解后,4 ℃避光保存备用。

2.3 益母草与鸡血藤配伍 取益母草与鸡血藤按1∶1、1∶2、1∶3、1∶4及2∶1、3∶1、4∶1配制，混合溶液的配置操作同益母草。

2.4 DPPH·清除能力的测定 将配制成的益母草、鸡血藤样品溶液按表1加样于试管中混匀，避光反应30 min,取液在517 nm波长处测定吸光度(A)。

表1 加样方法与加样量

清除率计算(P)公式:P=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%。

2.5 提取液对铁离子螯合能力的影响 取样品溶液1.0 mL后依次加入5 mmol·L-1FeCl20.002 mL,再加入5 mmol·L-1菲咯嗪0.2 mL室温下静置10 min,随后加入等体积的蒸馏水，振荡混合均匀后，于562 nm下测量光密度，BHT作为阳性对照。Ao:空白对照的光密度；As:样品液或阳性对照品的光密度。

铁离子螯合率(%)=(Ao-As)/Ao×100%。

3 结果

3.1 提取液对DPPH·清除能力影响 采用醇提的实验结果如图1所示，益母草与鸡血藤及其配伍对DPPH·清除率中益母草-鸡血藤(1∶3)时清除率最高，按顺序排列可为益母草-鸡血藤(1∶3)>鸡血藤>益母草-鸡血藤(1∶4)>益母草-鸡血藤(1∶2)>益母草-鸡血藤(1∶1)>益母草-鸡血藤(3∶1)>益母草-鸡血藤(2∶1)>益母草-鸡血藤(4∶1)>益母草,益母草-鸡血藤(1∶3)为最佳配比，阳性对照维生素C抗氧化能力最高。

图1 醇提取液DPPH自由基清除率

采用水提的实验结果如图2所示，益母草与鸡血藤及其配伍对DPPH·清除率中益母草-鸡血藤(1∶3)时清除率最高，按顺序排列可为益母草-鸡血藤(1∶3)>维生素C>益母草-鸡血藤(1∶1)>益母草-鸡血藤(3∶1)>益母草-鸡血藤(1∶2)>益母草-鸡血藤(2∶1)>益母草-鸡血藤(4∶1)>益母草-鸡血藤(1∶4)>鸡血藤>益母草,益母草-鸡血藤(1∶3)为最佳配比，益母草-鸡血藤(1∶3)抗氧化能力最高。

图2 水提取液DPPH自由基清除率

3.2 螯合铁离子的测定结果 采用醇提的实验结果如图3所示，益母草与鸡血藤及其配伍对铁离子螯合能力测定中益母草-鸡血藤(1∶4)时清除率最高，按顺序排列可为益母草-鸡血藤(1∶4)>益母草-鸡血藤(2∶1)>益母草-鸡血藤(1∶3)>益母草-鸡血藤(3∶1)>益母草-鸡血藤(1∶2)>益母草-鸡血藤(1∶1)>鸡血藤>益母草-鸡血藤(4∶1)>益母草,益母草-鸡血藤(1∶4)为最佳配比，阳性对照抗氧化能力最高。

图3 醇提取液铁离子螯合能力的测定

采用水提的实验结果如图4所示，益母草与鸡血藤及其配伍对铁离子螯合能力测定中益母草-鸡血藤(1∶3)时清除率最高，按顺序排列可为益母草-鸡血藤(1∶3)>鸡血藤>益母草-鸡血藤(1∶1)>益母草-鸡血藤(2∶1)>益母草-鸡血藤(1∶4)>益母草-鸡血藤(1∶2)>益母草-鸡血藤(4∶1)>益母草>益母草-鸡血藤(3∶1),益母草-鸡血藤(1∶3)为最佳配比，阳性对照维生素C抗氧化能力最高。

图4 水提取液铁离子螯合能力的测定

4 讨论

益母草的主要成分有生物碱类、黄酮类、酚酸类、苯丙素类、环烯醚萜苷类等。李承平等在探究益母草有效成分配伍在抗大鼠心肌缺血再灌注损伤作用的研究中提到益母草具有活血调经，利尿消肿，清热解毒之功效[7]。鸡血藤的化学成分主要有黄酮类、蒽醌类、三萜类、酚酸类、木脂素类、甾醇类及苷类等化合物，且黄酮类化合物为其主要活性成分[8]。官杰等[9]在研究鸡血藤防治动脉硬化相关药理作用的研究进展中，药理学表明，鸡血藤及其有效成分具有抗血小板聚集、调节血脂、抗炎、抗氧化等与抗动脉硬化相关的药理活性。鸡血藤与益母草及其提取物有广泛的药理活性。

实验结果表明，益母草-鸡血藤(1∶3)为最优对象，通过抗氧化能力比较，在DPPH·清除能力的测定时显示，95%的乙醇提取液的抗氧化能力比蒸馏水提取液的抗氧化能力高。而铁离子螯合能力测定时醇提和水提未发现明显差异。在益母草-鸡血藤(1∶1)，益母草-鸡血藤(1∶2)，益母草-鸡血藤(1∶3)抗氧化能力呈现上升趋势，在益母草-鸡血藤(2∶1)，益母草-鸡血藤(3∶1)及益母草-鸡血藤(4∶1)抗氧化能力呈现下降趋势，本实验研究结果表明鸡血藤与益母草均有抗氧化作用，且不同比例配伍还有明显的协同作用。