比格犬全身动脉铸型标本的制作方法

李长征 郑和平

1（福建中医药大学 中西医结合学院，福州350122）

2（南京军区福州总医院 比较医学科，福州350025）

比格犬（Beagle），是猎犬种较小的一种。在以犬为实验动物的研究成果中，只有应用比格犬才能被国际公认。比格犬由于体形较小，易于驯服和抓捕，外型可爱，性格开朗，动作惹人喜爱，日渐受到人们的欢迎而成为家庭犬。铸型标本制作法是指为了研究管腔脏器，特别是血管系统复杂的立体构筑，往管腔内注入某种物质，待硬化后将组织腐蚀清除，仅留下填充物的方法［1］。为了更能清楚的显示比格犬全身血管的立体构造，本文用过氯乙烯填充剂制作了比格犬全身动脉铸型标本，为科研实验人员和兽医提供更为直观的比格犬血管解剖学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

比格犬1条，雌性，体质量12 kg，由南京军区福州总医院比较医学科提供。

1.2 试剂和器材

过氯乙烯、乙酸乙酯、戊巴比妥钠、硫化钠、肝素钠、浓盐酸、生理盐水；止血钳、手术刀、手术剪、镊子、腐蚀槽、20ml塑料注射器、玻璃插管等。

1.3 实验方法

采用溶剂挥发凝固成型法，其原理和填充剂的配制及注意事项参见文献［1］，文中解剖学名词按文献［2］。

1.3.1 比格犬的麻醉、处死和脱毛 将比格犬固定在手术台上，按50 mg／kg经腹腔注射体积分数3%戊巴比妥钠，待比格犬进入麻醉状态后，切开左侧颈部皮肤，探查左颈外静脉及颈总动脉，用注射器于左颈外静脉向心方向缓慢注射肝素钠12 500U（用氯化钠注射液稀释至5ml），5 min后纵行切开左颈总动脉放血致死，用棉球蘸取8%硫化钠溶液［3］涂抹比格犬全身，10 min后用水冲洗脱落的皮毛，用纱布擦干。

1.3.2 插管与灌注 在左颈总动脉、右股动脉离心和向心方向分别插管，并用缝合线结扎固定，用剪刀剪开左颈外静脉；用止血钳夹住右股动脉向心方向插管，于左颈总动脉向心方向插管处用生理盐水快速冲洗，直至左颈外静脉流出清亮液体后，停止冲洗血管。将比格犬放置在一长、宽尺寸比其稍大有5cm高的边栏并打孔的有机玻璃板上，在有机玻璃板的两头各穿入一条耐腐蚀的尼龙绳，以方便搬动标本。往左颈总动脉和右股动脉向心、离心方向插管分别灌注红色20%过氯乙烯填充剂80ml、30ml、50ml、20ml，首次总灌注量为180ml左右，首次灌注后每4～6h进行一次补注，共补注4～5次，补注用25%过氯乙烯填充剂，补注的量逐渐递减，总共补注150～200ml。

1.3.3 腐蚀与冲洗 标本补注后，将标本在20℃左右环境下放置5 d，待过氯乙烯填充剂充分硬固后，将标本连同有机玻璃板放入盛有浓盐酸的腐蚀槽中腐蚀，1周后，拿出用流水冲洗，待组织冲洗干净后，放置于0.5%NaOH溶液中浸泡24 h，再用流水冲洗12h以上，取出晾干，将血管的断口用浓度为25%过氯乙烯粘接起来。酌情进行疏密打枝等处理，封瓶保存。

2 结果

比格犬全身动脉铸型外观完整美观，血管的整体性和连贯性好，立体感强，能充分显示比格犬全身动脉的分支分布和走行途径；各管道饱满，粗细、疏密合理，色泽鲜艳。四肢动脉和肋间动脉、腰动脉被充分铸型出来；心、肺、肝、肾、脾、肠管等血管被充分铸型出来；耳朵、鼻子、唇部、眼睑、尾巴轮廓被完整保留下来，其基本轮廓一目了然（图1）。

图1 比格犬全身动脉铸型（侧面观）

3 讨论

3.1 脱毛剂的选择

毛发具有耐酸耐碱，常规的腐蚀剂难以将其完全腐蚀。若腐蚀前未行脱毛处理，标本腐蚀后，未完全腐蚀的毛发粘附在铸型支上，难以冲洗，严重影响铸型标本的质量。犬全身脱毛方法有剪毛法、水烫脱毛法、剥皮法和硫化钠脱毛法［3］。剪毛法费时，脱毛不彻底且易将皮肤剪破；烫水脱毛水温不易控制，水温过低无法脱毛，水温过高容易造成皮肤烫伤；剥皮法造成表层血管破裂，不宜灌注；硫化钠脱毛彻底，操作简单，且不会对皮肤造成损伤；因此脱毛宜首选硫化钠脱毛。

3.2 抗凝剂的使用

未经抗凝处理的比格犬血在体外和死后较短时间内就凝结成块，灌注过氯乙烯时，易使凝块堵塞中、小动脉，使过氯乙烯无法到达细小动脉，导致铸型支缺失不完整，甚至失败。因此，灌注前要对犬抗凝处理，具体做法是在未放血前，先从左颈外静脉注射肝素钠，使全身的血液具有抗凝作用，再纵行切开左颈总动脉放血致死，并于左颈总动脉插管处用生理盐水快速冲洗，使犬血液不凝固始终保持液态，且能将血管内残留血液全部排出体外，保证了过氯乙烯能达到各细小动脉，使铸型完整。

3.3 插管部位选择

比格犬全身动脉铸型标本的插管部位既可选择大鼠全身动脉铸型标本插管部位，即经左心室至升主动脉基部插管［4］；也可选择人体全身动脉铸型标本多点插管，即经双侧颈总动脉、股动脉双向插管［5］。升主动脉基部插管容易，不易损伤其他血管，但心脏及肺脏血管铸型缺失，此外，比格犬全身血管行程相对较长，单一的升主动脉插管过氯乙烯难以到达四肢末梢血管，四肢的血管铸型很难完整成形，而内脏血管铸型则过于细密，观察不清血管构筑形式，且易破裂，影响铸型的整体观；双侧颈总动脉、股动脉多点双向插管灌注，全身各部位的动脉灌注均较饱满，血管显示比较清楚均匀，整体外观较完整，此法较适合人体解剖学姿势的全身血管铸型，比格犬全身动脉铸型采用此法需仰卧位灌注，较难保持比格犬的正常解剖学姿势，要保持比格犬的正常解剖学姿势需侧卧位，因此在保证比格犬正常的解剖学姿势情况下，相对于人体全身血管行程，比格犬全身血管行程相对较短，在左颈总动脉和右股动脉双向插管也取得了较好的比格犬全身动脉铸型标本。

3.4 填充剂的选择

制作铸型标本常用的填充剂有过氯乙烯和自凝牙托材料，过氯乙烯灌注流动性较好，易达细微血管；铸型支支撑性好，具有较好的韧性，不易折断；配置简单，易操作；不足之处是收缩率高，需要补注，较大血管的铸型不够饱满。自凝牙托材料一次完成灌注，收缩率低，不需补注；外形饱满、美观；缺点是铸型支较脆、韧性较差，不易后期修剪。比格犬的全身血管行程较长，管道较细，因此宜选用流动性和韧性较好的过氯乙烯灌注。若要使比格犬主动脉铸型更加饱满，可于过氯乙烯补注4～5次后，用自凝牙托材料在颈总动脉和股动脉向心方向插管进行大干血管补注。

3.5 灌注量及灌注压力的控制

灌注量太多，压力太大，容易使铸型较密，观察不清血管构筑形式，且易造成管壁破裂，导致填充剂渗入组织间隙，影响整个铸型的质量。左颈总动脉、右股动脉向心和离心方向总灌注的量分别为160ml、60ml、100ml和40ml。

［1］李忠华，王兴海.解剖学技术［M］.第二版.北京：人民卫生出版社，1997.123－183.

［2］安铁洙，唐建华，韦旭斌.犬解剖学 ［M］.长春：吉林科学技术出版社，2003.

［3］施新猷.现代医学实验动物学［M］.北京：人民军医出版社，2000.304－306.

［4］李长征，郑敏麟，张文光，等.大鼠全身动脉铸型标本的制作［J］.实验动物与比较医学，2009，29（3）：196－197.

［5］洪辉文，吴坤成，李泽宇，等.全身动脉铸型制作方法的改进［J］.中国临床解剖学杂志，2007，25（4）：478－479.